自体来源富血小板血浆对大鼠牙髓细胞增殖作用的研究

目的:初步探讨富血小板血浆及之中生长因子对大鼠牙髓细胞增殖的作用。方法:采用Landesberg法制备PRP,ELISA测定PRP中两种主要生长因子:转化生长因子(TGF-β1)和血小板源性生长因子(PDGF-AB)的浓度;CCK-8法观察5%、10%PRP在48h时对牙髓细胞的增殖作用;在5%PRP中加入TGF-β1抗体和PDGF-AB抗体分别拮抗TGF-β1和PDGF-AB的作用并观察对细胞增殖的影响。结果:所制备的PRP中血小板含量为1790.58±388.08×109个/L,ELISA的方法测定PRP中TGF-β1及PDGF-AB的浓度分别为3.080 ng/ml和10.706 ng/ml。CCK-8法测定5%和10%PRP对牙髓细胞均有增殖作用(P<0.05,与对照组相比);屏蔽生长因子可以明显改变5%PRP对大鼠牙髓细胞的增殖作用(P<0.05);拮抗PDGF-AB组比拮抗TGF-β1组降低增殖作用明显(P<0.05)。结论:本实验制备的PRP含有高浓度的TGF-β1及PDGF-AB,不同浓度的PRP均能有效促进牙髓细胞增殖;屏蔽PDGF-AB明显降低5%PRP对大鼠牙髓细胞的增殖作用。

热休克蛋白70对大鼠牙髓细胞高温损伤的影响

目的:研究预热处理诱导的热休克蛋白70(HSP70)对受高温损伤的大鼠牙髓细胞的影响。方法:将体外培养的大鼠牙髓细胞随机分为4组,分别为正常对照组(C组):37℃常规培养18h;预热处理组(pH组):37℃常规培养9h后42℃培养1h,再复温培养8h;高温损伤组(SH组):37℃常规培养9h后46℃培养1h,再复温培养8h;预热处理+高温损伤组(pH+SH组):42℃培养1h后恢复常规培养8h,再置于46℃培养1h后恢复常规培养8h。以Western Blot检测细胞内HSP70的表达变化;以四唑盐(MTT)比色法、吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)双染法、细胞形态学观察评价细胞存活能力。结果:Western Blot显示,与C组相比较PH组HSP70表达上调;MTT比色法、AO/EB双染法、细胞形态学观察均显示pH+SH组较SH组的细胞存活能力强。结论:预热处理可诱导大鼠牙髓细胞中的HSP70表达上调,减轻高温对牙髓细胞的损伤。

Cadherin-11基因转染对大鼠牙髓细胞迁移和分化的影响

目的:探讨腺病毒载体介导的Cadherin-11(Cad-11)基因转染对大鼠牙髓细胞迁移能力和成牙本质分化能力的影响。方法:原代培养大鼠牙髓细胞,并用pD C316-mC MV-EGFP-Cadherin11重组腺病毒进行转染。通过免疫组化法检测Cad-11蛋白表达,用ALP染色和茜素红钙结节染色及定量检测其成牙本质分化情况。黏附实验和迁移实验分别检测Cad-11对牙髓细胞黏附和迁移的影响。结果:免疫组化染色示Cad-11转染成功并高表达Cad-11蛋白。Cad-11在矿化诱导14 d时可增强大鼠牙髓细胞ALP表达,诱导21 d,形成钙化结节量增加(P<0.05),同时增加细胞的黏附性和迁移能力(P<0.05)。结论:Cad-11能促进大鼠牙髓细胞成牙本质分化能力,同时提高其迁移活性。

大鼠牙髓干细胞的分离培养与鉴定

目的:分离培养大鼠牙髓干细胞并对其进行生物学鉴定。方法:采用酶消化法分离获得大鼠牙髓干细胞,有限稀释法纯化细胞,测定细胞克隆形成率,细胞计数法测生长曲线,抗波形丝蛋白及角蛋白、抗STRO-1免疫化学染色。体外分化诱导实验检测细胞的多向分化能力。结果:分离纯化获得的大鼠牙髓干细胞在体外具有一定的克隆形成能力,波形丝蛋白、STRO-1均有表达。诱导条件下部分牙髓干细胞具有多向分化的潜力,符合干细胞特征。结论:成功从大鼠牙髓中获取牙髓干细胞。