丹酚酸B通过抑制IL-13/STAT6通路和恢复Th17/Treg平衡阻滞大鼠慢性阻塞性肺病研究

目的:探究丹酚酸B对慢性阻塞性肺病的作用及其可能的机制。方法:将40只SD大鼠随机分为对照组、模型组、丹酚酸B组和阳性对照组,每组10只。除对照组外,其余组大鼠采用烟熏联合气管内滴注脂多糖法建立慢阻肺大鼠模型。丹酚酸B组和阳性对照组腹腔注射丹酚酸B(50 mg/kg)和地塞米松(0.2 mg/kg),其余组注射生理盐水。AniRes2005动物肺功能分析系统检测各大鼠肺功能改变;大鼠肺水肿情况使用大鼠肺组织湿/干重比(W/D)检测;HE染色检测大鼠肺组织病理学变化;AB-PAS染色检测各组大鼠肺组织杯状细胞增生;免疫组化检测大鼠肺组织MUC5AC表达;Western blotting检测大鼠肺组织MUC5AC、RORγt、Foxp3和IL-13/STAT6通路中IL-13蛋白和STAT6(p-STAT6/STAT6)磷酸化水平;ELISA检测肺泡灌洗液(BALF)中TNF-α、TGF-β、IL-6、IL-10和IL-17A水平。结果:与对照组相比,模型组、丹酚酸B组和阳性对照组大鼠肺功能明显降低(P<0.05),W/D比值、肺组织病理学评分、AB/PAS阳性率明显升高(P<0.05),MUC5AC、RORγt、IL-13和p-STAT6/STAT6表达明显升高(P<0.05),肺泡灌洗液(BALF)中TNF-α、TGF-β、IL-6和IL-17A水平明显升高(P<0.05),Foxp3表达和IL-10水平明显降低(P<0.05);而与模型组相比,丹酚酸B组和阳性对照组大鼠肺功能明显改善(P<0.05),W/D比值、肺组织病理学评分、AB/PAS阳性率显著下降(P<0.05),MUC5AC、RORγt、IL-13和p-STAT6/STAT6表达明显降低(P<0.05),TNF-α、TGF-β、IL-6和IL-17A水平明显降低,Foxp3表达和IL-10水平明显升高(P<0.05)。结论:丹酚酸B可能通过抑制IL-13/STAT6通路和恢复Th17/Treg平衡对慢阻肺大鼠发挥保护作用。

基质金属蛋白酶对大鼠慢性阻塞性肺病模型气道细胞外基质重塑的作用及影响因素

目的:研究基质金属蛋白酶(MMPs)及其组织抑制剂(TIMP-1)在慢性阻塞性肺病(COPD)大鼠模型气道细胞外基质重塑中的作用及 N-乙酰半胱氨酸(NAC)、蛋白激酶 C 抑制剂 H7及转移生长因子(TGF-β)单抗干预的影响。方法:Wistar 大鼠随机分为(1)对照组;(2)COPD 模型组,采用熏香烟加气管注小量内毒素法复制 COPD 模型;(3)NAC 干预组(NAC 组);(4)H7干预组(H7组);(5)TGF-β单抗干预组。观察各组病理形态学改变;生化法测定支气管肺组织羟脯氨酸含量;免疫组化法和 RT-PCR 法测支气管肺组织 MMP-9、2及 TIMP-1,以及 TGF-βⅠ、Ⅱ受体的表达;SDA-PAGE 明胶酶谱学测定支气管肺组织 MMPs 酶活性。结果:模型组气道壁以Ⅰ型胶原为主的细胞外基质及羟脯氨酸含量较对照组显著增多,NAC 组及 TGF-β单抗组较模型组显著减少,H7组羟脯氨酸含量较模型组显著增多。模型组 MMP-9、2及 TIMP-1,以及 TGF-βⅠ、Ⅱ受体在气道上皮、肺泡巨噬细胞、肺血管内皮细胞等细胞中蛋白和(或)mRNA 表达显著增强,72 kdMMP-2及92 kdMMP-9酶原活性显著增高,三个干预组 MMP-2、9及 TIMP-1的蛋白及 mRNA 表达较模型组显著减弱,72 kdMMP-2及92 kdMMP-9酶原活性显著减低,三个干预组TGF-βⅠ、Ⅱ受体亦较模型组有不同程度减弱。结论:以Ⅰ型胶原为主的细胞外基质显著增生是 COPD 气道重塑的重要病理改变。COPD 气道细胞外基质降解及合成代谢异常活跃与气道细胞外基质重塑密切相关;NAC 可对 MMP-9/TIMP-1的失衡起调节作用,其表达及功能在一定程度上依赖 PKC 信号传导途径。抑制 TGF-β传导通路可能使胶原等细胞外基质降解及合成减少。

清热化痰法对AECOPD大鼠血清中性粒细泡弹性蛋白酶水平的影响研究

目的:初步探究清热化痰法指导下的蒌芩止嗽煎对慢性阻塞性肺病急性加重期(AECOPD)大鼠血清中性粒细胞弹性蛋白酶水平的影响。方法:建立大鼠AECOPD模型,60只AECOPD大鼠模型随机分为模型对照组(20只)、氨溴索组(20只)、蒌芩止嗽煎组(20只),用酶联免疫吸附法(ELISA)测定AECOPD大鼠模型治疗前后血清中中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)指标。结果:蒌芩止嗽煎组、氨溴索组治疗后与治疗前比较,NE均有明显下降(P<0.01)。结论:清热化痰法指导下的蒌芩止嗽煎初步研究是通过降低NE水平,从而减少AECOPD大鼠模型的气道黏液高分泌,减轻气道阻塞。