脾动脉注射IL-2在大鼠肝癌模型中的定位及其对免疫功能的影响

目的 :研究不同途径注射IL 2后在大鼠肝癌模型体内的分布和存留情况及其对机体免疫功能的影响。方法 :建立大鼠原位肝癌模型 ,分别经腹腔 (IP组 )、阴茎静脉 (IV组 )、脾动脉 (SA组 )注射以Iodogen法标记的1 31 I IL 2 ,比较其在各组中的分布和存留情况 ;并测定内源性IL 2水平、NK和LAK细胞活性、T细胞亚群改变以及sIL 2R、TGF β、IL 1 0水平。 结果 :与腹腔及静脉注射途径相比 ,脾动脉注射组的1 31 I IL 2血药浓度及肝脏、脾脏内的放射性浓聚升高更为迅速 ,药物高峰维持时间也显著延长。IP和IV组在给药后第 4天 ,IL 2水平达高峰 ,以后逐渐下降 ,至第 8天接近对照组水平 ;SA组IL 2峰值出现在第 6天 ,至第 8天尚呈较高水平。各组sIL 2R、TGF β、IL 1 0水平均较对照组为低 ,其中SA组降低维持时间最长。IP和IV组的NK和LAK细胞活性、CD4 + 亚群、CD4 + /CD8+ 虽有增加 ,但与对照组相比无统计学显著 ,而在SA组中上述各指标相对均有显著提升 (P <0 .0 5)。结论 :经脾动脉应用IL 2 ,能迅速升高血液、肝脏及脾脏内IL 2浓度 ,并在较长时间内维持较高浓度。经脾动脉应用免疫治疗对荷瘤大鼠免疫状态的改善显著优于经腹腔和静脉药 ,有望成为免疫治疗的新途径。

二乙基亚硝胺诱导大鼠肝癌模型的建立及评价

目的:探讨二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌模型的方法。方法:选取体重150～200 g的雄性Wistar大鼠120只,随机分为建模组和对照组。建模组实验大鼠以25 mg/kg的剂量进行二乙基亚硝胺腹腔注射,每周3次,并喂饲含30%酪蛋白和0.05%苯巴比妥钠的饲料。对照组大鼠以建模组的剂量和注射频率用生理盐水进行腹腔注射。在实验第10～18周,每隔2周对实验大鼠肝脏的肿瘤发病情况进行影像检查,将检查结果为阳性的大鼠处死做解剖分析,检查结果为阴性的大鼠继续饲养。结果:在18周时诱癌成功率为76.67%,病理学结果显示,建模组实验大鼠肝脏的病变包括了肝细胞的损伤坏死期、增生硬化期和癌变期。结论:通过长时间多次小剂量二乙基亚硝胺腹腔注射的方法,成功建立了二乙基亚硝胺的大鼠肝癌模型,此模型是研究人体肝癌成因及发展的理想可靠的活体动物模型。

大鼠肝癌模型中Piwil4、Mael和Ddx4基因mRNA和蛋白表达水平及其与肿瘤检测的关系

PIWI和piRNA的表达水平与肿瘤类型密切相关。Piwil2 mRNA在肝癌中的表达量比肿瘤周围的肝脏组织的表达量高。PIWI/piRNA通路基因Piwil4、Mael和Ddx4为候选癌基因,在多种癌组织中表达,而在肝癌组织中的研究尚无报道。为探讨Piwil4、Mael和Ddx4基因在肝癌组织中表达水平变化的影响,建立了大鼠肝癌模型,并提取血清用ELISA方法检测肿瘤标记物,采用实时荧光定量PCR、蛋白质免疫印迹方法和免疫组织化学方法检测正常肝组织与模型组肝组织中Piwil4、Mael和Ddx4基因mRNA转录和蛋白表达水平。结果表明,大鼠肝癌动物模型血清中肿瘤标记物含量明显升高。Piwil4、Mael和Ddx4基因mRNA及蛋白在肝癌模型组织中高表达。研究表明,肝癌模型组织中Piwil4、Mael和Ddx4基因表达水平有望作为肝癌检测的一种分子标志物。

大鼠肝癌模型肝动脉缺血预处理后的介入技术

原发性肝癌是临床常见的肿瘤之一，具有恶性程度高，病情进展快，生存期短，难以治愈的特点。手术是肝癌最有效的治疗手段。但肝癌起病隐匿，不易早期发现，一旦发现多属中晚期，失去手术机会，因此中晚期肝癌治疗效果一直不理想。

清香散对湿热型肝癌模型大鼠IL-2及TGF-α水平的影响

目的 :研究清香散对湿热型肝癌模型大鼠IL 2、TGF α变化的影响。方法 :雄性Wistar大鼠随机分为正常组 ( 7只 )、造模组 ( 2 8只 )。Walker 2 5 6肿瘤细胞株注射入大鼠皮下 ,长出皮下实体瘤 ,取瘤体周边组织剪成小块 ,造模组大鼠予肝脏手术植入小瘤块 ,予高糖高脂饲料饲养 ,置于高温高湿环境 ,将造模组大鼠分为肝癌模型对照组、氟脲嘧啶组、清香散组、联合治疗组 ,每组 7只 ,造模后第 2 0天处死大鼠 ,采血 ,用放免法测血清IL 2、TGF α。结果 :造模成功后大鼠的IL 2、TGF α比正常组升高 (P <0 0 5 ) ,清香散组和 5 FU组给药后 ,大鼠的IL 2增加 ,TGF α减少 ,二药联合治疗组大鼠变化大于单用清香散或 5 FU (P <0 0 5 )。结论 :清香散可增加湿热型肝癌大鼠血清IL 2含量 ,降低TGF α含量。清香散与 5 氟脲嘧啶协同调节细胞因子 ,联合抗癌 。

短期大鼠致肝癌模型肝脏线粒体损伤的研究

大鼠短期肝脏致癌模型是用来快速特异检测肝脏致癌物的试验模型,本实验使用此模型以研究癌前病变过程中肝脏线粒体的损伤情况。模型过程中,6周龄雄性SD大鼠40只随机平均分为4组,第0周,模型组大鼠按200mg/kg体重的剂量一次性腹腔注射启动剂二乙基亚硝胺(DEN)。对照组大鼠按1ml/kg体重的剂量一次腹腔注射生理盐水。第2周开始给予促癌剂2-乙酰氨基芴,按0.01%的浓度与饲料混合,给予模型组大鼠直至实验结束。第3周全部大鼠进行肝脏大部分切除术,在8周解剖。使用生化学方法检测线粒体特异性清除自由基的3个相关酶过氧化氢酶(CAT),谷胱甘肽还原酶(GSH-rd),超氧化物歧化酶(Mn-SOD);使用PCR方法检测线粒体DNA(mtDNA)损伤情况。模型组线粒体CAT,GSH-rd,Mn-SOD的活力较对照组有明显的下降,模型组大鼠肝脏线粒体DNA存在缺失。在模型重,模型组大鼠肝脏自由基产生过多而机体内的抗氧化防御系统不能将其消除时,可导致线粒体的氧化损伤;同时由于线粒体DNA容易受到活性氧的攻击,从而造成mtDNA的损伤。结果提示线粒体的氧化损伤及mtDNA的缺失可能癌前病变的产生相关。

AFP-L3、HSP70及AFP水平在大鼠肝癌发展中的动态变化

目的:通过动态检测大鼠肝癌模型造模各阶段血清中AFP-L3、HSP70和AFP水平的变化,对其在肝癌早期诊断中的价值做综合评价。方法:SD大鼠CCl4橄榄油溶液腹壁皮下注射,食用白酒溶液代替饮用水,建立大鼠肝硬化基础上的肝癌模型。从造模第6周起,每2周心脏采血1次,ELISA法检测大鼠血清中AFP-L3、HSP70和AFP水平,并取部分肝组织行病理学检验造模进度。结果:造模第8周发生肝硬化,第10周发生不典型增生及早期肝癌结节。AFP-L3和HSP70在造模第10周即显著升高,其阳性率分别为60%和70%,两者联合检测的阳性率为90%,HSP70在肝硬化阶段也有升高,AFP-L3没有显著变化。AFP水平在造模第12周才有显著升高,阳性率为60%,肝硬化阶段也略有升高,肝癌早期无显著变化。AFP-L3/AFP比值在造模第10周即显著升高(35.5%),其敏感性和特异性分别达70%和100%。结论:成功建立了大鼠肝硬化基础上的肝癌模型,传统指标AFP对极早期的肝癌不敏感,特异性不高,而AFP-L3和HSP70均较AFP敏感,两者联合可提高检测的敏感性,AFP-L3和AFP-L3/AFP比值均较AFP特异。

TGF-β1和HSP70在大鼠肝癌早期诊断中的价值探讨

目的:通过动态检测大鼠肝癌模型造模各阶段血清中TGF-β1和HSP70水平并与传统指标AFP比较,对其在肝癌早期诊断中的价值做综合的评价。方法:用CCL4诱导大鼠肝硬化基础上的肝癌模型。从造模第6周起,每两周心脏采血一次,ELISA法检测大鼠血清中TGF-β1、HSP70和AFP水平,并取部分肝组织行病理学检查。结果:造模第8周发生肝硬化,第10周发生不典型增生及早期肝癌结节。造模第10周TGF-β1和HSP70水平即显著升高,TGF-β1在肝硬化阶段无显著升高,而HSP70则略微有升高,二者特异性分别为90%和60%,阳性率分别为55%和70%,联合检测的阳性率为80%,造模第12周的阳性率分别达85%和90%,联合检测阳性率达100%;AFP水平在造模第12周才有显著升高,肝硬化阶段也有升高并与早期肝癌无显著性差异。其阳性率和特异性分别为60%和30%。结论:传统指标AFP对极早期的肝癌不敏感,特异性不高,而TGF-β1和HSP70均较AFP敏感、特异,二者联合可提高检测敏感性。

去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)在N-二硝基亚乙胺诱导原位肝癌模型、原位移植肝癌模型大鼠体内的表达与分布

目的 测定去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)在N-二硝基亚乙胺(DEN)诱导大鼠原位肝癌模型(DEN-HCC-Rat)和原位移植大鼠肝癌模型(OTT-HCC-Rat)中的表达。方法 DEN-HCC-Rat造模:模型组SD大鼠按照20 mg·kg^(-1) ig 0.25%DEN水溶液,每周1次,0.025%DEN水溶液供动物饮用;对照组每周ig 1次0.9%氯化钠溶液,灭菌水供动物饮用,于造模第4、10、18、22周取材。OTT-HCC-Rat造模:模型组SD大鼠肝叶注射N1-S1细胞,假手术组大鼠麻醉后给予微创缝合处理,于注射后14 d取材。HE染色观察肝组织病变;通过免疫组化、免疫荧光、Western blotting和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)实验检测各组ASGPR表达及分布。结果 通过HE染色确定DEN-HCC-Rat和OTT-HCC-Rat造模成功。在DEN-HCC-Rat中,免疫组化、免疫荧光、Western blotting、qRT-PCR结果均显示,与对照组比较,模型组大鼠肝组织ASGPR表达显著上调(P<0.05、0.01),且呈时间相关性;在OTT-HCC-Rat中,免疫组化结果显示模型组ASGPR表达显著高于假手术组(P<0.05),免疫荧光、Western blotting、qRT-PCR结果显示ASGPR在模型组与假手术组之间无显著性差异。结论DEN-HCC-Rat模型更好地模拟肿瘤微环境改变,且ASGPR在肝癌区域表达高于对照组大鼠肝脏,故可利用ASGPR介导肝靶向制剂的转运,提高肝靶向药物治疗效果。

养阴方和清解方分别对大鼠肝脏癌变过程影响的组织学观察

本研究应用黄曲霉毒素 B_1(AFB_1)致大鼠肝癌模型,动态观察养阴方和清解方在予 AFB_1同时及癌前病变出现后使用时肝脏的组织学变化。结果发现,养阴方和清解方对 AFB_1所致的肝脏损伤有保护作用;且对 AFB_1所致的肝癌前期病变有明显抑制作用;46周时两中药预防组的肝癌发生率明显低于模型组(P<0.01);在癌前病变出现后用养阴方的养阴治疗组,其肝癌发生率也低于模型组(P<0.05);且各中药组首例肝癌发生的时间明显迟于模型组。

原发性肝癌磁共振成像诊断的动物实验研究

本文采用11只大鼠肝癌模型活体MR成像,分析了对肝癌具有诊断意义的MRI征象,并将病灶内各种信号变化与病理进行了较细致的对照。结果表明:①在SE长TR、多回波图像上,肝癌的信号变化具有较特征性的规律,绝大多数病灶表现为不均匀的高信号区,并随回波时间延长信号强度衰减,信号变得更为不匀;②通过对T_1和T_2加权图像病灶内各种信号强度变化的综合分析可大致反映它们不同的病理学基础。

大鼠肝包膜下移植Walker-256制备肝癌模型

目的通过原位移植的方法制备大鼠肝癌动物模型。方法取大鼠肿瘤细胞Walker-256制备为浓度1×108个/ml,分别于Wistar大鼠肝包膜下接种0.04 ml。观察大鼠肝脏实体瘤的生长情况及肺转移的发生率。结果肝包膜下接种细胞悬液7 d可见较小肿瘤块生长;14 d开始出现肺转移,并伴有肠系膜、生殖系统的转移;21 d肺转移率达100%。肝肿瘤组织HE染色结果可见肿瘤组织呈条索及团块状排列,排列紊乱,癌细胞索之间由血窦相连,癌肿边缘的肝组织受压萎缩。肺组织切面有多个散在的圆形或卵圆形实化灶。HE染色结果可见腺体样或乳头状结构,核染色深,核仁、核膜比较清楚。

肝癌大鼠模型经射频消融术后乏氧微环境中缺氧诱导因子-1α、基质金属蛋白酶-9、血管内皮生长因子、转化生长因子-β1表达的影响

本研究旨在观察肝癌大鼠模型经射频消融术后乏氧微环境中缺氧诱导因子(HIF)-1α、基质金属蛋白酶(MMP)-9、血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响,现报道如下。一、材料与方法1.材料:取80只Wistar雄性大鼠进行研究,将其以随机数字表法分作射频消融组和生理盐水组,每组各40只。通过大鼠肝叶内瘤块种植法实现大鼠肝癌模型的建立,其中射频消融组予以射频消融,生理盐水组仅予以生理盐水干预。

ASM对异常黑胆质肝癌移植大鼠模型的干预

目的:探讨移植法制备异常黑胆质肝癌模型的可行性及维药异常黑胆质成熟剂(ASM)对肿瘤的干预作用。方法:用随机法将雄性SD大鼠分为正常对照组、模型对照组、病症模型组以及ASM药物治疗组(低、中、高剂量),正常对照组行假肝癌移植术(肝内注射生理盐水);模型对照组采用移植法将walker-256腹水瘤细胞进行肝内接种,建立肝癌模型;病症模型组首先采用多重因素(干寒饲养、足底刺激、铁管制动等)诱导制备异常黑胆质证大鼠模型,在此基础上进行肝内接种walker-256腹水瘤细胞,建立异常黑胆质证肝癌大鼠模型;ASM药物治疗组分为低、中、高不同剂量组(2.53,5.06,10.12 g/kg),异常黑胆质证大鼠接种瘤细胞后给予ASM灌胃治疗。2 w后处死取材,观察各组大鼠肿瘤发生情况、肿瘤体积、腹水形成率及腹壁后转移率;通过光镜及电镜观察各组大鼠肝癌组织肿瘤细胞形态结构变化。结果:模型对照组与病症模型组大鼠在肿瘤发生率、腹壁后转移率及肿瘤体积大小方面无显著差异(P>0.05);与模型对照组相比,病症模型组大鼠腹水形成率显著增高,差异有统计学意义(P<0.05);与病症模型组相比,低、中剂量ASM可以显著减小肿瘤体积、降低腹水形成率及腹壁后转移率(P<0.05),而高剂量ASM组仅有腹水形成率显著降低(P<0.05),肿瘤体积及腹壁后转移率无明显变化;光镜及电镜下观察可见,不同剂量ASM治疗组大鼠肿瘤细胞的水肿程度增加,瘤细胞发生变性坏死,其周围炎性细胞浸润明显增多。结论:异常黑胆质可能促进肝癌腹水形成和转移,从而影响肝癌的发展及转归;ASM对肿瘤细胞有一定损伤,可以减少肝癌腹水形成和转移,从而起到一定的抗肿瘤作用,影响肿瘤转归。

肿瘤

S857.4 20021397二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌模型的建立及其应用/吴清洪(第一军医大学实验动物中心 510515),顾为望,程天明…∥动物医学进展.-2001,22(3).-50～51用二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌模型,通过病理学与影像学进行对照检查,证实成功诱发出肝癌病灶模型,并具有与人相象的病变过程及病理学变化特征,

鳖甲煎丸通过TGF-β/Smad信号通路抑制DEN诱导肝癌大鼠上皮间质转化的机制

目的:通过研究鳖甲煎丸对二乙基亚硝胺(DEN)诱导肝癌模型大鼠中转化生长因子-β(TGF-β)/Smad通路信号分子及下游靶基因的影响,探讨鳖甲煎丸抗肝癌侵袭转移的分子机制。方法:大鼠分为正常组、模型组、鳖甲煎丸组(2.2 g·kg^-1·d^-1),对模型组及鳖甲煎丸组大鼠使用DEN进行腹腔注射,诱导大鼠肝脏发生肝炎-肝硬化-癌变病理改变,鳖甲煎丸组在肝硬化阶段给予鳖甲煎丸连续灌胃6周,收集血清及肝脏标本。采用试剂盒检测大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),总胆红素(TBIL),白蛋白(Alb),γ-谷氨酰转肽酶(GGT),碱性磷酸酶(ALP);苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠肝脏病变;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测转化生长因子(TGF)-β1的mRNA转录水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测TGF-β/Smad通路中TGF-β1,Smad2/3,磷酸化Smad2/3及上皮间质转化标志物N-钙黏蛋白(N-cadherin),E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的蛋白表达水平。结果:鳖甲煎丸组与模型组之间肝功能指标差异均无统计学意义。与模型组比较,鳖甲煎丸能改善大鼠肝癌组织中细胞呈气球样变性、水肿、凝固性坏死的病理变化,降低肝癌组织中TGF-β1mRNA转录及蛋白表达水平(P<0.01),下调磷酸化Smad2蛋白表达水平(P<0.01),同时下调下游靶基因蛋白N-cadherin,Vimentin蛋白表达水平(P<0.01)。结论:鳖甲煎丸可能通过减少肝癌组织中TGF-β1的表达水平,抑制由TGF-β/Smad通路激活介导的肝癌细胞上皮间质转化(EMT),从而达到抗肝细胞癌转移侵袭的作用。

缺氧诱导因子-1α、血管内皮细胞生长因子及微血管密度在大鼠肝脏癌变过程中的表达及相关性

我们曾联合应用二乙基亚硝胺（DEN）和N-亚硝基吗啉（NMOR）成功建立了诱导性SD大鼠肝癌模型。本研究旨在通过动态检测肝癌形成过程中各时期缺氧诱导因子（HIF）-1α及血管内皮细胞生长因子（VEGF）的表达，并用CD34标记血管内皮细胞，计算微血管密度（MVD），探讨HIF-1α、VEGF的表达及与肿瘤血管生成的关系。