大鼠永久性大脑中动脉阻塞模型的建立

目的建立稳定可靠的线栓法大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)永久性脑缺血模型。方法对Koizumi和ZeaLonga模型构建方法加以改进。40只雄性SD大鼠随机均分为实验组和假手术组,分别进行模型制作和模型缺血的评价,采用2,3,5-氯化三苯四氮唑(2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色来计算大鼠脑梗死体积。结果大鼠MCAO模型制作成功率为95%;神经功能缺失评分1～3级百分率为95%。结论实验所采用的改良术式构建大鼠MCAO模型具有稳定性好、可重复率高、操作简便和手术时间短等优点,为基于大鼠永久性脑缺血模型开展的下游相关实验提供了良好的研究平台。

大鼠大脑中动脉永久性缺血和缺血再灌注模型的比较

目的:比较大鼠大脑中动脉永久性阻塞模型和缺血再灌注模型的差异,寻找一种制作简单,成功率高的脑缺血模型。方法:将150只SD雄性大鼠随机分为:永久性大脑中动脉阻塞60只,线栓阻塞大脑中动脉4h、8h、24h后生理盐水灌注后取脑;大脑中动脉缺血再灌注60只,线栓阻塞大脑中动脉100min后,拔出线栓形成再灌注,分别在再灌注4h、8h、24h后灌注取脑;对照组30只。比较模型制作的成功率、术后存活率、神经功能缺失评分、脑梗死体积及模型稳定性。结果:脑缺血再灌注组模型成功率高于永久性脑缺血组,差异有统计学意义(P<0.05);永久性脑缺血模型组死亡率较脑缺血再灌注模型组死亡率有升高趋势,但无统计学意义;TTC染色:永久性大脑中动脉阻塞梗死灶随着缺血时间的延长逐渐扩大,大脑中动脉缺血再灌注梗死灶随再灌注时间的延长无明显变化;结论:大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型手术方式简单、结果稳定、缺血时间可控,是一种较理想的模拟脑梗死的动物模型。

Wistar大鼠永久性局灶性大脑中动脉阻断脑缺血新模型的建立

在Ｗｉｓｔａｒ大鼠用改良的开颅方法两点阻断大脑中动脉，建立一个新的永久性局灶性脑缺血模型（ＰＭＣＡＯ）。通过大鼠脑梗塞后神经功能状况的观察，明胶－墨汁灌注、ＴＴＣ染色计算机图像分析及病理形态学的方法对模型进行研究评价。Ｗｉｓｔａｒ大鼠大脑中动脉阻断后２４ ｈ，神经功能为２级；模型组梗塞面积稳定，占对侧面积５７±５％，其梗塞灶位于脑皮质和纹状体外侧；病理形态学表现为典型的缺血性改变。结果表明，用本方法阻断大脑中动脉，阻断确切，梗塞灶的大小、位置恒定。这一模型为局灶性脑缺血机制的研究以及治疗药物的疗效观察提供了一个可重复、稳定可靠的动物模型。

通督调神灸对大脑中动脉阻塞大鼠学习记忆及轴突再生的影响

目的:探究通督调神灸干预对大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)大鼠海马神经元凋亡、学习记忆及轴突再生的影响。方法:将SD大鼠45只随机分为3组:假手术组、模型组和通督调神灸组,15只/组。除假手术组外其他两组大鼠进行MCAO造模。造模后,对通督调神灸组取“百会穴”进行温和灸,20 min/次,1次/d,共7 d。采用Morris水迷宫观测大鼠学习记忆能力,micro-MRI扫描观察大鼠脑梗死体积,免疫组化和免疫荧光观察大鼠轴突再生标志性蛋白GAP-43表达情况,Western Blot检测Cofilin的表达。结果:与模型组相比,通督调神灸组和假手术组的水迷宫逃避潜伏期短,穿越平台次数增加,micro-MRI扫描结果发现通督调神灸组脑梗死体积百分比小于模型组,通督调神灸组的平均光密度明显高于模型组,模型组和通督调神灸组的红色荧光(GAP-43)强度均明显高于假手术组,通督调神灸组Cofilin表达量较模型组降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:通督调神灸有利于减轻MCAO大鼠的神经功能缺损程度,减少脑梗死体积,抑制脑梗死区域神经元凋亡,同时抑制Cofilin表达,促进神经元轴突再生,促进学习记忆功能恢复。

构建大脑中动脉阻塞脑缺血模型大鼠的类型分析

背景:线栓法造成短暂性大脑中动脉阻塞是研究大鼠局灶性脑缺血普遍使用的模型制作方法。但制作大鼠脑缺血模型的类型存在一定差异,可能导致实验结果的偏差。目的:分析大脑中动脉阻塞线栓法制作大鼠脑缺血模型的类型及其影响因素。方法:雄性SD大鼠166只,参照Longa线栓法造模,术后24h行MRI扫描,根据扫描结果将大鼠分成皮质梗死组、皮质下梗死组及无梗死组,分析造模时线栓插入的深度。结果与结论:皮质梗死组、皮质下梗死组和无梗死组大鼠的线栓插入深度分别为(19.9±0.9),(19.0±1.1)和(17.7±1.3)mm,皮质梗死组大鼠的线栓插入最深,而无梗死组的线栓插入最浅(P<0.01)。提示插入深度不同导致的大鼠脑梗死的类型也不同,线栓插入越深,皮质梗死的概率可能越大。

改良大鼠大脑中动脉阻塞模型的建立

目的建立稳定、可靠的大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)改良模型。方法将60只SD雄性大鼠随机分为实验组和对照组,每组30只。实验组采用改良方法制作MCAO模型;对照组采用Longa传统方法制作模型。比较两组模型制作的成功率、脑梗死体积及模型稳定性。结果改良后的大鼠MCAO模型制作成功率和脑梗死体积分别为82·8%、(46±7)%,与对照组的89·3%、(48±7)%比较,差异无显著性(P>0·05)。实验组脑梗死体积变异系数为15·94%,对照组为16·21%,两组的模型稳定性相近。结论改良的大鼠MCAO模型是一种稳定性好、成功率高的脑缺血-再灌注模型。

补阳还五汤精简方对大脑中动脉阻塞模型大鼠海马组织Cdk5的调控

目的评价补阳还五汤精简方对大脑中动脉阻塞(MCAO)模型大鼠海马组织周期素依赖性蛋白激酶5(cyclin-dependent kinase 5,Cdk5)的调控。方法将♂SD大鼠随机分为假手术组、MCAO模型组、补阳还五汤干预组(灌胃3.15 g·kg^(-1))及补阳还五汤精简方干预组(灌胃2.41 g·kg^(-1)),每组按给药后1、3、7、14、28 d再各分5小组。采用免疫组化法、Western blot法和RT-PCR法考察不同时间点各组大鼠海马组织中Cdk5的表达。结果 MCAO模型大鼠海马组织中,脑缺血后1 d即出现Cdk5上调趋势,并随着脑缺血的加剧,Cdk5的表达继续上调,其中mRNA及蛋白水平在7~14 d达最大,28 d则出现下降趋势,与各时间点假手术组比较P<0.01,提示脑缺血损伤将激活Cdk5信号转导途径;补阳还五汤精简方干预后的3、7、14、28 d均能明显降低Cdk5的表达,与各时间点模型组比较P<0.05,且随着干预时间的延长,下调趋势越明显,干预28 d后,Cdk5的表达接近假手术组,提示补阳还五汤精简方可下调Cdk5的异常表达,与补阳还五汤原方比,两方对Cdk5的调控差异无统计学意义(P>0.05)。结论补阳还五汤精简方可能通过调控Cdk5的表达水平对脑缺血海马组织发挥保护作用。

线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞模型的体会

线栓法大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型被普遍认为是脑缺血标准动物模型。该模型在制备过程中,易受到多重因素的影响。文章从血管解剖位置、插线的制备、切口位置、插线深度及翼腭动脉结扎等角度,对模型塑造过程中发现的现象与问题进行论述。

线栓法制作大鼠大脑中动脉阻塞模型的研究

目的探索一种用线栓法制作稳定的大鼠单侧大脑中动脉阻塞(MCAO)模型的简易方法。方法不分离结扎翼腭动脉(PPA),用3种不同的线栓即头端未处理的鱼线、指甲油处理的鱼线和特制的尼龙线栓,分别经大鼠的颈总动脉(CCA)和颈内动脉(ICA)插线,分析不同种类线栓和插线部位对大鼠单侧MCAO手术的插线时间及建立MCAO模型成功率的影响;观察2种不同插线部位和结扎颈外动脉(ECA)与否对大鼠MCAO建模成功率的影响。结果3种线栓的插线时间比较差异无统计学意义(P=0.397);未处理的鱼线的建模成功率低于指甲油处理的鱼线和特制的尼龙线栓(P=0.001),而后2种线栓的建模成功率比较差异无统计学意义(P=0.626);经CCA插线时间明显低于经ICA插线时间(P=0.002);两者的建模成功率比较,差异无统计学意义(P=0.441);2种不同部位插线的建模成功率比较及结扎ECA和未结扎ECA的建模成功率比较,差异均无统计学意义(均P=0.694)。结论采用指甲油处理头端的鱼线,结扎ECA经CCA插线可以简单快捷地建立稳定的大鼠单侧MCAO模型。

改良法制作SD大鼠大脑中动脉栓塞永久模型

目的探讨一种创伤小、操作简便、稳定性好、重复性强的大鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）永久模型制作方法。方法改良法制作18只SD大鼠永久性MCAO模型，3h、24h进行神经功能评分、核磁共振检查，24hTTC染色检测梗死面积并计算梗死面积／半球面积及其变异系数。结果3h、24h神经功能评分分别为1.83±0.61和3.00±1.19；MEI示梗死面积随时间延长而增大；24hTTC染色示梗死面积／半球面积为（0.40±0.12）％，变异系数为0.3；模型成功率94.44％。结论该法制作MACO永久模型，操作简单、稳定性和重复性好、模型成功率高。

大鼠大脑中动脉阻塞再灌注模型改良的实验研究

目的通过对大鼠大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)再灌注模型神经功能缺失评分的计算和脑梗死体积的测量,评价改良的大鼠MCAO再灌注模型,为实验研究提供可重复性好、稳定可靠的动物模型。方法20只SD大鼠随机分为A、B两组,A组用头端烧制成圆球的传统"圆头线栓",B组采用头端用万能胶包裹成梭形膨大的改良"梭头线栓"制作大鼠MCAO模型,阻断大脑中动脉血供3h后将"线栓"拔出,造成再灌注损伤。采用"盲法"分别于再灌注10min和再灌注24h对大鼠进行神经功能缺失评分;再灌注24h后处死大鼠,脑切片TTC染色,数码相机照相,采用图像分析系统测量脑梗死体积比;根据统计结果评价改良的MCAO再灌注模型,分析MCAO再灌注后神经功能缺失评分与脑梗死体积比之间的关系。结果B组大鼠脑梗死体积比大于A组(P<0.01);B组大鼠脑梗死体积比明显较A组稳定,变异系数(coefficient of variation,CV)分别为CVB=0.12,CVA=1.08);再灌注10min和再灌注24h对大鼠进行神经功能缺失评分,B组评分均高于A组(P<0.05);MCAO再灌注模型大鼠神经功能缺失评分与脑梗死体积比的大小成线性相关关系(r=0.873,P<0.01)。结论采用改良的"梭头线栓"制作MCAO再灌注模型,神经功能缺失评分和脑梗死体积比变异度小、稳定性高,是可靠的制模方法;神经功能缺失评分能反映脑梗死的严重程度,可用作评价药物疗效的指标。

脑络欣通对大脑中动脉阻塞再灌注模型大鼠神经干细胞增殖分化的影响

目的观察脑络欣通对大脑中动脉阻塞再灌注(middle cerebral artery occlusion-reperfusion,MCAO-R)模型大鼠神经干细胞增殖分化的影响。方法采用线栓法复制MCAO-R大鼠模型,将30只健康雄性SD大鼠随机分成假手术组、模型组和给药组。分别采用神经功能评分和TTC染色鉴定模型大鼠的神经功能缺损和脑缺血面积,采用免疫荧光染色法观察大鼠海马CA1、CA2、CA3、齿状回(dentate gyrus,DG)区巢蛋白(Nestin)和神经丝蛋白-H(hypophosphorylated neurofilament-H,NF-H)表达水平。结果给药组Nestin阳性表达主要发生在DG区,NF-H阳性表达主要发生在CA3区。脑络欣通促进神经干细胞增殖的作用在DG、CA1、CA2、CA3区均十分明显,以DG区尤为突出,促进神经干细胞分化的作用主要表现在CA3、DG、CA2、CA1区。与模型组比较,给药组大鼠海马各区的Nestin、NF-H阳性细胞均明显增多,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论脑络欣通具有促进海马区神经干细胞增殖并分化为神经细胞的作用。

蒙成药额日敦-乌日勒对大脑中动脉阻塞再灌注模型(MCAO/R)大鼠血清及脑组织IL-6、IL-1β的影响

目的:探讨额日敦-乌日勒对大脑中动脉阻塞再灌注模型(MCAO/R)大鼠血清及脑内IL-6、IL-1β的影响。方法:选取144只wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、对照组、额日敦-乌日勒低、中、高剂量组共6组。除假手术组外其他组采用改良Zea-longa法,建立MCAO/R模型。手术造模成功后24h开始灌胃给药,治疗组(额日敦-乌日勒125mg/kg、额日敦-乌日勒250mg/kg、额日敦-乌日勒500mg/kg),对照组(血塞通236.25mg/kg)。假手术组、模型组wistar大鼠每日一次灌胃纯净水。分别再灌注1、3、7天给药后行神经功能评分、心脏取血、断头取脑组织。采用ELISA法检测血清、脑组织IL-6、IL-1β的含量进行统计学分析。结果:wistar大鼠再灌注1、3、7天模型组与假手术组相比血清、脑组织IL-6、IL-1β含量均明显升高,具有统计学意义(P<0.01)。再灌注1天额日敦-乌日勒各组和血塞通组与模型组相比血清、脑组织IL-6、IL-1β含量无明显差异,无统计学意义(P>0.05)。再灌注3、7天额日敦-乌日勒各组和血塞通组与模型组相比血清、脑组织IL-6、IL-1β含量明显降低,具有统计学意义(P<0.01)。再灌注3、7天额日敦-乌日勒高剂量组与血塞通组相比明显降低,具有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论:额日敦-乌日勒治疗缺血型脑卒中有一定的疗效,其作用途径可能是通过抑制IL-6、IL-1β的表达而起到神经功能恢复的作用。

脑络欣对大脑中动脉阻塞再灌注模型大鼠海马区细胞层面的影响

目的:观察脑络欣通对大脑中动脉阻塞再灌注(Middle cerebral artery occlusion and reperfusion,MCAO-R)大鼠海马区细胞层面的作用机制与效应。方法:将30只大鼠编号称体质量、记录、计算麻醉剂用量后随机分为假手术组6只和手术组24只。手术组大鼠采用线栓法造模,将造模成功的大鼠随机分为模型组和给药组,每组各12只。造模后第1天,予给药组大鼠脑络欣通溶液1 mL·kg^(-1)灌胃,假手术组和模型组予等量生理盐水灌胃,共7 d。制备大鼠脑组织石蜡切片并进行HE染色。结果:假手术组大鼠脑组织缺血面积为0,模型组和给药组脑缺血面积百分比比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。模型组细胞排列散乱,锥体细胞数量减少,胶质细胞增生明显;给药组锥体细胞排列比较规则,在多个区域数量明显增多,甚至有迁移现象,偶见胶质细胞。结论:脑络欣通对大脑神经细胞不仅有促进增殖和分化的作用,而且能够促进神经干细胞在增殖分化后迁移,海马CA1、CA3区尤其明显,以替代缺血区损伤及死亡神经细胞,从而改善神经功能,促进脑功能的恢复。

线栓法大鼠大脑中动脉阻塞脑缺血-再灌注模型行为学特点及其与梗死体积关系分析

目的分析线栓法大脑中动脉阻塞(MCAO)脑缺血—再灌注模型大鼠的行为学特点,及其与梗死体积的关系。方法选择成年健康雄性SD大鼠108只,通过线栓法制作大脑中动脉阻塞后脑缺血—再灌注模型,阻塞100 min后拔除线栓再灌注,MCAO术后24 h行核磁共振扫描明确梗死部位并计算梗死灶体积,依据是否存在梗死灶及梗死灶部位将大鼠分为:皮质及基底节梗死组(CBG组,n=53)、基底节梗死组(BG组,n=29)及无梗死组(N1组,n=26)。应用Bederson评分,横木行走实验及足失误测试对大鼠MCAO术后24h的神经功能损害程度进行评价,并分析3组大鼠行为学评分及其与梗死体积的相关性。结果 NI组、BG组的Bederson评分明显低于CBG组(q=4.56、4.32,P均<0.01),而BG组及NI组评分差异无统计学意义(q=0.42,P=0.897);NI组、BG组的横木行走实验评分明显高CBG组(q=4.22、3.98,P<0.01),而BG组及NI组评分差异无统计学意义(q=0.24,P=0.101);NI组、BG组的足失误率明显低于CBG组(q=3.68、3.24,P<0.05),而BG组及NI组足失误率差异无统计学意义(q=0.46,P=0.830)、CBG组脑梗死体积明显大于BG组脑梗死体积,差异有统计学意义[(276.05±90.11)mm^3 vs.(60.03±25.17)mm^3,t=15.856,P<0.01],大鼠Bederson评分、横木行走实验及足失误测试中的行为学评分与其梗死体积之间均无线性相关性(CBG组:r=-0.149、-0.231、-0.186,P=0.308、0.111、0.249;BG组:r=0.187、-0.332、0.291,P=0.381、0.113、0.168)。结论通过线栓法制作大鼠大脑中动脉阻塞脑缺血-再灌注模型可出现2种行为学表现差异显著的梗死类型,且各个类型的行为学评分与其梗死体积大小不呈正比。

两种线栓制备法制作大鼠大脑中动脉阻塞再灌注损伤模型的研究

目的评价两种制备线栓的方法,为脑缺血实验研究提供稳定可靠的动物模型。方法 30只SD雄性大鼠(250～280 g)随机分成两组各15只,第一组采用Zea Longa流派(线栓头端加热成球形),第二组采用Koizumi流派(线栓头端用胶包裹),两种线栓制备法分别制作大鼠大脑中动脉阻塞再灌注损伤模型,观察手术时间、神经功能评分,计算梗死百分比,并分析神经功能评分和脑梗死体积比之间的关系,对两种线栓制备法模型的成功率与稳定性进行评价。结果两组在神经功能评分、脑梗死体积比差异无统计学意义(P>0.05);两组模型的稳定性相近;神经功能评分与脑梗死体积比之间存在相同变化趋势;第二组操作时间少于第一组,两组之间的差异具有统计学意义(P<0.01)。结论第二组的线栓制备法线栓头采用密封胶包裹,线栓头大小容易控制,较第一组线栓头端加热成球形所需时间短,且易操作。

改良法大鼠大脑中动脉阻塞再灌注模型的制备与效果评价

目的通过改进大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)/再灌注模型的制备方法,解决模型稳定及延长存活时间问题。方法改良方法:1将10%的水合氯醛浓度降至3.6%;2将胸骨舌骨肌—胸锁乳突肌间隙入路改为胸骨舌骨肌手术入路;3将颈外动脉(ECA)结扎或血管夹闭法改为颈内动脉(ICA)盲插结合夹镊法;4将120 min缺血再灌注并缝合皮肤时间减少至80 min。改良前、后行对照研究。结果建模后改良组中13.6%水合氯醛组比10%组安全范围宽,追加麻醉后死亡率低;2胸骨舌骨肌手术入路组较胸骨舌骨肌—胸锁乳突肌间隙入路组手术视野宽,血管暴露更好,出血量少,手术时间短;3调整角度后,颈内动脉(ICA)盲插结合夹镊法操作简单,较颈外动脉(ECA)结扎或血管夹闭法创伤轻,操作简便省时,且较单一盲插法成功率高;480 min行缺血再灌注(拔除线栓)比120 min者因麻醉苏醒挣扎而产生的二次损伤少。结论改良模型稳定,存活时间延长,能够保证神经干细胞移植方面的研究条件。

基于大鼠大脑中动脉阻塞模型的DTI研究进展

大鼠脑卒中模型具有诸多优点,其中大脑中动脉阻塞(MCAO)模型以其手术简单、成功率高、不影响脑缺血后脑水肿和颅内压等病生理变化,已广泛应用于局灶性脑缺血的研究。一些基于MCAO模型的神经放射学技术,如扩散张量成像(DTI),能够在活体状态下,评价脑缺血后大脑功能和结构的时间与空间上的改变,这有助于揭示脑卒中后的病生理过程。传统DTI能够评价组织结构完整性和白质连接,而一些DTI新技术,如扩散波谱成像(DSI)、Q-ball成像和扩散峰度成像(DKI)更是提高了这项技术的应用能力。这些基于MCAO模型的MRI研究,可提供良好的手段去发现脑卒中后组织结构与功能长时间的改变,并以此为基础,研究脑缺血的转归和一些药物的疗效。就基于MCAO模型的DTI研究最新进展予以综述。

建立大鼠可逆性大脑中动脉闭塞的局灶脑缺血模型

通过应用４－０单股尼龙外科线沿颈内动脉进入颅内阻断大鼠大脑中动脉血流，制成大鼠短暂性局灶脑缺血模型。大鼠大脑中动脉阻塞后，均出现各种神经病学征象。氯化三苯四氮唑染色能清楚地显示梗塞范围。光镜和电镜观察大鼠短暂性局灶脑缺血后的病理变化，结果显示细胞超微结构的病理损害在电镜下可被观察。该实验表明此模型是比较理想的短暂性局灶脑缺血模型。

大鼠大脑中动脉缺血/再灌注模型中Caspase-3的表达

目的 研究Caspase 3在缺血性脑损伤中的作用 ,进一步探讨缺血性脑血管病的分子机制。方法 用Belayev改良的Longa线栓法制备大鼠局灶性大脑中动脉 (MCA)缺血 /再灌注模型 ,TTC染色观察梗死灶的形成 ,分别用原位杂交及免疫组化技术检测鼠脑中Caspase 3mRNA与活性蛋白的表达。结果 缺血 2小时再灌注 2 4小时 ,TTC染色见明显的梗死灶形成 ,正常脑组织、假手术组及MCAO缺血对侧脑中有少量的Caspase 3mRNA表达 ,但活性蛋白几无表达 ;再灌注 2 4小时后 ,缺血侧脑中Caspase 3mRNA表达明显增强 ,蛋白质活化增多 ,再灌注 4 8小时进一步增加。结论 细胞凋亡机制参与了缺血后迟发性神经元死亡 ,Caspase