雷公藤多甙对IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364增殖和IL-6分泌的影响

目的:观察雷公藤多甙对IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364增殖和IL-6分泌的影响,探讨其治疗类风湿性关节炎的作用机理。方法:培养大鼠滑膜细胞株RSC-364,运用CCK-8法检测不同剂量的雷公藤多甙对IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364增殖的影响,酶联免疫吸附实验检测细胞株培养上清中的IL-6的含量。结果:经过IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364,在不同浓度的雷公藤多甙的作用48h后,其增殖明显受到抑制,并呈剂量依赖性。同时各剂量组均可抑制IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364分泌炎性因子IL-6的分泌。结论:雷公藤多甙抑制IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364的过度增殖和IL-6的分泌,这可能是其治疗类风湿性关节炎的作用机理之一。

藏药十八味党参丸抑制CIA大鼠滑膜组织炎性因子表达和细胞凋亡诱导

目的通过研究藏药十八味党参丸(TEP)对CIA大鼠滑膜组织中炎性因子表达的影响,探讨对胶原诱导性关节炎的疗效及其分子作用机制。方法将雌性SD大鼠随机分为空白对照组(Control)、模型组(CIA)、雷公藤组(TP)、TEP低剂量组(TEPⅠ)、TEP中剂量组(TEPⅡ)和TEP高剂量组(TEPⅢ),每组10只。CIA模型采用卡介苗溶液及牛胶原混合免疫法建立,各组大鼠通过药物灌胃6周后,取关节滑膜组织,采用HE染色法检测滑膜组织炎症程度;ELISA法检测各组大鼠滑膜组织白细胞介素-17因子的表达水平;免疫组化法检测各组大鼠滑膜组织肿瘤坏死因子-α的表达水平;Western blot法检测各组大鼠滑膜组织半胱天冬酶-3、核转录因子kappa B、B细胞淋巴瘤-2与相关X蛋白表达水平。结果与对照组相比,CIA模型组大鼠滑膜组织有明显的炎症反应,IL-17、NF-κB和TNF-α的表达明显增加(P<0.05),caspase-3表达显著降低(P<0.05),BCL-2/BAX比值显著增高(P<0.05)。与CIA模型组大鼠相比,TP组和TEPⅢ组大鼠滑膜组织炎症反应显著减轻,IL-17、NF-κB和TNF-α表达明显降低(P<0.05),caspase-3表达显著增加(P<0.05),BCL-2/BAX比值明显降低(P<0.05)。结论 TEP通过上调CIA大鼠滑膜组织中caspase 3表达,下调IL-17、NF-κB及BCL-2/BAX比值,可改善CIA大鼠滑膜组织的炎症反应。

雷公藤多甙对IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364表达JNK1蛋白的影响

目的探讨雷公藤多甙(Tripterygium Glycosides,TG)对IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364JNK1的影响,进一步阐明雷公藤多甙治疗类风湿性关节炎的作用机制。方法运用Western-blot检测不同浓度的雷公藤多甙(0、5、10、20mg/L)对IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364JNK1蛋白的表达。结果雷公藤多甙明显地抑制IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364对JNK1蛋白的表达。结论雷公藤多甙抑制IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364对JNK1蛋白的表达,可能是其治疗类风湿性关节炎的重要作用机制之一。

甲氨蝶呤对脂多糖诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364分泌IL-17和IL-18的影响

目的:观察甲氨蝶呤对脂多糖诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364分泌IL-17和IL-18表达的影响,进一步探讨甲氨蝶呤治疗类风湿性关节炎(RA)的作用机理。方法:运用ELISA检测不同浓度的甲氨蝶呤对脂多糖诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364细胞上清液中的IL-17和-IL-18的含量。结果:甲氨蝶呤明显抑制脂多糖诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364细胞分泌炎性因子IL-17和IL-18的含量。结论:甲氨蝶呤抑制脂多糖诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364分泌IL-17和IL-18,这可能是其治疗RA的重要的作用机制之一。

脂联素调控丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶对大鼠滑膜细胞代谢能力的分子机制

目的探讨脂联素(AD)调控滑膜细胞产生炎性因子进而诱发骨关节炎(OA)。方法采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测刺激细胞的最适加药浓度;通过荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK)通路标志基因如促分裂原活化的蛋白激酶(MEK)、丝裂原活化蛋白激酶(ERK1/2)的表达变化。蛋白质印迹法(Western blot)分析AD的刺激对ERK1/2、p38的磷酸化作用;酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定AD作用后滑膜细胞炎性因子的产量。多个样本比较采用单因素方差分析。结果AD(1μg/ml)可显著对滑膜细胞产生增殖抑制作用(F=136.900、11.930,P<0.05);荧光定量PCR结果显示,与对照组比较,AD可上调MEK及ERK基因表达(1.026±0.072、2.926±0.158,t=21.910,P<0.05;0.960±0.194、5.433±0.532,t=15.810,P<0.05);Western blot结果表明,与对照组比较,AD可刺激滑膜细胞增加ERK1/2、p38的磷酸化(0.488±0.083、1.152±0.050,t=11.860,P<0.05;0.407±0.014、1.312±0.063,t=24.370,P<0.05);ELISA法结果显示,AD可显著促进由趋化蛋白引起的下游炎性因子如白细胞介素(IL)-1β、IL-6、基质金属蛋白酶(MMP)-3和MMP-13、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的产生[(15.077±0.884)、(69.947±2.950)pg/ml、(9.225±0.323)、(134.925±15.02)ng/ml、(93.055±6.073)pg/ml],与对照组比较,差异有统计学意义(t=3.239、4.838、5.312、4.366、3.292,P<0.05),与抑制剂组比较,差异有统计学意义(t=2.275、6.251、4.331、1.221、3.456,P<0.05)。结论AD可通过影响MAPK/ERK信号通路来增强滑膜细胞炎性因子的产生。

短叶松素-3-乙酸酯对佐剂性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞增殖及炎性因子表达的影响

目的探讨短叶松素-3-乙酸酯(Pinobanksin-3-acetate,PB3A)对体外培养佐剂性关节炎(AIA)大鼠成纤维样滑膜细胞(FLSs)的增殖及脂多糖(LPS)诱导的炎性因子表达的影响。方法采用灭活分枝杆菌+弗氏完全佐剂(CFA)建立AIA大鼠模型,分离并原代培养AIA-FLSs。PB3A作用于细胞后,采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western Blot法检测细胞中Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达。LPS诱导AIA-FLSs后,以PB3A干预,采用ELISA法检测细胞培养上清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)的含量;RT-qPCR法检测细胞IL-1β、iNOS、MCP-1、MMP3 mRNA表达;Western Blot法检测细胞MMP3蛋白表达。结果与空白对照组比较,2.5~40μg·mL^(-1)的PB3A对AIA-FLSs细胞的增殖抑制率均有明显升高(P<0.05,P<0.01),且具有时间和浓度依赖性;PB3A 5、10、20μg·mL^(-1)组的AIA-FLSs细胞凋亡率明显升高(P<0.05,P<0.01);10、20μg·mL^(-1)PB3A均能明显下调Bcl-2蛋白表达(P<0.01),上调Bax、Caspase-3蛋白表达(P<0.01)。与LPS组比较,10、20μg·mL^(-1)PB3A能明显降低细胞培养上清中TNF-α、IL-1β、IL-6的分泌量(P<0.01),下调细胞IL-1β、iNOS、MCP-1、MMP3 mRNA表达及MMP3蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论PB3A可通过调控凋亡相关蛋白表达抑制AIA-FLSs的细胞增殖,促进细胞凋亡,并通过下调TNF-α、IL-1β、IL-6、iNOS、MCP-1及MMP3的表达来抑制LPS诱导的炎性反应。

羌活醇及异欧前胡素对脂多糖诱导大鼠成纤维样滑膜细胞增殖抑制的影响

目的探讨羌活醇及异欧前胡素对大鼠成纤维样滑膜细胞增殖抑制的影响。方法复制经脂多糖(LPS)诱导的大鼠成纤维样滑膜细胞(CIA-FLS)模型,分别给予不同浓度的羌活醇(25、50、100、200、400μg·mL^-1)、异欧前胡素(25、50、100、200、400μg·mL^-1)及阳性药泼尼松龙(400μg·mL^-1),另设空白对照组,观察给药前后成纤维样滑膜细胞形态差异;采用噻唑蓝(MTT)法测定不同给药时间、不同给药浓度下成纤维样滑膜细胞的抑制率,计算半数抑制浓度(IC 50);硝酸还原酶法测定羌活醇和异欧前胡素对大鼠成纤维化滑膜细胞中一氧化氮(NO)水平的影响;酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响。结果造模细胞较正常细胞增殖力强,细胞粗大,纤维样,呈层叠状生长;羌活醇组给药后细胞增殖力减弱,生长良好;异欧前胡素给药后细胞增殖力锐减,生长状况不佳。给药12 h,羌活醇未测出半数抑制浓度值,异欧前胡素半数抑制浓度值为160μg·mL^-1;给药36 h,羌活醇、异欧前胡素半数抑制浓度值分别为190、120μg·mL^-1;给药60 h,分别为80、45μg·mL^-1,异欧前胡素的增殖抑制能力强于羌活醇(P<0.01)。给药羌活醇与异欧前胡素对一氧化氮总体含量和细胞因子肿瘤坏死因子α含量均有显著性降低(P<0.01),且异欧前胡素的降低更显著。结论羌活醇及异欧前胡素对大鼠成纤维样滑膜细胞均有增殖抑制作用(P<0.05),均使一氧化氮含量和细胞因子肿瘤坏死因子α的含量显著减少(P<0.01),二者都有很好的增殖抑制能力,且异欧前胡素的抑制效果优于羌活醇。

穿山龙水溶性总皂苷对RA细胞模型及其下游因子的影响

目的:观察穿山龙水溶性总皂苷对TNF-α加IL-17诱导的大鼠成纤维样滑膜细胞株RSC-364核转录因子NF-κB活化的调控作用及下游基因TNF-α、IL-1、ICAM-1、MMP-2、MMP-3分泌的影响。方法:用IL-17加TNF-α刺激RSC-364建立类风湿性关节炎(RA)细胞模型,以不同浓度穿山龙水溶性总皂苷干预,采用半定量RT-PCR的方法检测各组NF-κBp65基因和IκB-α基因的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养液上清中TNF-α、IL-1、ICAM-1、MMP-2、MMP-3蛋白水平的变化。结果:穿山龙水溶性总皂苷可呈浓度依赖性抑制TNF-α加IL-17刺激的RSC-364中NF-κBp65的活化,提升IκB-α的表达,并抑制TNF-α、IL-1、ICAM-1、MMP-2、MMP-3的分泌。结论:穿山龙水溶性总皂苷可抑制NF-κB通路的活化,阻碍下游多种基因的分泌与活化,提示其可能具有抑制RA滑膜炎症的作用。

薯蓣皂苷片对RSC-364细胞核转录因子-κBp65表达的影响

目的:观察薯蓣皂苷片对类风湿性关节炎细胞模型核转录因子NF-κBp65及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响。方法:用白介素-17(IL-17)+TNF-α共同孵育大鼠RSC-364细胞,以不同浓度薯蓣皂苷片进行干预,MTT法检测不同药物浓度对细胞存活率影响,采用Western blot检测各组NF-κBp65及其抑制蛋白(IκB-α)的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养液上清中VEGF、MMP-9、TNF-α蛋白水平的变化。结果:薯蓣皂苷片可促进κB抑制蛋白的表达量,降低NF-κB蛋白水平的高表达,并降低细胞分泌VEGF、MMP-9、TNF-α水平。结论:薯蓣皂苷片对RSC-364细胞核因子κB有负向调节作用,提升IκB-α的表达并能降低炎性因子和血管新生因子分泌,提示其在类风湿发病中可能起到潜在的调节作用。