大鼠IκBα基因siRNA序列的体外筛选及体内验证

目的:寻找可在体内有效抑制大鼠睫状肌核转录因子κB抑制物α(IκBα)基因表达的小干扰RNA(siRNA)序列。方法:设计合成3对针对大鼠IκBα基因的siRNA,体外转染表达IκBα基因的大鼠A7r5细胞,通过流式细胞仪检测转染效率,并经Real Time-PCR及western blot在mRNA及蛋白水平筛选对IκBα表达抑制率最高的序列。通过前房注射选出的siRNA进行大鼠体内转染,荧光显微镜下观察其在大鼠睫状肌的分布并利用Real Time-PCR及免疫荧光验证其对该部位IκBα基因沉默的有效性。结果:体外筛选证明针对大鼠IκBα基因CTACGATG ACTGTGTGTTT靶序列的siRNA对IκBα的表达抑制效果最明显,大鼠前房注射该siRNA可到达睫状肌,并能有效抑制该部位IκBα基因的表达,IκBαmRNA水平在转染后24h降低最明显,抑制率达59.0%,而蛋白水平则在72h达最低,抑制率为52.3%(P<0.01)。结论:针对大鼠IκBα基因CTACGATGACTGTGTGTTT靶序列的siRNA是对大鼠睫状肌IκBα基因进行体内RNA干扰的有效序列。