雷公藤多甙对IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364增殖和IL-6分泌的影响

目的:观察雷公藤多甙对IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364增殖和IL-6分泌的影响,探讨其治疗类风湿性关节炎的作用机理。方法:培养大鼠滑膜细胞株RSC-364,运用CCK-8法检测不同剂量的雷公藤多甙对IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364增殖的影响,酶联免疫吸附实验检测细胞株培养上清中的IL-6的含量。结果:经过IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364,在不同浓度的雷公藤多甙的作用48h后,其增殖明显受到抑制,并呈剂量依赖性。同时各剂量组均可抑制IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364分泌炎性因子IL-6的分泌。结论:雷公藤多甙抑制IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364的过度增殖和IL-6的分泌,这可能是其治疗类风湿性关节炎的作用机理之一。

甲氨蝶呤对脂多糖诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364分泌IL-17和IL-18的影响

目的:观察甲氨蝶呤对脂多糖诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364分泌IL-17和IL-18表达的影响,进一步探讨甲氨蝶呤治疗类风湿性关节炎(RA)的作用机理。方法:运用ELISA检测不同浓度的甲氨蝶呤对脂多糖诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364细胞上清液中的IL-17和-IL-18的含量。结果:甲氨蝶呤明显抑制脂多糖诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364细胞分泌炎性因子IL-17和IL-18的含量。结论:甲氨蝶呤抑制脂多糖诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364分泌IL-17和IL-18,这可能是其治疗RA的重要的作用机制之一。

雷公藤多甙对IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364表达JNK1蛋白的影响

目的探讨雷公藤多甙(Tripterygium Glycosides,TG)对IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364JNK1的影响,进一步阐明雷公藤多甙治疗类风湿性关节炎的作用机制。方法运用Western-blot检测不同浓度的雷公藤多甙(0、5、10、20mg/L)对IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364JNK1蛋白的表达。结果雷公藤多甙明显地抑制IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364对JNK1蛋白的表达。结论雷公藤多甙抑制IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364对JNK1蛋白的表达,可能是其治疗类风湿性关节炎的重要作用机制之一。

八肽胆囊收缩素对大鼠滑膜细胞株RSC-364基质金属蛋白酶-2和-9产生的影响

目的探讨八肽胆囊收缩素(CCK-8)对肿瘤坏死因子(TNF)-α诱导的大鼠滑膜细胞株RSC-364细胞金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9产生的影响及其可能的分子机制。方法通过酶谱分析法检测不同浓度的CCK-8对大鼠滑膜细胞株RSC-364细胞MMP-2和MMP-9产生的影响。结果RSC-364细胞在无干预因素存在的情况下,仅有MMP-2的表达,MMP-9无明显表达;TNF-α(10ng/L)可诱导RSC-364细胞MMP-9的表达,使MMP-2的表达增加;在TNF-α(10ng/L)存在的情况下,10-6、10-7和10-8mol/L浓度的CCK-8对RSC-364细胞MMP-2和MMP-9的表达均有明显的抑制作用,CCK的受体拮抗剂丙谷胺可拮抗此作用。结论CCK-8可抑制TNF-α诱导的大鼠滑膜细胞株RSC-364细胞MMP-2和MMP-9的产生,提示CCK-8可能具有潜在的调控类风湿关节炎发病过程的作用。

毛樱桃总黄酮对LPS诱导大鼠滑膜细胞RSC-364炎症及自噬的影响

目的探索毛樱桃总黄酮(Prunus tomentosaThumb total flavones,PTTTF)对大鼠滑膜细胞RSC-364炎症反应的影响及其自噬相关机制。方法选用RSC-364细胞株,通过脂多糖(LPS)诱导大鼠滑膜细胞RSC-364建立类风湿关节炎滑膜炎性细胞模型,将细胞分为空白组(CON)、模型组(MOD)、地塞米松(DXM)和不同剂量(0.4、4.0和40.0 mg/L)的PTTTF组。用RT-PCR法检测大鼠滑膜细胞RSC-364细胞中环氧酶1(COX-1)、环氧酶2(COX-2)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-17(IL-17)及肿瘤坏死因子(TNF-α)表达水平;采用Western blotting法检测大鼠滑膜细胞RSC-364细胞中自噬相关蛋白ATG5、ATG7、ATG12、Beclin1、Lc3II及Bcl-2的表达水平。结果与空白组相比,模型组中COX-2、IL-1β、IL-6、IL-17和TNF-αmRNA表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01),自噬相关蛋白ATG5、ATG7、ATG12、Beclin1、Lc3II和Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.05或P<0.01),与模型组相比,PTTTF(0.4、4.0和40.0 mg/L)可明显降低大鼠滑膜细胞RSC-364细胞中炎症因子COX-2、IL-1β、IL-6、IL-17和TNF-αm RNA表达水平(P<0.05或P<0.01);PTTTF(0.4、4.0和40.0 mg/L)可明显抑制大鼠滑膜细胞RSC-364细胞中自噬相关蛋白的表达(P<0.05或P<0.01)。结论 PTTTF抑制大鼠滑膜细胞RSC-364炎症因子的表达及其作用机制可能与抑制自噬相关蛋白表达有关。

黄芩苷对脂多糖诱导的大鼠滑膜RSC-364细胞自噬的抑制作用

目的:探讨黄芩苷通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素(PI3k/Akt/mTOR)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的大鼠滑膜RSC-364细胞自噬的影响,并阐明其作用机制。方法:将对数生长期大鼠滑膜RSC-364细胞分为对照组、模型组、地塞米松(DXMS)组、10μmol·L-1黄芩苷组、20μmol·L-1黄芩苷组和40μmol·L-1黄芩苷组。对照组RSC-364细胞只加入培养基,其他各组RSC-364细胞均采用1 mg·L-1LPS体外刺激12 h制作炎症细胞模型。采用MTT法检测各组RSC-364细胞存活率,RT-PCR法检测各组RSC-364细胞中PI3k、Akt、mTOR、Beclin1和微管相关蛋白-轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)mRNA表达水平,Western blotting法检测各组RSC-364细胞中Beclin1、Atg5、Atg7、Atg12、LC3-Ⅱ和P62蛋白表达水平。结果:与对照组比较,模型组RSC-364细胞存活率明显升高(P<0.01),模型组RSC-364细胞中PI3k、Akt、mTOR mRNA和P62蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01),Atg5、Atg7、Atg12、LC3-Ⅱ、Beclin1 mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与模型组比较,不同浓度黄芩苷组RSC-364细胞存活率明显降低(P<0.05或P<0.01),RSC-364细胞中PI3k、Akt、mTOR mRNA和P62蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01),Atg5、Atg7、Atg12、LC3-Ⅱ、Beclin1 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05或P<0.01)。结论:黄芩苷可能通过激活PI3k/Akt/mTOR信号通路抑制LPS诱导的RSC-364细胞自噬。

薯蓣皂苷片对RSC-364细胞核转录因子-κBp65表达的影响

目的:观察薯蓣皂苷片对类风湿性关节炎细胞模型核转录因子NF-κBp65及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响。方法:用白介素-17(IL-17)+TNF-α共同孵育大鼠RSC-364细胞,以不同浓度薯蓣皂苷片进行干预,MTT法检测不同药物浓度对细胞存活率影响,采用Western blot检测各组NF-κBp65及其抑制蛋白(IκB-α)的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养液上清中VEGF、MMP-9、TNF-α蛋白水平的变化。结果:薯蓣皂苷片可促进κB抑制蛋白的表达量,降低NF-κB蛋白水平的高表达,并降低细胞分泌VEGF、MMP-9、TNF-α水平。结论:薯蓣皂苷片对RSC-364细胞核因子κB有负向调节作用,提升IκB-α的表达并能降低炎性因子和血管新生因子分泌,提示其在类风湿发病中可能起到潜在的调节作用。

穿山龙水溶性总皂苷对RA细胞模型及其下游因子的影响

目的:观察穿山龙水溶性总皂苷对TNF-α加IL-17诱导的大鼠成纤维样滑膜细胞株RSC-364核转录因子NF-κB活化的调控作用及下游基因TNF-α、IL-1、ICAM-1、MMP-2、MMP-3分泌的影响。方法:用IL-17加TNF-α刺激RSC-364建立类风湿性关节炎(RA)细胞模型,以不同浓度穿山龙水溶性总皂苷干预,采用半定量RT-PCR的方法检测各组NF-κBp65基因和IκB-α基因的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养液上清中TNF-α、IL-1、ICAM-1、MMP-2、MMP-3蛋白水平的变化。结果:穿山龙水溶性总皂苷可呈浓度依赖性抑制TNF-α加IL-17刺激的RSC-364中NF-κBp65的活化,提升IκB-α的表达,并抑制TNF-α、IL-1、ICAM-1、MMP-2、MMP-3的分泌。结论:穿山龙水溶性总皂苷可抑制NF-κB通路的活化,阻碍下游多种基因的分泌与活化,提示其可能具有抑制RA滑膜炎症的作用。

云南省1985年部分医学科研进展

1985年我省通过评审或鉴定的成果共计82项,其中有22项获云南省科技进步奖,现将部分成果摘要介绍如下。 1.建立人滑膜肉瘤细胞株云南省肿瘤研究所完成了人滑膜肉瘤细胞株的建株及其特性研究。发现细胞呈梭状形及多边形,镶嵌排列或相互重叠,胞浆较暗而透明,核大小不等且有多个核仁,具有恶性细胞特征,现已传至68代,无自行消退,生物学特性及组织形态学相稳定,冻存后能复苏,细胞分化较低,染色体多数为超二及三倍体,並有明显的染色体异常。经病理组织学、组织化学。