亚硒酸钠对大鼠肾小球系膜细胞HBZY-1单核细胞趋化蛋白-1mRNA表达的影响

目的观察亚硒酸钠对HBZY-1细胞表达单核细胞趋化蛋白-1(monocytechemoattractantprotein-1,MCP-1)的影响,从而研究硒在防治糖尿病肾病(diabeticnephropathy,DN)中的作用机制。方法分别以高葡萄糖、高胰岛素、过氧化氢和糖基化终末产物(advancedglycosylationendproducts,AGE)刺激HBZY-1细胞;先加入100nmol/L亚硒酸钠预处理后,再分别给予以上4种刺激因素孵育HBZY-1细胞,分别检测HBZY-1细胞MCP-1mRNA的表达并比较。结果4种刺激因素均可作为独立因素,导致HBZY-1细胞MCP-1mRNA表达量增加;亚硒酸钠能抑制上述4种因素所致的MCP-1mRNA的表达。结论亚硒酸钠通过抑制MCP-1mRNA在HBZY-1细胞中的表达,从而有效防治糖尿病肾病的发生发展,表明硒在糖尿病肾病的防治过程中发挥积极作用。

Sublytic C5b-9上调KLF5促进Thy-1肾炎大鼠肾小球系膜细胞生成IL-23的作用

目的:研究亚溶解型C5b-9(sublytic C5b-9)上调转录因子Krüppel样因子5(Krüppel-like factor 5,KLF5)促进Thy-1肾炎(Thy-1 nephritis,Thy-1N)大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)产生炎症因子白细胞介素(interleukin,IL)-23的作用。方法:(1)建立大鼠Thy-1N模型和体外培养大鼠GMC,用Western blot(WB)检查Thy-1N大鼠肾组织和受sublytic C5b-9刺激的GMC中KLF5和IL-23的表达。(2)分别将KLF5过表达质粒(pIRES2-KLF5)或KLF5小干扰质粒(shKLF5)转染GMC,通过实时荧光定量PCR和WB检测KLF5和IL-23的mRNA和蛋白水平。(3)将IL-23全长启动子荧光素酶报告基因质粒(p GL3-IL-23-FL)转染GMC,再给予sublytic C5b-9刺激,或将p GL3-IL-23-FL与pIRES2-KLF5或shKLF5共转染GMC,用荧光素酶报告基因实验检测IL-23启动子活性的变化。(4)将慢病毒(lentivirus,LV)包装的LV-shKLF5和LV-shCTR行肾动脉灌注术导入大鼠肾组织,经小动物脏器可见光三维成像和冰冻切片观察GFP表达,证实LV-shCTR在肾组织中富集效率。之后再复制大鼠Thy-1N,用WB检查肾组织中KLF5和IL-23的蛋白表达。结果:(1)Thy-1N大鼠的肾组织和sublytic C5b-9刺激的GMC中,KLF5和IL-23的表达均显著升高,且KLF5的表达高峰稍早于IL-23。(2)在GMC中过表达或敲低KLF5能分别引起IL-23表达的升高或降低。(3)Sublytic C5b-9刺激或KLF5过表达均可增加GMC中IL-23启动子的活性,但敲低KLF5后可明显下调由sublytic C5b-9刺激GMC诱导的IL-23启动子活性。(4)敲低Thy-1N大鼠肾组织中KLF5的表达后,其肾组织中IL-23的表达水平明显降低。结论:大鼠Thy-1N发病早期,sublytic C5b-9刺激GMC后可通过上调KLF5促进IL-23基因的转录与表达。

高糖环境对HBZY-1大鼠肾小球系膜细胞IL-18、IL-1β、IL-6、TNF-α表达的影响

目的:观察高糖环境下肾小球系膜细胞IL-18和IL-1β、IL-6、TNF-α表达的变化及关系。方法:实验分组:(1)正常糖组(NG组)(葡萄糖浓度5.5mmol/L);(2)高糖组(HG组)(葡萄糖浓度25mmol/L);(3)IL-18正常糖组(IL-18/NG组):IL-18浓度分别为1ng/dl(IL-18/NG-1组),10ng/dl(IL-18/NG-2组),50ng/dl(IL-18/NG-3组),100ng/dl(IL-18/NG-4组)+葡萄糖浓度5.5mmol/L;荧光定量PCR检测各组IL-18和IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA的表达。结果:与NG组比较,HG组IL-18和IL-1β、IL-6、TNF-α表达增加,NG组IL-1β、IL-6、TNF-α表达水平随IL-18浓度增高而增加。结论:高糖可导致炎症因子IL-18、IL-1β、IL-6、TNF-α表达升高;IL-1β、IL-6、TNF-α表达升高可能依赖于IL-18,且有剂量依赖性。

高糖环境对HBZY-1大鼠肾小球系膜细胞IL-18、TGF-β1表达的影响

目的:观察高糖环境下肾小球系膜细胞白细胞介素18(IL-18)、转化生长因子β1(TGF-β1)表达的变化及其相互关系。方法:将HBZY-1大鼠肾小球系膜细胞分别培养在正常葡萄糖(NG组:葡萄糖浓度为5.5 mmol/L)和高糖浓度(HG组:葡萄糖浓度为25 mmol/L)环境中,荧光定量PCR检测各组IL-18和TGF-β1 mRNA的表达量,而后分组加入不同浓度的IL-18(浓度分别为1、10、50、100 ng/dL)和IL-18抗体(浓度为100μg/dL),荧光定量检测TGF-β1 mRNA的表达量。结果:与NG组比较,HG组细胞IL-18、TGF-β1表达增加,TGF-β1表达水平随IL-18浓度增高而增加,用IL-18抗体阻断IL-18后TGF-β1的表达受到抑制。结论:高糖可导致IL-18、TGF-β1表达升高;TGF-β1表达升高依赖于IL-18,且有剂量依赖性;阻断IL-18可抑制TGF-β1的升高。

TGF-β1对醛糖还原酶在大鼠系膜细胞及人肾小球肾炎中表达的影响

目的 探讨转化生长因子 β1(tranforminggrowthfactor betal,TGF β1)对其反应性基因产物醛糖还原酶(aldosereductase ,AR)在大鼠系膜细胞中表达的影响及两者在人肾小球肾炎中的表达及其相互关系。方法 采用RT PCR、Westernblot法观察外源性TGF β1对大鼠系膜细胞中AR表达的影响 ;以 12例肾小球轻微病变作为对照 ,对各种不同组织学类型的IgA肾病 (15例 ) ,膜性肾炎 (14例 ) ,局灶节段增生性肾炎 (12例 ) ,狼疮性肾炎 (14例 ) ,新月体性肾炎 (9例 )的人肾穿刺活检标本 ,应用免疫组织化学ABC方法分别观察TGF β1和AR在肾炎组织中的表达 ,并对其染色强度作图像定量分析。结果 外源性TGF β1作用后 ,大鼠系膜细胞中AR的mRNA表达与蛋白水平升高 ,并显示出一定的时间与浓度依赖性。各型肾炎中TGF β1的表达均显著高于对照组 ;除IgA肾病之外的各型肾炎中AR的表达均显著高于对照组 ,AR的表达与TGF β1表达之间具有显著的相关性。结论 TGF β1相关反应性基因产物AR的表达与TGF β1的作用密切相关 。

祛风通络方抑制NF-κB活化对脂多糖诱导的体外培养大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1mRNA和IL-6mRNA表达的影响

目的研究祛风通络方对脂多糖刺激大鼠肾小球系膜细胞表达炎性细胞因子TGF-β1、IL-6的影响及其作用机制。方法采用体外培养大鼠系膜细胞和血清药理学方法,分为空白组,病理组,治疗组和阳性对照组。采用生物素核酸-蛋白结合凝胶迁移电泳分析法检测NF-κB的表达;RT-PCR检测TGF-β1mRNA和IL-6mRNA表达。结果祛风通络方能够抑制脂多糖刺激肾小球系膜细胞中NF-κB活化,且在祛风通络方的作用下,TGF-β1mRNA和IL-6mRNA表达均呈不同程度减弱。结论提示祛风通络方可能通过抑制NF-κB活化,下调TGF-β1mRNA和IL-6mRNA的表达达到减轻系膜细胞增殖,防止肾小球硬化的作用。这可能是祛风通络方治疗系膜增生性肾炎的机制之一。

罗格列酮对高糖刺激的大鼠肾小球系膜细胞B_1整合素、ICAM-1表达的影响

目的观察过氧化脂质体增殖激活受体γ(PPARγ)激动剂噻唑烷二酮类化合物(罗格列酮,RGZ)对高糖刺激大鼠肾小球系膜细胞细胞间粘附分子-1(ICAM-1)和β1整合素表达的影响,了解PPARγ与粘附分子的关系。方法体外培养大鼠HBZY-1肾小球系膜细胞,分为9组:正常糖组,高糖组,甘露醇组,正常糖及高糖加1、5、10μm o l/L罗格列酮组。干预作用24 h后采用细胞免疫组化染色检测ICAM-1表达,间接免疫荧光染色及流式细胞仪检测β1整合素表达。结果高糖刺激使系膜细胞ICAM-1、β1整合素表达增加,且不依赖于渗透压。罗格列酮能够抑制正常糖和高糖诱导的系膜细胞ICAM-1、β1整合素表达;高糖组罗格列酮抑制作用更强,且呈剂量依赖性。β1整合素与ICAM-1呈正相关。结论粘附分子参与了糖尿病肾病(DN)发病机制,PPARγ激动剂罗格列酮可能通过对高糖刺激粘附分子表达的抑制效应而影响DN系膜扩张和肾小球硬化过程。

益气化瘀清热方及其拆方对大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1/Smad3信号通路的影响

目的:对益气化瘀清热方进行拆方,通过观察各类含药血清对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导下体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(primary mesangial cells,Ms C)表达TGF-β1及Smad3蛋白的影响,探讨不同类中药的作用强度以及益气化瘀清热方治疗肾小球肾炎的作用机制。方法:采用Wersten Blot法检测各组含药血清对大鼠Ms C表达TGF-β1及Smad3蛋白的影响。结果:Wersten印迹结果显示:各组含药血清均能抑制体外培养的Ms C表达TGF-β1及Smad3蛋白,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);其中复方组作用最强,与其他含药血清组比较差异有统计学意义(P<0.05),清热组与化瘀组比较无明显差异(P>0.05),但优于益气组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:益气化瘀清热方及其拆方、雷公藤多苷均能抑制体外培养的大鼠Ms C表达TGF-β1及Smad3蛋白的表达。复方组作用明显优于其他组,清热组及化瘀组次之,益气组最弱。

PDGF对大鼠肾小球系膜细胞表达PAI-1的影响

目的:探讨血小板源性生长因子(PDGF-BB)对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞表达纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)的影响。方法:以0、5、10 ng/ml终质量浓度的PDGF-BB刺激体外培养的大鼠肾小球系膜细胞分别作用0、12、24、48h,以发色底物显色法检测细胞上清液中PAI-1的活性;以0、5、10 ng/ml质量浓度的PDGF-BB刺激系膜细胞24 h和10 ng/ml质量浓度的PDGF-BB刺激细胞0、1 2、24、48 h,半定量RT-PCR观察系膜细胞PAI-1 mRNA表达情况。结果:0、5、10 ng/ml的PDGF-BB作用于系膜细胞24 h,其PAI-1 mRNA/GAPDH mRNA分别为0.296、0.428、0.542。10 ng/ml的PDGF-BB作用系膜细胞0、12、24、48 h,PAI-1 mRNA/GAPDH mRNA分别为0.156、0.345、0.493、0.597,表现为浓度和时间依赖效应。PDGF-BB也可浓度依赖性地增加PAI-1的活性,24 h内活性逐渐增高,48 h时下降。结论:PDGF-BB可上调体外培养的大鼠肾小球系膜细胞PAI-1的活性及其mRNA的表达,提示PDGF可能通过抑制细胞外基质的降解导致细胞外基质的积聚,从而参与肾小球硬化的过程。

lncRNA TUG1吸附microRNA-144对狼疮肾炎小鼠肾小球系膜细胞炎症因子分泌与凋亡的影响及其机制研究

目的探讨长链非编码RNA牛磺酸上调基因1(lncRNA TUG1)吸附microRNA-144(miR-144)对狼疮肾炎小鼠肾小球系膜细胞炎症因子分泌与凋亡的影响机制。方法 B6.MRL-FaslprNju系统性红斑狼疮模型小鼠20只和C57BL/6健康小鼠5只在适应性条件下喂养5 d。每天收集B6.MRL-FaslprNju系统性红斑狼疮模型小鼠24 h尿量,尿蛋白浓度> 1 mg/L表明狼疮肾炎发病,为狼疮肾炎组。C57BL/6小鼠为正常组。分离纯化两组小鼠肾小球系膜细胞。对lncRNA TUG1实施亚细胞定位,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测狼疮肾炎组和正常组小鼠肾组织中lncRNA TUG1和miR-144 mRNA相对表达量。狼疮肾炎组小鼠肾小球系膜细胞转染并分为NC组(肾小球系膜细胞转染阴性对照序列)、TUG1过表达组(肾小球系膜细胞转染TUG1)、shTUG1组(肾小球系膜细胞转染sh-TUG1)、miR-144 mimic组(肾小球系膜细胞转染miR-144 mimic)、TUG1过表达+miR-144 mimic组(肾小球系膜细胞转染TUG1和miR-144 mimic)。双荧光素酶报告实验验证lncRNA TUG1和miR-144的靶向关系,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的水平。Western blotting法检测纤维化标记因子Ⅳ型胶原(ColⅣ)、纤连蛋白(FN)的蛋白相对表达量。MTT法检测各组细胞增殖活力,Transwell实验检测各组细胞侵袭数,流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果与正常组小鼠比较,狼疮肾炎组小鼠肾组织中的miR-144 mRNA相对表达量升高,lncRNA TUG1 mRNA相对表达量降低(P <0.05)。lncRNA TUG1与miR-144存在靶向结合关系。NC组、TUG1过表达组、sh-TUG1组、miR-144 mimic组、TUG1过表达+miR-144 mimic组细胞TNF-α、IL-1β、IL-6水平比较,差异有统计学意义(P <0.05);与NC组比较,TUG1过表达组TNF-α、IL-1β和IL-6水平降低,miR-144 mimic组TNF-α、IL-1β、IL-6水平升高(P <0.05)。各组的ColⅣ、FN蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义(P <0.05);与NC组比较,TUG1过表达组ColⅣ和FN蛋白相对表达量降低,miR-144 mimic组ColⅣ、FN蛋白相对表达量升高(P <0.05)。各组不同时间点的肾小球系膜细胞增殖活力比较,采用重复测量设计的方差分析,结果:(1)不同时间点的肾小球系膜细胞活力有差异(P <0.05);(2)各组肾小球系膜细胞活力有差异(P <0.05);(3)各组的细胞活力变化趋势有差异(P <0.05);与NC组48 h和72 h比较,TUG1过表达组48 h和72 h细胞增殖活力降低(P <0.05),sh-TUG1组48 h和72 h细胞增殖活力增强(P <0.05),miR-144 mimic组48 h和72 h细胞增殖活力增强(P <0.05)。各组肾小球系膜细胞侵袭数和细胞凋亡率比较,差异有统计学意义(P <0.05);与NC组比较,TUG1过表达组的细胞侵袭数减少(P <0.05),细胞凋亡率升高(P <0.05);sh-TUG1组细胞侵袭数增多(P <0.05),细胞凋亡率降低(P <0.05);miR-144 mimic组细胞侵袭数增多(P <0.05)、细胞凋亡率降低(P <0.05)。结论 lncRNA TUG1吸附miR-144进而抑制狼疮肾炎小鼠肾小球系膜细胞炎症因子分泌,减少细胞增殖并促进凋亡。

NF-κB活化在IL-1β诱导的小鼠肾小球系膜细胞表达IL-6中的作用

目的 :研究NF -κB在rhIL - 1β刺激引起的体外培养的鼠肾小球系膜细胞表达IL - 6中的作用。 方法 :NF -κΒ活性检测采用电泳迁移率改变法 (EMSA) ,IL - 6mRNA表达采用逆转录 /聚合酶链反应 (RT/PR)检测 ,培养上清IL - 6蛋白含量采用ELISA检测。结果 :rhIL - 1β刺激肾小球系膜细胞时 ,在上调IL - 6蛋白和基因表达的同时亦激活NF -κB ,而且这种上调作用可被NF -κB特异性抑制剂PDTC所阻抑。结论 :IL - 1β诱导鼠肾小球系膜细胞表达IL - 6是通过NF -κB调控 ,NF

大鼠Thy-1肾炎增殖病变及sublytic C5b-9致其肾小球系膜细胞增生的实验研究

目的:检查大鼠Thy-1肾炎(Thy-1 nephritis,Thy-1N)肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)的增生病变及亚溶解型(sublytic)C5b-9复合物在GMC增殖中的作用。方法:复制大鼠Thy-1N模型,分别于注射Thy-1抗体后18 h、3 d和7 d时,取肾组织,用real-time PCR和Western blot方法检查其肾组织中细胞增殖指标,即细胞周期蛋白D2(cyclin D2)和增殖细胞核抗原(proliferative cell nuclear antigen,PCNA)的mRNA丰度及蛋白表达水平。用免疫荧光观察肾小球中C5b-9复合物的沉积。同时,使用BrdU掺入法、光镜及电镜观察大鼠肾小球细胞的增殖情况。此外,体外培养大鼠GMC,进行不同分组处理后再给予sublytic C5b-9刺激,用3H-胸腺嘧啶核苷酸掺入法(3H-thymidine incorporation,3H-TdR)检查GMC的增殖情况。结果 :大鼠Thy-1N病变18 h,肾组织中cyclin D2、PCNA表达和肾内BrdU阳性细胞数均开始升高,实验3 d和7 d,其表达进一步提高。同时肾小球内可见C5b-9复合物沉积,部分C5b-9包绕的肾细胞形态完好。另形态学观察还发现,实验18 h,部分GMC溶解坏死,而实验3 d,GMC数量明显增多,7 d增加更为显著。体外实验中,大鼠GMC在sublytic C5b-9刺激后18 h,其细胞增殖水平显著增高,而用sublytic C5b-9刺激GMC产生的培养上清处理正常的GMC后,亦能轻度刺激GMC增殖。结论:大鼠Thy-1N肾小球病变存在早期增殖和继发增生的病理改变,而GMC的早期增殖可能与sublytic C5b-9作用有关。

姜黄素对转化生长因子-β1诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖及Smads信号通路的影响

目的:观察姜黄素对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖及TGF-β1/Smads信号通路的影响。方法:采用TGF-β1诱导肾小球系膜细胞增殖和分泌胶原,实验分为空白对照组、单纯TGF-β1刺激组、姜黄素组3组。MTT法检测药物对肾小球系膜细胞增殖的抑制率,ELISA法检测肾小球系膜细胞Ⅰ型胶原的表达,Western blot法检测肾小球系膜细胞pSmad2的表达。结果:姜黄素能够显著抑制TGF-β1诱导的肾小球系膜细胞增殖(P<0.01)及Ⅰ型胶原分泌,并明显下调pSmad2蛋白表达。结论:姜黄素能部分阻断TGF-β/Smads信号传导通路的激活,抑制Ⅰ型胶原分泌及肾小球系膜细胞增殖。

1,25(OH)_2D_3对大鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响

目的探讨1,25一二羟基维生素D3[1,25(OH)2D3]对大鼠系膜细胞增殖与凋亡及其相关基因Fas表达的影响。方法体外培养的大鼠系膜细胞,分为正常对照组(0 mol/L)和不同浓度1,25(OH)2D3干预组(10-10mol/L;10-8mol/L;10-6mol/L),采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法及流式细胞仪,检测不同作用时间(24 h、48 h)下,系膜细胞增殖及凋亡情况,免疫荧光染色法观察干预24 h后,凋亡相关基因Fas的表达情况并测定各组荧光强度。结果与正常对照组相比,1,25(OH)2D3干预组,可明显抑制系膜细胞增殖,促进凋亡,并呈作用时间依赖性。同时免疫荧光染色证实干预浓度越大,系膜细胞内Fas表达增多,荧光强度增高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 1,25(OH)2D3干预大鼠肾小球系膜细胞,能抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,Fas的表达增多,呈浓度和时间依赖性。

高糖刺激下大鼠肾小球系膜细胞MMP-2，TIMP-2，MT1MMP 和CTGF的表达及意义

目的观察高糖刺激的大鼠肾小球系膜细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及其组织抑制物-2(TIMP-2)、膜型基质金属蛋白酶-1(MT1-MMP)和结缔组织生长因子(CTGF)的动态变化以探讨糖尿病肾病(DN)的发病机制。方法体外培养的大鼠HBZY-1肾小球系膜细胞分为低糖(5.5mmol/L葡萄糖)组、高糖(30mmol/L葡萄糖)组和渗透压对照(5.5mmol/L葡萄糖+24.5mmol/L甘露醇)组,24、48、72、96h后采用RT-PCR及Western blotting法分别检测MMP-2、TIMP-2、MT1-MMP及CTGF的mRNA及蛋白表达情况,酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清中Ⅳ型胶原的含量。结果 Western blotting结果显示,与低糖组相比,高糖组MMP-2的表达在24h时略有升高,较低糖组增加10%±4%(P<0.05),至48h时则较低糖组减少42%±2%,其后随时间延长表达持续降低,至96h时较低糖组减少78%±2%;MT1-MMP表达在24h开始下降并随时间呈下降趋势,与低糖组相比较,在刺激的24h,高糖组MT1-MMP表达下降了29%±3%,随后持续下降,至96h则下降了78%±9%(P<0.01)。高糖组各时间点TIMP-2和CTGF表达均较低糖组增高,其中CTGF的表达在高糖刺激的24h即显著增高,为低糖组的201%±24%,随后持续增高,至培养96h为低糖组的484%±51%(P<0.01);TIMP-2的表达在24h时较低糖组增加55%±3%,且随时间延长呈增高趋势(P<0.01)。MMP-2、TIMP-2、MT1-MMP和CTGF的mRNA表达与相应蛋白的表达趋势基本一致。与低糖组相比,高糖组细胞上清中的Ⅳ型胶原于24h即有增加,且持续增高至96h(P<0.05)。低糖组和渗透压对照组组内、组间的各指标差异均无统计学意义。结论尽管高糖刺激早期可小幅诱导MMP-2的表达增强,但长期高糖刺激则可抑制MMP-2和MT1-MMP的表达及活化,同时促进系膜细胞TIMP-2和CTGF的表达。DN中肾小球细胞外基质的积聚可能是由于上述细胞因子和蛋白酶引起细胞外基质代谢失衡所致。

螺内酯对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞增殖及TGF-β_1、FN分泌的影响

目的探讨螺内酯对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)增殖的抑制作用及转化生长因子β1(TGF-β1)、纤维黏连蛋白(FN)分泌的影响。方法将大鼠GMCs置于低糖、高糖及高糖+不同浓度螺内酯中传代培养,并以此分组。采用噻唑蓝法检测各组大鼠GMCs增殖情况,采用ELISA法检测各组TGF-β1、FN分泌情况。结果高糖培养组大鼠GMCs增殖明显高于低糖培养组(P<0.05)。加入螺内酯后,GMCs增殖受到抑制,与低糖、高糖组比较P<0.05或<0.01,且随着螺内酯剂量增加细胞增殖抑制递增。螺内酯可明显减少TGF-β1、FN的分泌(P<0.05或<0.01),并随浓度增高、时间延长抑制作用增强。结论高糖能刺激大鼠GMCs增殖;螺内酯能抑制大鼠GMCs增殖,并可抑制TGF-β1、FN分泌。

依那普利对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞产生TGF-β1、LN及CTGF表达的影响

目的观察依那普利(Enalapril,Ena)对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)转化生长因子-β1(TGF-β1)、层黏连蛋白(LN)及结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响。方法大鼠GMCs分别培养于正常浓度葡萄糖(5.5mmol/L)、高浓度葡萄糖(20mmol/L)及高糖和不同浓度(10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L)的Ena中,同时设空白对照。分别采用放射免疫法、酶联免疫吸附实验(ELISA)检测不同时间(24、48、72h)细胞培养上清液中TGF-β1、LN含量,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测72h细胞CTGFmRNA的表达。结果与空白对照组比较,正常糖组和高糖组TGF-β1分泌增加、LN合成增多、CTGF表达上调(P<0.001),高糖组更明显(P<0.001)。与高糖组比较,高、中、低浓度的Ena干预均可逆转上述变化。结论高糖可致GMCs分泌TGF-β1增加、合成LN增多、CTGF表达上调,Ena可减少细胞外基质(ECM)积聚,下调CTGF表达,从而有利于延缓糖尿病肾病肾小球硬化(GS)的进展。

迷迭香酸对大鼠肾小球系膜细胞增殖及白细胞介素-1β的影响

目的 探讨迷迭香酸对原代培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖及其产生白细胞介素 - 1 β(IL - 1 β)的影响。方法 用四甲基偶氮唑 (MTT)法测定迷迭香酸对系膜细胞增殖的影响 ,酶联免疫吸附法 (ELISA)测定系膜细胞IL - 1 β蛋白水平。结果 迷迭香酸在 5～ 2 5mg/L浓度范围能明显抑制血清或脂多糖刺激的系膜细胞增殖 (与对照组比较 ,P <0 .0 1 ) ,在 1～ 2 5mg/L范围能明显抑制脂多糖诱导的系膜细胞IL - 1 β分泌 (与对照组比较 ,P <0 .0 1 )。结论 迷迭香酸对体外培养的系膜细胞增殖及IL - 1 β分泌具有抑制作用。

百令胶囊对大鼠肾小球系膜细胞增殖、Ⅳ型胶原及TGF-β_1 mRNA表达的影响

目的:观察百令胶囊对高糖刺激后系膜细胞增殖、Ⅳ型胶原(typeⅣCollagen,ⅣC)、转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA表达的影响。方法:培养正常SD大鼠系膜细胞,高浓度葡萄糖刺激系膜细胞,加入百令胶囊、苯那普利含药血清后,用四甲基偶氮唑盐(MTT)光吸收法观察肾小球系膜细胞增殖;酶联免疫吸附法(ELISA)测量培养细胞上清液中ⅣC的含量;实时荧光逆转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)测定TGF-β1mRNA的表达。结果:百令胶囊、苯那普利含药血清在24 h可抑制高糖对大鼠肾小球系膜细胞的促增殖作用,72 h最为明显(P<0.01);高糖刺激后ⅣC、TGF-β1mRNA在肾小球系膜细胞内表达增多(P<0.01),百令胶囊、苯那普利含药血清能明显抑制肾小球系膜细胞增殖(P<0.01)、ⅣC分泌及TGF-β1mRNA的高表达(P<0.05)。百令胶囊与苯那普利组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:百令胶囊可降低高糖致系膜细胞增殖,抑制高糖所致ⅣC分泌,抑制高糖引起的TGF-β1mRNA过度表达,这可能是其防治糖尿病肾病的作用机制。

补肾通络方对rIL-1β诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖及TGF-β_1、CTGF的影响

目的:研究补肾通络方含药血浆对重组大鼠白细胞介素-1β(r IL-1β)干预的大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)增殖与TGF-β1和CTGF表达的影响,以探讨补肾通络方抗肾脏纤维化的分子作用机制。方法:体外培养GMCs,制备补肾通络方含药血浆,用白细胞介素对GMCs进行干预,MTT比色法检测GMCs增殖、ELISA检测TGF-β1蛋白表达,RT-PCR检测CTGF mRNA的表达。结果:与空白对照组比较,白细胞介素能诱导GMCs的增殖、促TGF-β1生成、上调CTGF表达;补肾通络方含药血浆能下调由白细胞介素介导的GMCs增殖、TGF-β1蛋白和CTGF mRNA的表达量,与白细胞介素组比差异有统计学意义(P<0.01),且呈时间依赖性。结论:补肾通络方抗肾脏纤维化作用与抑制TGF-β1和CTGF的表达,调节GMCs的功能密切相关。