咪达唑仑对大鼠神经元氨基酸类神经递质影响的研究

为了确定咪达唑仑对中枢神经神经元细胞氨基酸类递质谷氨酸(Glu)及甘氨酸(Gly)含量的影响,试验以胎鼠为研究动物进行神经元的体外培养,分别设置高、中、低(60,5,3.5μg/m L)3个药物浓度,每个药物浓度设3组平行试验,然后采用ELISA法检测样品中Glu与Gly的含量,对比含量变化分析咪达唑仑对大鼠神经元氨基酸类神经递质的影响。结果表明:不同浓度咪达唑仑对Glu呈现先增强后抑制的作用,而对Gly的作用表现为先抑制后增强。说明不同浓度咪达唑仑在麻醉过程中抑制兴奋类氨基酸神经递质,增强抑制类氨基酸神经递质。

纳洛酮对缺氧诱导大鼠神经元损伤的抑制作用及其机制

目的探讨纳洛酮对缺氧诱导大鼠神经元损伤的作用及其可能的机制。方法体外培养大鼠神经元,将其分为正常对照组、缺氧诱导组、缺氧诱导+纳洛酮干预组。应用流式细胞术测定大鼠神经元损伤;应用荧光探针2,7-二氯二氢荧光素乙酰乙酸(DCFDA)检测细胞内活性氧的变化;应用比色法检测超氧化物歧化酶(SOD)的活性;应用Western blot检测NF-κB的活化。结果 (1)纳洛酮抑制缺氧诱导的大鼠神经元凋亡,缺氧组大鼠神经元细胞凋亡明显增加,为对照组的3.54倍,纳洛酮干预组为对照组的1.35倍(均P<0.05)。(2)纳洛酮抑制缺氧诱导的活性氧生成,缺氧诱导大鼠神经元活性氧生成,为对照组的2.66倍,纳洛酮干预组为对照组的1.24倍(均P<0.05)。(3)纳洛酮抑制缺氧诱导的NF-κB活化(P<0.05)。(4)抗氧化剂NAC抑制缺氧诱导的NF-κB活化,抑制率达49%(P<0.05)。结论纳洛酮抑制缺氧诱导的活性氧生成,进而抑制NF-κB活化,从而抑制缺氧诱导的大鼠神经元凋亡。

原儿茶酸对新生大鼠皮质神经元存活及突起生长的影响

目的:研究原儿茶酸(protocatechuic acid,PCA)对新生大鼠皮质神经元存活及突起生长的影响。方法:体外培养新生大鼠皮质神经元,通过细胞形态学观察、神经元细胞活力检测、培养液中乳酸脱氢酶(LDH)渗漏量的测定和有突起神经元数目及平均突起长度定量分析,观察不同剂量的原儿茶酸对神经元的营养作用。结果:与溶媒对照组比较,原儿茶酸低、中、高剂量(16、32、64μmol/L)组神经元活力增强,LDH渗漏量减少,有突起的神经元数目增多,神经元突起增长,神经网络更发达,并有一定的量效关系。结论:原儿茶酸能促进大鼠皮质神经元的存活及突起生长。

Wistar大鼠视网膜神经元高糖模型葡萄糖浓度和培养时间的筛选

目的筛选Wistar大鼠视网膜神经元高糖模型的葡萄糖浓度及培养时间。方法取出生1~3 d Wistar大鼠分离视网膜神经元进行传代培养,尼氏染色法鉴定细胞;实验分5组:A组培养液葡萄糖浓度为0 mmol·L^(-1)(正常对照组),B组浓度为10 mmol·L^(-1),C组浓度为15 mmol·L-1,D组浓度为25 mmol·L^(-1),E组浓度为35 mmol·L^(-1)。分别培养24 h、48 h、72 h后用MTT法检测各组细胞OD值,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。结果倒置显微镜观察分离培养细胞,大部分细胞于接种24 h后贴壁,少数细胞长出较短的突起,并有向中央聚集生长的现象。2~3 d后长出突起的神经元数目增多,突起长度增加,约为自身胞体长度的1倍。培养5~7 d后神经元突起进一步增多、变长。经尼氏染色后细胞质呈蓝紫色,尼氏小体颗粒状结构清晰。非神经元细胞胞质基本不着色,细胞核呈淡紫色、圆形,核仁清晰可辨,神经元率达91%。各实验组在培养24 h后OD值均低于正常对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。随培养时间延长OD值继续下降,48 h后各组OD值比较差异有统计学意义(P<0.01);其中B组及C组与A组比较差异无统计学意义(均为P>0.05);D组OD值明显下降,与A组比较差异有统计学意义(P<0.05),E组下降更明显,与A组比较差异有统计学意义(P<0.01)。72 h后各组OD值比较差异有统计学意义(P<0.01);其中B组及C组与A组比较差异无统计学意义(均为P>0.05);D组及E组与A组比较差异有统计学意义(均为P<0.01)。各组在培养24 h后视网膜神经元凋亡率差异无统计学意义(P>0.05)。48 h后各组凋亡率比较差异有统计学意义(P<0.01);其中B组及C组与A组比较差异无统计学意义(均为P>0.05);D组凋亡率明显升高,与A组比较差异有统计学意义(P<0.05);E组凋亡率升高更明显,与A组比较差异有统计学意义(P<0.01),且与D组比较亦有统计学意义(P<0.05)。72 h后各组凋亡率比较差异有统计学意义(P<0.01);其中B组及C组与A组比较差异无统计学意义(均为P>0.05),D组及E组与A组比较差异有统计学意义(均为P<0.01)。结论葡萄糖浓度为25 mmol·L^(-1)培养48 h是视网膜神经元高糖模型最佳葡萄糖浓度及干预时间。

谷氨酸促进大鼠海马神经元的内钙升高

谷氨酸能影响大鼠海马神经元胞内钙信号的变化,进而影响海马神经元神经冲动的发放和学习记忆过程。运用荧光测钙技术实时监测了大鼠海马神经元内钙信号的动态变化,同时分析了谷氨酸对其胞内钙信号的影响。试验表明:谷氨酸能够显著提高胞内游离钙离子的浓度;细胞外钙离子的存在、谷氨酸刺激时间及刺激频率的增加都能引起胞内钙信号不同程度的升高;但谷氨酸的过度刺激会引起钙离子浓度的超负荷,从而导致神经元结构和功能的损坏。

5-HT受体亚型在原代培养大鼠脊髓背角神经元的表达

为探讨脊髓背角内 5 -HT发挥作用的受体类型及其胞内信号转导机制 ,本研究首先利用免疫荧光技术对胎鼠脊髓背角神经元的产率进行了观察 ,再利用反转录 PCR方法观察了 5 -HT受体 14种亚型 m RNAs在原代培养神经元中的表达。原代培养的背角神经元生长状态良好 ,存活时间达到 14～ 2 1d。对培养的背角细胞用神经元特异性标志物—神经细胞核蛋白 (Neu N)进行免疫荧光检测的结果表明 ,神经元的产率超过 90 % ;用 PCR方法在培养的背角神经元中检测到了 5 -HT1 A、5 -HT1 B、5 -HT1 D、5 -HT1 F、5 -HT2 A、5 -HT2 C、5 -HT3、5 -HT4 、5 -HT5A、5 -HT5B、5 -HT6 和 5 -HT7等受体亚型 m RNAs的表达。但上述各受体亚型的表达水平存在差异 ,未检测到 5 -HT1 E和 5 -HT2 B受体亚型 m RNAs的表达。结果表明 ,本研究建立的实验方法可满意地获得原代培养脊髓背角神经元 ;这些神经元不但表达多种受体亚型 ,而且表达类型与以往在成年大鼠脊髓背角观察到的表达状况基本一致。上述结果为进一步开展 5 -HT作用机制的体外研究奠定了基础。

多氯联苯对大鼠海马神经元细胞的影响

背景与目的:探讨多氯联苯(polychlorinated biphenyl,PCB)对大鼠海马神经元细胞生长发育的影响。材料与方法:取新生Wistar大鼠双侧海马,无菌条件下制备细胞悬液。实验分为对照组和PCB低(1×10-8mol/L)、中(1×10-7mol/L)、高(1×10-6mol/L)3个剂量实验组。运用光镜、免疫组化技术研究PCB对大鼠海马神经元细胞形态学及bcl-2和TGF-β1表达的影响。结果:PCB对大鼠海马神经元细胞的损伤随着PCB剂量的增加呈升高趋势,高剂量PCB组海马神经元细胞结构改变明显,神经元细胞轴突和树突消失仅部分残存,胞体萎缩;PCB能诱导海马神经元细胞bcl-2和TGF-β1的表达,PCB低剂量组bcl-2呈强阳性表达,中剂量组bcl-2表达显著下调,高剂量组bcl-2为阴性表达;低剂量组TGF-β1表达显著下调,中剂量组TGF-β1表达上调;高剂量组呈阴性,而对照组神经元细胞的bcl-2和TGF-β1均为阳性表达。结论:PCB对大鼠海马神经元细胞的生长产生影响。

焦亚硫酸钠对大鼠背根节神经元钾电流的影响

应用全细胞膜片钳技术,研究SO2体内衍生物和食品添加剂———焦亚硫酸钠(sodiummetabisulfite,SMB)对大鼠背根节(DRG)神经元瞬间外向钾电流(TOCs)和延迟整流钾电流(IK)的影响.结果表明,SMB可增大TOCs和IK,且具剂量依赖性和电压依赖性.10μmolL-1的SMB不影响TOCs的激活过程,给药前后TOCs的半数激活电压为(3.15±2.29)mV和(4.72±1.92)mV(N=8,P>0.05),不改变其斜率;但10μmolL-1的SMB却非常显著地影响TOCs的失活过程,给药前后其半数失活电压分别为(-53.6±0.45)mV和(-38.85±0.68)mV(N=8,P<0.01),也不改变其斜率.10μmolL-1的SMB显著提前IK的激活过程,给药前后IK的半数激活电压为(-11.98±3.50)mV和(-33.21±5.67)mV(N=8,P<0.01),不改变其斜率.SMB显著增大TOCs和IK,使IK的激活过程提前,抑制TOCs的失活过程,从而导致细胞内K+通过K+通道外流增加,进而可能对DRG神经元功能产生不利影响.

5-HTR2C重组质粒电转染至大鼠海马神经元对细胞活性的影响

目的:5-羟色胺2C受体在抑郁症的发病及治疗机制中发挥重要的作用,模拟5-HTR2C表达的异常升高,建立5-HTR2C高表达的细胞模型,为抑郁症治疗药物的开发提供平台。方法:采用课题组前期已构建5-HTR2C真核表达载体;按试剂盒方法提取5-HTR2C重组质粒;并取新生24 h内Wistar乳鼠海马,制备海马神经元,按试剂盒方法对质粒进行电转染,并于荧光显微镜下观察转染效果;将所培养细胞分为:非转染细胞(NTC)和转染细胞(TC),转染细胞分为:转染组(TC+5-HTR2C质粒)、空质粒组(TC+空质粒)、激动剂组(TC+激动剂);为确定激动剂组细胞提取蛋白的时间,分别于加入激动剂后0、5、10、20、40、60 min提取蛋白,Western-blot检测;待各组细胞处理后,采用Western-blot检测5-HTR2C以及MEK/P-MEK的表达,以验证5-HTR2C重组质粒转染后是否仍有活性。结果:海马神经元电转染后48 h后,神经元数量较多,电转染率及生存率最高;体外培养的海马神经元中加入激动剂m CPP后5 min至60 min,MEK磷酸化水平逐渐升高,在20 min时MEK磷酸化水平已较高;与NTC相比,TC+5-HTR2C质粒和TC+激动剂组中P-MEK的蛋白水平明显升高。结论:5-HTR2C重组质粒导入海马神经元后48 h细胞生长良好,死亡率低,细胞饱满,电转染率较高,可于此时收集细胞。激动剂组可在m CPP与细胞共培养后20-60 min间收集细胞。通过比较TC+5-HTR2C质粒组及TC+激动剂组,发现加入激动剂的细胞中MEK磷酸化水平较前者要强。因此,5-HTR2C重组质粒转染至海马神经元中后仍具有生理活性,说明5-HTR2C重组质粒的转染比较成功。

血府逐瘀血清对大鼠背根神经元缺氧损伤的保护作用的研究

目的探索分析血府逐瘀血清对大鼠背根神经元缺氧损伤的保护作用。方法 10只新生24 h SD大鼠,取背根神经节(DRG),培养大鼠背根神经节神经元,并分成空白对照组(正常培养7 d不进行缺氧损伤)、损伤对照组(建立细胞缺氧损伤模型,在缺氧损伤前24 h给予磷酸缓冲试剂)、空白血清组(建立细胞缺氧损伤模型,细胞种植3 d后加入空白血清)、含药血清组[建立细胞缺氧损伤模型,在缺氧损伤前24 h加入含药(血府逐瘀血清)血清]、神经营养因子保护组[建立细胞缺氧损伤模型,在缺氧损伤前24 h加入神经生长因子(NGF)],检测比较各组不同时间丙二醛(MDA)含量及过氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)活力,并通过MTT法检测细胞的存活率。结果空白对照组MDA在各个时间点的变化不大,损伤对照组是各组中同时间点MDA含量最高的。12 h后MDA含量含药血清组明显低于空白血清组及损伤对照组,比较差异具有统计学意义(P<0.05);但含药血清组与神经营养因子保护组比较差异无统计学意义(P>0.05)。空白对照组各个时间点SOD含量变化不大。同时间点含药血清组SOD含量明显高于损伤对照组及空白血清组,比较差异具有统计学意义(P<0.05);同时间点含药血清组与神经营养因子保护组SOD含量比较差异无统计学意义(P>0.05)。损伤后24 h,含药血清组LDH含量明显低于损伤对照组及空白血清组,比较差异有统计学意义(P<0.05),但与神经营养因子保护组比较差异无统计学意义(P>0.05)。空白对照组细胞存活率为(0.624±0.054),含药血清组细胞存活率为(0.529±0.010),空白血清组细胞存活率为(0.229±0.038),损伤对照组细胞存活率为(0.221±0.034)、神经营养因子保护组细胞存活率为(0.548±0.056),含药血清组细胞存活率明显高于空白血清组及损伤对照组,与神经营养因子保护组及空白对照组较为接近。结论血府逐瘀血清对大鼠背根神经元缺氧损伤具有保护作用,可以促进神经元的生长。

中药更年春方通过ERβ及PI3K/Akt信号通路对Aβ25-35致大鼠胎鼠海马神经元损伤的保护作用

目的观察中药更年春方(Gengnianchun formula,GNC)通过雌激素受体β(estrogen receptorβ,ERβ)及PI3K/Akt信号通路对β淀粉样蛋白25-35片段(Aβ25-35)致大鼠胎鼠海马神经元细胞损伤的保护作用。方法采用Aβ25-35作用人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞系,通过CCK-8法检测细胞活力摸索Aβ25-35及GNC含药血清(GNC serum,GS)处理神经细胞的合适浓度及时间。采用Aβ25-35作用大鼠胎鼠海马神经元构建阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的体外模型,分为无血清对照组、模型组、GS组、空白血清对照(normal saline serum,NS)组和PHTPP(选择性ERβ拮抗剂)组。利用正置显微镜观察细胞形态、CCK-8法检测细胞活力及LDH释放法检测细胞损伤。利用Hoest33258/PI双重荧光染色实验、qRT-PCR及Western blot实验检测细胞凋亡相关指标。结果与无血清对照组相比,模型组大鼠胎鼠海马神经元胞体及突触出现明显的收缩崩解和细胞碎片、细胞活力下降、LDH释放升高。与模型组和NS组相比,GS组大鼠胎鼠海马神经元胞体及突触的收缩崩解和细胞碎片减少、细胞活力上升、LDH释放减少、PI阳性神经元细胞数目下降、神经元bax/bcl-2mRNA、cyt-c mRNA水平及bax/bcl-2、cleaved-caspase 3、cyt-c蛋白表达水平下降、p-Akt蛋白表达水平上升。与GS组相比,PHTPP组大鼠胎鼠海马神经元bax/bcl-2 mRNA、cyt-c mRNA水平及bax/bcl-2、cleaved-caspase3、cyt-c蛋白表达水平上升、p-Akt蛋白表达水平下降。结论GNC对Aβ25-35致大鼠胎鼠海马神经元的损伤具有保护作用,此作用是通过ERβ及PI3K/Akt信号通路介导的。

脑源性神经营养因子经由环磷酸腺苷反应元件结合蛋白磷酸化对缺氧大鼠胚脑皮质神经元细胞的保护作用

转录因子环磷酸腺苷反应元件结合蛋白（Cyclic AMP response element-binding protein，CREB）是胚脑皮质神经元细胞内脑源性神经营养因子（Brain-derived neurotrophic factor，BDNF）诱导基因表达的重要调节因子。我们前期的研究表明BDNF对缺氧性神经元损伤具有保护作用，为了阐明BDNF对缺氧性神经元损伤的保护作用是否经过了核蛋白CREB的磷酸化，本研究采用蛋白质免疫印迹法检测单纯缺氧组和BDNF干预组胚脑皮质神经元细胞内CREB及Ser^133磷酸化CREB在不同时间点表达水平的变化。结果显示缺氧及BDNF均能刺激胚脑皮质神经元细胞内Ser^133磷酸化CREB表达增加，在不同缺氧时间点BDNF干预组Ser^133磷酸化CREB表达水平较单纯缺氧组明显增强（P〈0．01），BDNF干预组1h后Ser^133磷酸化CREB表达至高峰，以后持续表达维持6h以上，维持时间较单纯缺氧组明显延长；在缺氧0～3h，BDNF干预组细胞内总CREB表达水平与单纯缺氧组基本一致；随着缺氧时间的延长，单纯缺氧组细胞内CREB表达明显减少，以第5～6h最明显。结果表明，BDNF对缺氧性神经元损伤的保护作用经过了核蛋白CREB的磷酸化。

LncRNA CYTOR对大鼠背脊髓神经元细胞损伤及炎性因子的影响

目的探讨LncRNA CYTOR对大鼠背脊髓神经元细胞损伤及炎性因子的影响及其可能作用机制。方法采用过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导大鼠背脊髓神经元细胞建立细胞损伤模型,随机分为:con组、H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)+pcDNA组、H^(2)O_(2)+pcDNA-LncRNA CYTOR组、H_(2)O_(2)+pcDNA-LncRNA CYTOR+miR-NC组、H_(2)O_(2)+pcDNA-LncRNA CYTOR+miR-136-5p组。qRT-PCR检测LncRNA CYTOR、miR-136-5p的表达量;MTT法与流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡;ELISA法检测IL-6、IL-21的水平;双荧光素酶报告实验检测LncRNA CYTOR与miR-136-5p的靶向关系;Western blot检测Bax、Bcl-2蛋白表达量。结果与con组比较,H_(2)O_(2)组LncRNA CYTOR的表达量降低(P<0.05),Bcl-2蛋白水平降低(P<0.05),miR-136-5p的表达量升高(P<0.05),细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和Bax蛋白水平升高(P<0.05),IL-6、IL-21的水平升高(P<0.05);与H_(2)O_(2)+pcDNA组比较,H_(2)O_(2)+pcDNA-LncRNA CYTOR组细胞增殖抑制率、凋亡率、Bax蛋白表达及IL-6、IL-21水平均降低(P<0.05),Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05);LncRNA CYTOR可负向调控miR-136-5p表达;与H_(2)O_(2)+pcDNA-LncRNA CYTOR+miR-NC组比较,H 2O 2+pcDNA-LncRNA CYTOR+miR-136-5p组细胞增殖抑制率、凋亡率、Bax蛋白表达及IL-6、IL-21水平均升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05)。结论LncRNA CYTOR过表达可通过抑制miR-136-5p表达而促进细胞增殖及抑制细胞凋亡、炎性反应从而减轻H_(2)O_(2)诱导的大鼠背脊髓神经元细胞损伤。

三七皂苷R1抑制脂多糖诱导大鼠神经元细胞产生一氧化氮

目的 探讨三七皂苷R1对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导大鼠PC12细胞(大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤)产生一氧化氮(nitric oxide,NO)的抑制作用及其机制.方法 以1μg/mL LPS刺激PC12细胞,24 h后通过Griess法测定计算总NO含量,观察LPS对NO生成的影响.采用WST-1检测LPS和三七皂苷R1对PC12细胞活力的影响,荧光定量PCR和Western blot检测不同浓度三七皂苷R1(25、50μmol/L)对诱导型NO合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)和环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)的mRNA和蛋白表达水平变化.结果 不同浓度的三七皂苷R1在转录水平和翻译水平上都明显地抑制了LPS诱导的细胞炎性蛋白酶iNOS和COX-2的上调,并且其表达呈剂量依赖性(P<0.05).结论 三七皂苷R1对脂多糖诱导大鼠PC12细胞产生NO具有抑制作用,主要是通过抑制iNOS和COX-2表达进而起到抗氧化作用.

糖皮质激素在MCAO大鼠海马神经元凋亡中的作用及健脑安干预的研究

目的 :观察脑缺血再灌注后 2 4h内的内源性糖皮质激素对海马神经细胞凋亡的影响及中药对此的干预。方法 :应用大脑中动脉阻塞 (MCAO)模型 ,采取甲苯胺兰、TUNEL和免疫组化实验方法 ,动态观察脑缺血再灌注后 2 4h内的内源性糖皮质激素对大鼠海马神经细胞凋亡的影响及中药对此的干预。结果 :TUNEL阳性细胞从再灌注 2h开始表达 ,再灌注 6h阳性细胞表达继续增加 ,再灌注 12h达高峰 ,再灌注 2 4h下降。治疗组、对照组、拮抗剂组与模型组在再灌注各时点均有显著性差别 (P <0 .0 5 ,) ,其中治疗组和拮抗剂组差异极显著 (P <0 .0 1)。结论 :健脑安可有效抑制脑缺血再灌注 2 4内 ,内源性糖皮质激素对海马神经元的促凋亡作用。

低氧预适应减轻缺氧所致大鼠海马神经元线粒体膜改变

目的通过观察低氧预适应处理对缺氧引起的神经元bcl-2表达、线粒体膜电位变化的影响,探讨低氧预适应处理对神经元缺氧性损伤保护作用的机制。方法原代培养大鼠海马神经元细胞,分组处理后,采用免疫组织化学法对细胞bcl-2表达进行检测;采用罗丹明123染色测定线粒体膜电位,激光共聚焦扫描显微镜观察缺氧条件下各组细胞的线粒体膜电位变化。结果低氧预处理组海马神经细胞在急性缺氧1h复氧后,bcl-2表达阳性率为(74.5±9.8)%,较缺氧对照组(69.5±10.3)%明显提高,差异有统计学意义(P<0.05);线粒体膜电位测定发现,与缺氧对照组比较,低氧预处理组从缺氧第80s开始,各时间点线粒体膜电位均高于缺氧对照组(均P<0.05)。结论低氧预适应处理对原代培养大鼠海马神经元缺氧性损伤保护作用可能是通过增加缺氧后bcl-2表达,从而稳定线粒体膜,减慢神经元急性缺氧时线粒体膜电位降低的速度来实现的。

不同日龄大鼠颈上交感神经节神经元电转染方法

目的建立一种高效电转染不同日龄大鼠颈上交感神经节(superior cervical sympathetic ganglion,SCG)神经元细胞的方法。提高转染后细胞的成活率、转染效率和干扰效率。方法用传统的及经改良的神经元培养液分别培养电转染后的7日龄、14日龄和40日龄SD大鼠SCG细胞,24 h后用台盼蓝染色方法观察并计算细胞成活率;通过改变质粒DNA和siRNA与转染液比例,优化转染条件,于转染24h后在共聚焦显微镜下观察并计算转染效率或干扰效率。结果改良培养液可使14日龄以上SD大鼠SCG细胞转染后成活率达到75%以上,明显高于传统培养液转染后的成活率(P<0.01),且结果稳定,细胞状态良好,能够满足后续实验研究的要求;优化转染条件后,DNA的转染率及siRNA的干扰率显著提高,当DNA与转染液比例为1∶100(μg∶μL)时,细胞转染率最高;当siRNA与转染液比例为1∶50(μg∶μL)时干扰率最高。结论通过改良神经元培养液及优化转染条件,成功提高了电转染后细胞的成活率、转染效率和干扰效率,利用电转染方法可成功转染不同日龄SD大鼠SCG神经元。

二氧化硫衍生物对大鼠背根神经元瞬间外向钾电流和延迟整流钾电流的影响

运用全细胞膜片钳技术研究二氧化硫衍生物对大鼠背根神经元瞬间外向钾电流(IA和ID)和延迟整流钾电流(IK)的影响。结果发现二氧化硫衍生物剂量依赖性地增大钾通道的电导,电压依赖性地增大钾电流的幅度,且这种增大作用部分可逆。二氧化硫非常显著地使延迟整流钾电流的激活过程向超极化方向移动,使瞬间外向钾电流的失活过程向去极化方向移动。10μmol/L二氧化硫衍生物作用前后,延迟整流钾电流的半数激活电压分别是(20.3±2.1)mV和(15.0±1.5)mV;IA和ID的半数失活电压分别朝去极化方向移动了6mV和7.4mV。这些结果表明二氧化硫改变了钾通道的特性,改变了神经元的兴奋性。

焦亚硫酸钠对大鼠背根节神经元胞内钙离子浓度的影响

目的:探讨一种食品添加剂焦亚硫酸钠(SMB)对大鼠背根节神经元(DRG)的生理作用和毒性效应。方法:急性分离大鼠背根节神经元细胞后,应用Ca2+荧光指示剂Fura-2/AM标记细胞检测大鼠DRG神经元细胞内钙离子浓度的变化。结果:SMB可增大大鼠背根神经元胞内钙离子浓度。结论:SMB可以引起大鼠背根神经元胞内钙超载,进而可能导致一系列与钙离子浓度有关的中枢神经系统损伤。

试析大鼠海马神经元neurobasal无血清的原代培养方法

目的探讨neurobasal无血清原代培养大鼠海马神经元方法的可行性。方法选取经SPF级清洁新生24h内wistar大鼠共计8只，使用Neurobasal无血清原代方法培养大鼠海马神经元，对培养大鼠海马神经元的纯度进行检验。结果神经元在接种24h内贴壁，出现细小的突起，在2d后出现典型神经元特征，在12d出现细胞碎片；对5个视野中大鼠海马神经元细胞进行神经元纯度分析后发现，纯度达95％以上。结论Neurobasal无血清的原代培养方法可以为I临床研究提供较高纯度的大鼠海马神经元，适用于临床细胞学实验研究。