离体大鼠肾脏灌流技术在发现和评价促尿酸排泄药物中的初步应用

目的为建立发现和评价促尿酸排泄药物作用的离体模型,采用离体大鼠肾脏灌流技术,观察尿酸在离体肾脏中排泄特点和丙磺舒对尿酸排泄影响。方法制备离体大鼠肾脏灌流模型,随机分为对照组和丙磺舒处理组,以含复方氨基酸和65g.L-1牛血清白蛋白的K-H灌流液循环灌流90min,定时收集导尿管流出液和灌流液,测定其中菊粉、钠、葡萄糖及尿酸含量,计算肾功能参数和尿酸排泄情况。结果离体灌流肾脏的肾小球滤过率,尿量,肾小管重吸收水、钠、葡萄糖百分率等肾功能参数在灌流的90min期间处于稳定的生理范围内;对照组灌流肾脏尿酸排泄分数、尿酸清除率及90min内总尿酸排泄量分别为30%、0.30ml.L-1和15μmol,与对照组比较,丙磺舒使离体肾脏尿酸排泄分别提高36%、54%和99%。结论离体大鼠肾脏灌流技术可用于发现和评价促尿酸排泄药物作用。

对大鼠在体肠单向灌流技术中重量法的评价

目的:评价重量法在大鼠在体肠单向灌流技术中的应用。方法:以长春西汀为模型药物,采用大鼠在体肠单向灌流技术,对重量法和酚红法计算的净水流量值(NWF)、药物吸收速率常数(Ka)和药物表观吸收系数(Papp)进行比较,并对重量法中收集液在密度修正前后的NWF和Papp值进行比较。结果:重量法计算所得的NWF值显著高于酚红法(P<0.05),前者计算所得的Ka和Papp值略高于后者(P>0.05);重量法能显著减少实验误差;对收集液密度进行修正可以进一步提高实验数据的准确性。结论:重量法可以作为大鼠单向灌流在体肠吸收实验中校正灌流液体积的有效方法,它避免了加入“标示物”给实验带来的一系列问题。

大鼠在体单向肠灌流模型研究肉桂酸肠道吸收特性

目的研究肉桂酸在大鼠肠道的吸收部位和吸收机制,以及转运蛋白对肉桂酸肠道吸收的影响。方法建立在体单向肠灌流模型,采用HPLC法测定肉桂酸在肠道中的浓度变化,通过吸收速度常数(Ka)和表观吸收系数(Peff)来研究肉桂酸的吸收动力学特征。结果肉桂酸在各个肠段的Ka和Peff结果为十二指肠>空肠>回肠,十二指肠和空肠的Ka和Peff值显著性高于回肠(P<0.05),不同浓度肉桂酸在同一肠段的Ka和Peff值差异无统计学意义,加入MRP2抑制剂(吲哚美辛)后Ka和Peff值差异亦无统计学意义,但加入Pgp抑制剂(盐酸维拉帕米)后其值则显著性增加。结论十二指肠、空肠是肉桂酸吸收的主要部位,吸收机制为被动转运,肠道转运受Pgp转运蛋白的影响,但不受MRP2转运蛋白的影响。

高渗盐液灌流对大鼠离体心脏功能的影响

目的 探讨不同浓度高渗盐液对心脏功能的影响。方法 采用大鼠离体灌流模型 ,用不同钠离子浓度的灌流液进行顺性灌注 2 0min ,随后再用等渗灌流液灌注 5min ,连续观察冠状动脉血流量、心率、心输出量 (CO)、动脉压及左心室功能等指标的变化 ,并测心脏含水率。结果 含 16 5mmol LNa+ 的灌流液可明显增加CO、改善心脏的收缩舒张功能 ;而用高于 2 15mmol LNa+ 的灌流液灌流时 ,最初有短暂但十分明显的心脏收缩舒张功能障碍 ,但 5～ 10min后恢复到正常水平以上 ;各组在由高渗灌流液换为等渗时心脏收缩舒张功能都非常显著的增强。结论 高渗盐液能直接作用于心脏 。

养阴清热活血中药对大鼠离体灌流颌下腺唾液分泌的作用

目的:中草药能通过增加唾液的分泌而缓解口腔干燥症状。本试验研究临床常用养阴清热中药促唾液分泌功能。方法:成年wistar大鼠用苯巴比妥钠麻醉后,外科分离颌下腺,转移至37℃恒温浴槽。使用蠕动泵(Cole-Palmer)进行灌流。氯化氨甲酰胆碱(CCh)对照灌流后,用缓冲液洗脱,后单独用含中药的缓冲液灌流及中药与CCh联合灌流,观察中药对颌下腺唾液分泌的影响。结果:养阴清热活血中药单独灌流,大多不能或仅能促进唾液少量分泌,而其灌流时加入CCh,则能明显促进唾液的分泌(唾液分泌曲线呈持续升高平台)。只有丹参在在不加入CCh的情况下也能促进唾液分泌。结论:养阴清热中药对离体颌下腺具有促分泌作用。中药促唾液分泌实验研究将为中药治疗口干症状及相关疾病的临床应用提供理论依据。

适用于Langendorff离体心脏灌流大鼠心肌梗死动物模型的建立

目的建立适用于Langendorff离体心脏灌流大鼠心肌梗死的动物模型,为评价干细胞移植对急性心肌梗死后的心功能变化提供基础。方法选用Sprague-Dawley(SD)大鼠16只,结扎其左冠状动脉前降支中远1/3处,在结扎前后通过MPA多导生理记录仪连续描记心电图;4周后再次开胸进行Langendorff离体心脏灌流测定左室心功能和心肌组织病理学检查;另选仅开关胸后存活的10只SD大鼠作为对照组。结果造模成功率为62.50%(10/16);心电图动态监测在冠脉结扎后出现ST-T抬高的融合波,30 min后可见病理性Q波;4周后Langendorff离体心脏灌流装置系统检测显示左室收缩压峰值(LVSP)、左室内压等容相最大上升及下降速率(+dp/dtmax,-dp/dtmax)等指标较对照组降低,左室舒张末压峰值(LVEDP)则反之;病理组织切片可见结扎区域心肌纤维排列紊乱、坏死心肌被纤维组织取代。结论通过结扎左冠脉前降支的方法,4周后能够形成稳定的适用于Langendorff离体心脏灌流的心肌梗死动物模型,该模型能应用于干细胞移植对心脏功能影响的研究。

肾上腺髓质素和肾上腺髓质素原N端20肽对大鼠离体灌流心脏功能的影响

目的 :研究肾上腺髓质素原 (proadrenomedullin ,proADM)的不同肽段 ,肾上腺髓质素 (adrenomedullin ,ADM )和肾上腺髓质素原N端 2 0肽 (proadrenomedullinN terminal 2 0 peptide ,PAMP)的心脏效应及可能机制。方法 :Langendorff装置灌流离体大鼠心脏 ,通过心室内的乳胶水囊经换能器连于PowerLab多导生理记录仪 ,观察不同浓度的ADM和PAMP对左心室内压 (leftventricularpressure ,LVP)、左室内压变化速率 (leftventricularpressure(dp/dtmax)、冠状动脉 (冠脉 )流量 (coronaryfluid ,CF)和心率 (heartrate,HR)的影响 ,并检测灌流后心肌组织cAMP含量。结果 :ADM (1 0 -1 1 ～ 1 0 -8mol·L-1 )灌流呈浓度依赖地降低心脏LVP和±dp/dtmax ;PAMP也以浓度依赖的方式降低上述心功能的指标 ,且较相同浓度的ADM作用强。PAMP与ADM依次以不同浓度梯度联合应用 ,较各药单用对上述心功能指标的影响表现为低浓度 (1 0 -1 1 ～ 1 0 -1 0 mol·L-1 )时增强 ,而高浓度 (1 0 -9～ 1 0 -8mol·L-1 )削弱其心功能抑制效应。ADM和PAMP单独或联合应用时 ,冠脉流量均高于对照组水平。灌流液含有NO合酶 (nitricoxidesynthase ,NOS)抑制剂L NAME(Nω nitro L argininemethylester)时 ,ADM、PAMP或ADM联合PAMP灌流 ,其对LVP。

灌流流速决定慢性肝损伤大鼠的离体门脉压力

目的:建立灌流流速所决定的慢性各阶段肝损伤大鼠离体门脉压力方程.方法:常规观察CCl4慢性肝损伤第0、28、56、84天的肝脏系数与肝脏病,大鼠肝动脉、门脉和肝静脉插管,经肝动脉冲净残血,门脉灌流状态下游离肝脏;定量蠕动泵调节门脉灌流流速(μL/min),生物机能实验系统监测压力(mmHg),采用Prism-4非线型可变斜率回归由对数流速所决定的压力效能方程式,计算半效对数流速及其95%的可信区间.结果:在连续CCl4慢性肝损伤0、28、56、84天,由灌流数值流速(μL/min)决定的离体大鼠门脉灌流压力(mmHg)效能方程分别为y=-0.1428+1.1423/[1+10(13.805-3.84x)](r2=0.9996)、y=-0.1570+1.419/[1+10(4.666-1.27x)](r2=0.9958)、y=0.05106+0.96594/[1+10(10.877-2.958x)](r2=0.9987)和y=-0.09893+1.406/[1+10(4.3-1.158x)](r2=0.9989);半效对数流速(95%CI)分别为3.595(3.561-3.628)、3.674(3.285-4.064)、3.677(3.614-3.740)和3.713(3.449-3.977).结论:随着慢性肝损伤进展,离体门脉灌流流速所决定的压力方程具有不同系数和相同形式的特征,增高半效灌流流速可建立门脉舒张潜能低下的系统生物学门脉药效干模式.

大鼠离体肾脏灌流模型在筛选慢性肾病药物的初步应用

目的在慢性肾病(CKD)转基因大鼠建立大鼠离体肾脏灌流(IPK)模型,为CKD药物药效学研究提供可靠的工具。方法在患有CKD的转基因大鼠(n=7)建立稳定的IPK模型后,灌流1μmol/L环孢素A(CysA)60min,与未灌流CysA前相比,检测尿液中白蛋白含量的变化。同时,通过CKD转基因大鼠(n=5)体内实验,连续灌胃给药20 mg/kg CysA 15日,验证CysA改变尿液中白蛋白水平的作用。结果用1μmol/L的CysA灌流7只患有CKD的转基因大鼠60 min后显示,CysA具有显著的降低白蛋白尿水平的作用。体内药效学实验,连续灌胃给药20mg/kgCysA15日后,CysA也具有显著的降低白蛋白尿水平的作用。结论 CysA在IPK模型和体内药效学实验结果一致,成功地建立CKD转基因大鼠IPK模型,该模型可作为CKD药物药效学研究的工具。

禁食离体灌流鼠心对去甲肾上腺素和异丙肾上腺素的反应

目的：研究禁食２４ｈ的离体鼠心对去甲肾上腺素（ＮＥ）和异丙肾上腺素（ＩＳＯ）的反应。方法：用每４ｍｉｎ含不同浓度的ＮＥ或ＩＳＯ的Ｋ－Ｈ液灌流进食和禁食离体鼠心。连续记录了左心室发展压（ＬＶＤＰ）和心率（ＨＲ）。结果：对ＩＳＯ和ＮＥ反应的量效曲线均右移。对ＩＳＯ反应的禁食鼠的ＥＣ５０高于进食鼠（禁食鼠１．００Ｅ－７．７１２±０．０４２６，进食鼠１．００Ｅ－８．２８±０．０５１５ｎ＝４，Ｐ＜０．００１）；对ＮＥ反应的心律失常发生率明显低于进食鼠（禁食鼠４６．８０±６．３４次／３２分，进食鼠８３．８０±１０．１８次／３２分，ｎ＝５，Ｐ＜０．０１）。对ＩＳＯ反应两组心律失常发生率无明显差异。结论：禁食鼠心对ＮＥ和ＩＳＯ的反应均受抑制。这对心肌有保护作用。

一过性离体大鼠肝脏灌流模型的建立

目的利用UP-100通用灌流仪建立了一过性离体大鼠肝脏灌流模型。方法用Krebs-Henseleit碳酸氢盐缓冲液进行一过性离体大鼠肝脏灌流,在灌流时长90 min内通过检测AST、ALT和LDH的浓度,观察肝脏外观及胆汁流量,测定肝重变化,进行组织切片观察组织病理变化来评估离体灌流肝脏的损伤程度。结果 90 min灌流时长中,肝脏颜色质地正常,胆汁流量均匀,相应转氨酶释放量少,病理切片结果正常。结论离体大鼠肝脏在UP-100通用灌流仪90 min灌流过程中能保持较好的组织结构和肝脏功能,可用于离体肝脏的药物代谢研究。

离体灌流肾技术检测过氧亚硝基阴离子在大鼠缺血再灌注肾血管反应性损伤中的作用

目的探讨过氧亚硝基阴离子(ONOO-)在大鼠缺血再灌注肾血管反应性损伤中的作用。方法应用离体灌流肾(isolated perfused k idney,IPK)技术观察肾缺血再灌注(ischem ia reperfusion,I-R)后肾血管对去甲肾上腺素(nor-ep inephrine,NE)和乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)反应性的改变;观察应用氨基胍(am inoguan id ine,AG)阻断内源性NO生成对肾I-R大鼠IPK肾血管反应性的影响,以及给予外源性ONOO-后大鼠IPK肾血管反应性的改变。结果I-R后IPK肾血管对NE的缩血管反应性和对Ach的舒血管反应性都有明显降低,I-R5h较I-R1h进一步降低(均P<0.01)。ONOO-(40μmol.L-1)与veh ic le相比则显著降低IPK肾血管对NE和Ach的反应性(均P<0.01)。AG+I-R1h组大鼠IPK肾血管对NE和Ach的反应性与NS(生理盐水)+I-R1h组大鼠相比无显著差异(均P>0.05),AG+I-R5h组大鼠肾血管对NE和Ach的反应性较NS+I-R5h组明显增强(均P<0.05)。结论ONOO-在肾I-R所致的肾血管反应性损伤中具有重要的作用。

盐酸普萘洛尔单向灌流法大鼠在体肠吸收的研究

目的研究盐酸普萘洛尔(PNH)的肠吸收情况,为制剂合理选择处方和临床药代动力学与药效学的深入研究奠定基础。方法采用大鼠单向灌流模型,引入了重量法来标示灌流液体积。考察药液浓度和pH值对肠吸收的影响。结果 PNH在全肠道均有良好的吸收,且吸收不受药物浓度和pH值的影响。结论可以考虑将PNH制成匀速释放的剂型。

普萘洛尔对映体在离体大鼠灌流肝脏中的药动学研究

临床上应用的普萘洛尔系外消旋体。动物试验表明，S(-)-普萘洛尔对β-受体的阻断作用比R(+)-普萘洛尔大100倍。有资料显示：普萘洛尔主要在肝脏代谢。健康志愿者口服dl-普萘洛尔(80mg)后，其S-普萘洛尔与R-普萘洛尔的AUC比值为1．38倍，但t1/120(基本相近。蒙古犬给予40mg的普萘洛尔，S-普萘洛尔与R-普萘洛尔的AUC比值仅为0．48，

大鼠离体肝脏灌流系统的建立

目的:建立大鼠离体肝动脉/门静脉灌流系统的实验方法。方法:雌性Wistar大鼠麻醉状态下,肝动脉、门静脉和肝静脉插管;经肝动脉冲净残留血液,灌流状态下游离肝脏;定量蠕动泵调节肝动脉或门静脉的Krebs-Henseleit平衡液(或加等渗葡聚糖)的灌流流速,泰盟BL-420S生物机能实验系统监测肝动脉或门静脉的压力变化,采用Prism-4非线型可变斜率回归获得"有或无胶体渗透压"KH液灌流的流速-压力曲线及方程式,计算半效流速及其95%的可信限。结果:无胶体渗透压灌流状态下的肝脏系数无差别,肝动脉的半效流速为2 217(95%CI 1 209～4 068)μl·min^(-1),对数流速-压力直线方程为Y=142.4X+706.9;门静脉半效流速为3 791(95%CI 3 549～4 049)μl·min^(-1),对数流速-压力直线方程为Y=479.6X+5 034。等效胶体渗透压灌流状态下的肝脏系数无差别,肝动脉半效流速为3 754(95%CI 3 175～4 440)μl·min^(-1),对数流速-压力直线方程为Y=133.5X-719.0;门静脉半效流速为6 018(95%CI 5 565～6 508)μl·min^(-1),对数流速-压力直线回归方程为Y=538.3X+4 704。半效流速接近正常大鼠生理平均值,各半效流速95%可信限涵盖大鼠正常生理状态的变化范围。有或无胶体渗透压灌流状态之间总体无差别。结论:在恒流测压模式下,等渗灌流大鼠离体肝动脉和门静脉灌流系统的视窗时程长、机能变化稳定、操作流程简便,为认识肝动脉和门静脉离体舒缩机制奠定了基础。

离体灌流肾脏生理功能及其内在结构动态变化研究

通过研究灌流肾脏功能的动态变化过程,了解离体条件下肾脏功能损伤的关键因素.比较离体肾脏灌流保存120h过程中动静脉和输尿管流量变化,以及肾小囊滤过速度、滤过率和肾脏重吸收功能的动态变化,并对照比较了不同时间段肾脏内部超微结构的变化.在流维持120h过程中,肾脏功能变化的动态过程具有阶段性变化的特点,可以划分为四个阶段:0～2h期间的低温适应阶段;2～72h期间的平稳变化阶段;72h左右的细胞损伤阶段和72～120h期间的较严重损伤阶段.肾小管上皮细胞结构变化是影响细胞损伤阶段肾脏功能变化的重要因素.

柚皮苷在大鼠在体单向肠灌流模型上的吸收特征研究

目的:研究柚皮苷在大鼠在体单向肠灌流模型上的吸收特征。方法:建立检测大鼠肠道灌流样品中柚皮苷、柚皮素含量的超高效液相色谱法,采用大鼠在体单向肠灌流模型,考察柚皮苷(10μmol/L)的肠道(十二指肠、空肠、回肠、结肠)吸收及代谢特征[表观渗透系数(P_(eff))、吸收率、代谢率]。结果:柚皮苷、柚皮素在1.25~40、1.25~40μmol/L浓度范围内线性关系良好(R^2=0.999 4、0.996 6),检测限分别为0.5、0.4μmol/L,定量限均为1.25μmol/L,日内、日间精密度和回收率及在HBSS液及其小肠、结肠灌流液中的稳定性均符合相关要求。柚皮苷在大鼠十二指肠、空肠、回肠、结肠中的Peff分别为(0.28±0.19)、(0.71±0.17)、(0.30±0.02)、(0.59±0.19)(n=6),差异无统计学意义(P>0.05);吸收率分别为(2.90±2.14)%、(6.38±3.61)%、(3.69±0.56)%、(6.64±2.12)%(n=6);柚皮苷在大鼠4个肠段均可被代谢为柚皮素,代谢率分别为(2.98±1.51)%、(2.53±1.31)%、(2.24±1.33)%、(0.70±0.20)%(n=6)。柚皮苷在十二指肠中的吸收率最低,代谢率最高,与结肠比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:柚皮苷在大鼠肠道渗透性差、吸收不佳;柚皮苷在大鼠肠道无特定吸收部位,在小肠和结肠中均可被代谢为柚皮素,但小肠的代谢率明显高于结肠。

大鼠原位离体肺灌流模型在肺毛细血管通透性研究中的应用

目的在传统大鼠离体肺灌流模型基础上,建立改良的原位离体肺灌流模型,以研究评价肺毛细血管通透性.方法建立并利用大鼠原位离体肺灌流模型及内毒素诱导的肺损伤模型,测定伊文思蓝(EB)标记蛋白分子的血管外漏出量,计算肺白蛋白通透性表面积乘积(PS),定量评价肺毛细血管通透性.结果测定大鼠原位离体肺灌流的正常组、内毒素致肺损伤组中肺组织的PS值分别为5.37±0.94、25.00±8.8×10-2cm3/(min.g),二者间比较有统计学意义(P<0.05).结论该评价肺微小血管通透性的模型操作简单,定位准确,是一种可行的改良方法.

离体大鼠肝脏灌流法制备氯吡格雷活性巯基代谢物

目的建立氯吡格雷活性巯基代谢物(CATM)的制备方法,为顺式CATM的合成提供参考。方法以(S)-2-氧氯吡格雷为底物,采用离体大鼠肝脏灌流法和ChromCore 120 C18制备柱制备并分离纯化CATM。采用质谱和核磁共振氢谱鉴定目标产物,对比人体内活性构型(顺式CATM)保留时间确认目标产物中活性构型的占比。结果目标产物的转化率为11.71%,质谱和核磁共振氢谱鉴定目标产物为CATM。CATM的峰2~峰5为4个立体异构体,保留时间分别为21.3、22.3、26.5、27.3 min,峰面积占比分别为7.13%、7.23%、63.52%、14.97%。根据人体内CATM活性构型的保留时间为26.3 min,确定目标产物CATM中活性顺式异构体占比为63.52%。结论本方法成本低、步骤简单,可制备出活性构型占比较高的CATM。

离体肾脏灌流液成分研究

离体肾脏在人工环境下灌流有不同的研究目的和内容，传统的研究方向是为了异体移植，我们以离体肾脏为材料，研究肾脏的生命过程中内在信息与控制机理，这是二十一世纪生命科学研究方向之一，上述不同研究的共同之处是如何延长体外灌注存活时间。理论上的关键是理解、缓解和控制肾脏活性降解的过程。在这一程度上可以通过灌流液成分配制，正确模拟体内环境状态，以保持最佳的人工生命维持外环境来实现，我们的实验采用了仿生股动脉连续灌注方法对离体的肾脏进行体外灌流研究，并且对灌流液中维持胶体渗透压的各个成分进行了研究，结果发现对于长期肾脏灌流而言，右旋糖酐和甘露醇在中长期肾脏灌注中完全可以替代羟乙基淀粉（hydroxyethyl starch,HES)和葡萄糖酸盐（glconate)，对防止细胞水肿和组织间隙水肿起到较好的作用。