Wnt5a调控大鼠胰岛β细胞瘤细胞Cyclin D1表达的通路研究

目的:探讨Wnt5a调控大鼠胰岛β细胞瘤细胞Cyclin D1表达的通路机制。方法:体外培养大鼠胰岛β细胞瘤系细胞INS-1,以人/鼠重组Wnt5a蛋白处理细胞0.5、1、3、6、12 h,进行时间梯度实验;根据处理因素分为溶剂对照组、kn-62处理组、重组Wnt5a蛋白刺激组和kn-62+重组Wnt5a蛋白刺激组。蛋白质印迹法检测磷酸化CaMKⅡ(p-CaMKⅡ)、全细胞β-catenin、Cyclin D1水平变化。结果:经Wnt5a刺激后,INS-1胞内CaMKⅡ磷酸化水平升高,全细胞β-catenin水平下降,Cyclin D1表达减少(P<0.05);kn-62可降低细胞内CaMKⅡ磷酸化水平,拮抗外源性Wnt5a对全细胞β-catenin和Cylcin D1的下调效应(P<0.05)。结论:Wnt5a可通过激活大鼠胰岛β细胞瘤细胞INS-1的CaMKⅡ通路,抑制依赖β-catenin的经典Wnt通路,最终下调细胞Cyclin D1表达。

白藜芦醇减轻大鼠胰岛β细胞瘤细胞低氧损伤

目的研究白藜芦醇减轻大鼠胰岛β细胞瘤细胞(INS-1)低氧损伤的作用。方法将INS-1细胞分为三组,即常氧对照组(control)、低氧组(hypoxia)、低氧及白藜芦醇组(hypoxia+RSV);采用正常培养方法培养常氧对照组,用CCK8检测不同低氧时间(6、12、24、48 h)的细胞增殖情况,选择合适的时间条件构建低氧模型并用于下一步研究;再以不同浓度的白藜芦醇(8、10、12、15μmol/L)提前干预12 h,并进行前期设定的低氧条件处理,用CCK8检测合适的浓度条件,构建白藜芦醇干预模型并用于下一步研究。以组织活性氧试剂盒及线粒体超氧化物试剂盒检测氧化应激水平;线粒体膜电位及ATP水平检测线粒体功能;流式细胞仪分析检测凋亡;胰岛素定量检测试剂盒检测胰岛素分泌量;实时定量反转录检测Sirt1、Pdx1、Glut2的表达水平;蛋白免疫印迹检测相应蛋白水平。结果与常氧对照组相比,低氧组细胞增殖降低(P<0.05),细胞凋亡率增加(P<0.01),线粒体功能降低(P<0.05),胰岛素分泌减少(P<0.05),Sirt1、Pdx1、Glut2基因及其相应蛋白表达水平降低(P<0.05)。而白藜芦醇干预可以明显减轻低氧应激损伤(P<0.05),促进增殖(P<0.05),逆转凋亡(P<0.01),改善线粒体功能(P<0.05),促进胰岛素分泌(P<0.05),促进Sirt1、Pdx1、Glut2基因及其相应蛋白表达水平(P<0.05)。结论白藜芦醇可以保护低氧造成的INS-1细胞氧化应激损伤,改善线粒体功能,抗凋亡,并促进胰岛素功能性基因表达,促进胰岛素分泌。

芍药苷调节丝氨酸/苏氨酸激酶/鼠双微基因2/p53信号通路对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响实验研究

目的:探讨芍药苷(PAE)调节丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT)/鼠双微基因2(MDM2)/p53信号通路对弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法:以OCI-LY3细胞为研究对象,分别设置PAE低浓度组(15μmol/L PAE)、PAE中浓度组(30μmol/L PAE)、PAE高浓度组(60μmol/L PAE)、PAE高浓度+SC79(AKT激活剂)组(60μmol/L PAE+8μg/ml SC79),同时以未经处理的细胞为对照组。48 h后,分析细胞增殖、克隆形成能力及细胞周期和凋亡变化,检测AKT/MDM2/p53信号通路相关蛋白的表达水平。结果:与对照组比较,PAE低浓度组、PAE中浓度组、PAE高浓度组细胞凋亡率、p53表达、G_(0)/G_(1)期增加,细胞克隆形成数和细胞增殖率,p-AKT/AKT和p-MDM2/MDM2表达水平,以及G_(2)/M、S期降低(均P<0.05)。与PAE高浓度组比较,PAE高浓度+SC79组细胞凋亡率、p53表达、G_(0)/G_(1)期降低,细胞克隆形成数和细胞增殖率,p-AKT/AKT和p-MDM2/MDM2表达水平,以及G_(2)/M、S期增加(均P<0.05)。结论:PAE通过抑制AKT/MDM2上调p53表达,抑制DLBCL细胞增殖、细胞周期进展,诱导其凋亡。

巨大胃肠间质瘤并发非胰岛细胞肿瘤性低血糖患者一例的护理

总结1例巨大胃肠间质瘤患者并发非胰岛细胞肿瘤性低血糖患者的护理经验。该例患者因低血糖意识不清入院,经多学科协作,采用数字化血糖监测和管理,结合中西医治疗策略,有效控制了其低血糖症状和腹胀问题。护理措施主要包括:高频次血糖监测以及时发现低血糖反应,遵医嘱调整药物治疗方案以稳定血糖水平,并采用中西医结合方法缓解患者的腹胀并提高其舒适度。经过积极治疗与护理,该例患者低血糖发作显著减少,营养状况得到改善,病情稳定后转至当地医院继续治疗。该患者的救治过程中,多学科协作在处理罕见副肿瘤综合征中十分重要,可为临床护理提供参考。

Pdx-1、Ngn3联合MafA诱导干细胞分化为胰岛素分泌细胞移植治疗1型糖尿病大鼠的效果

目的通过胰十二指肠同源盒1(Pdx-1)、神经元素3(Ngn3)联合V型肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源基因A(MafA)共转染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)诱导分化为胰岛素分泌细胞(IPCs),移植治疗1型糖尿病大鼠并观察其疗效。方法Pdx-1、Ngn3和MafA共转染BMSCs诱导为IPCs,链脲佐菌素(STZ)制备45只1型糖尿病SD大鼠模型,BMSCs组(15只)肾被膜下移植2×10^(6) BMSCs,IPCs组(15只)大鼠肾被膜下移植2×10^(6) IPCs,sham-operation组(15只)大鼠肾被膜下注入等量生理盐水,另取15只健康SD大鼠肾被膜下注入等量生理盐水作为normal组。监测各组大鼠移植第0、7、14、21、28 d空腹血糖及体重;第21天对各组大鼠均行葡萄糖耐量试验;第28天取各组大鼠肾脏组织进行免疫组化。结果BMSCs和IPCs组大鼠血糖随时间下降,移植第21天两组大鼠空腹血糖低于移植第0天,且均低于同期sham-operation组(P<0.05),移植第28天IPCs组大鼠空腹血糖低于BMSCs组(P<0.05)。糖尿病大鼠中IPCs组和BMSCs组腹腔葡萄糖耐量实验曲线下面积小于sham-operation组,且IPCs组曲线下面积最小(P<0.05)。BMSCs组和IPCs组大鼠肾脏组织可见棕色荧光的胰岛素表达,且IPCs组胰岛素荧光光密度高于BMSCs组(P<0.05)。结论Pdx-1-Ngn3联合MafA诱导BMSCs形成的IPCs移植后在糖尿病大鼠体内可降低糖尿病大鼠的空腹血糖。

甲基丙烯酰化明胶/富血小板血浆复合水凝胶构建仿生微环境促进小鼠胰岛瘤细胞MIN6功能

背景:构建仿生微环境促进胰岛素分泌细胞存活及功能发挥,是胰腺组织工程的热点与难点。目的:基于甲基丙烯酰化明胶/富血小板血浆水凝胶构建仿生微环境,促进小鼠胰岛瘤细胞MIN6存活和功能表达。方法:将体积分数10%,30%,50%的富血小板血浆溶液分别与50 g/L的甲基丙烯酰化明胶混合,经Ca^(2+)与凝血酶活化及紫外光照射固化成水凝胶,分别记为G+10P、G+30P、G+50P,同时制备单纯的甲基丙烯酰化明胶水凝胶(记为G),检测4组水凝胶的孔隙率、杨氏模量、溶胀性能与流变行为。将4组水凝胶分别与小鼠胰岛瘤细胞MIN6共培养,检测细胞形态与增殖活性,并进行qRT-PCR检测、胰岛素免疫荧光染色及胰岛素释放实验。结果与结论:①复合成分水凝胶的孔隙率小于单一成分水凝胶、杨氏模量高于单一成分水凝胶,并且随着富血小板血浆浓度的增加,复合成分水凝胶的孔隙率与杨氏模量降低;G+30P、G+50P组溶胀率低于G组、G+10P组(P<0.05);复合成分水凝胶的储能模量、耗能模量均大于单一成分水凝胶(P<0.05);②光镜下可见,单一成分水凝胶表面的细胞呈团块样且散在分布,复合成分水凝胶表面的细胞呈团状,但生长速度更快、细胞团之间连接紧密;活死染色显示,各组水凝胶可促进细胞存活,其中G+30P组、G+50P组死细胞数量明显少于G+10P组、G组;CCK-8检测显示,复合成分水凝胶促进细胞增殖效果强于单一成分水凝胶,并且随着富血小板血浆浓度的增加,促增殖效果更明显;③qRT-PCR检测显示,与单一成分水凝胶比较,复合成分水凝胶可明显上调胰岛十二指肠同源盒1、胰岛素、葡萄糖激酶的mRNA表达,其中以G+30P组最明显;免疫荧光与胰岛素释放实验显示,与单一成分水凝胶比较,复合成分水凝胶可促进胰岛素蛋白的表达及胰岛素释放;④结果表明,甲基丙烯酰化明胶/富血小板血浆复合水凝胶可用于模拟胰岛素分泌细胞微环境,能够显著提高其存活和功能发挥。

三白草酮对STZ糖尿病小鼠胰岛β细胞凋亡与氧化应激的保护作用

目的:探讨三白草酮(Sauchinone,Sch)对链脲佐菌素(Streptozocin,STZ)糖尿病小鼠胰岛β细胞凋亡及氧化应激的保护作用及其机制。方法:将雄性BALB/C小鼠50只,随机取出8只为正常对照组,其余小鼠用40 mg/kg STZ腹腔注射造模。测空腹血糖确认造模成功的32只小鼠,平均分为模型组、Sch低剂量组、Sch高剂量组和二甲双胍阳性对照组。分组后Sch低剂量组和Sch高剂量组分别灌胃Sch 10和30 mg/kg/次,二甲双胍阳性对照组灌胃100 mg/kg/次,每日一次,连续给药4周。正常对照组和模型组灌胃相同体积的生理盐水。Sch给药过程中每周测定体重,末次给药12 h后测定空腹血糖、血清胰岛素浓度、胰岛素抵抗指数(Homeostasis model assessment insulin resistance,HOMA-IR)、血清TNF-α,IL-6含量;检测胰腺组织中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;Western blot法检测胰腺组织中Bcl-2、Caspase-3和NF-κB蛋白的表达。结果:与模型组比较,Sch高剂量组在给药第3周和第4周体重显著增加(P<0.05),Sch低剂量和高剂量组小鼠空腹血糖显著降低(P<0.05),血清胰岛素浓度显著升高,并有剂量依赖性(P<0.05),且胰岛素抵抗指数显著降低(P<0.05);血清炎症因子TNF-α,IL-6含量显著下降(P<0.05);胰腺组织中MDA降低,而SOD和GSH-Px活性显著升高,且有剂量依赖性(P<0.05)。胰腺组织中Bcl-2蛋白表达显著增多,Caspase-3和NF-κB蛋白表达显著下调,并且有剂量依赖性(P<0.05)。结论:三白草酮具有保护糖尿病小鼠胰岛β细胞的作用,其机制可能通过抗炎症、抗氧化应激以及抑制凋亡所介导。

溶瘤病毒诱导下过继细胞疗法用于骨肿瘤治疗可行性研究

目的探讨溶瘤病毒诱导下过继细胞疗法用于骨肿瘤治疗可行性。方法选取45只成年健康雄性大鼠建立骨肿瘤模型。随机分组后分别给予生理盐水(对照组)及溶瘤病毒诱导下过继细胞(VVDDCCL5、VVDD-CxC11、VVDD-IL15Rα、VVDD-IL2)干预,选取抗肿瘤免疫反应最优一组作为研究对象。比较对照组与VVDD干预组大鼠生存期,比较不同组别CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)表达及CTLA-4、TIM-3、PD-1^(high)TIM-3^(+)、Foxp3^(+)CD4^(+)表达,初始T细胞、TCM、TEM、4-1BB表达。进行体外实验,检测VVDD干预下不同细胞IFN-γ及4-1BB表达。结果干预10 d后可见VVDD-IL 2治疗的肿瘤具有较高的肿瘤反应性CD8^(+)TILs频率,VVDDIL 2组大鼠IFN-γ阳性斑点表达高于其他组别(P<0.05);VVDD-IL 2组CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)细胞表达及生存时间高于对照组(P<0.05);VVDD-IL 2组CTLA-4、TIM-3表达高于对照组,PD-1^(high)TIM-3^(+)、Foxp3^(+)CD4^(+)表达低于对照组(P<0.05);VVDD-IL 2组TCM、TEM、4-1BB表达高于对照组,初始T细胞表达低于对照组(P<0.05);体外实验结果显示,肿瘤细胞中VVDD-IL 2干预后IFN-γ、4-1BB表达高于未干预(P<0.05),正常细胞中两组差异无统计学意义(P>0.05)。结论溶瘤病毒诱导下过继细胞疗法用于骨肿瘤治疗可延长大鼠生存时间,IL2武装溶瘤病毒可促进T细胞浸润,并提高肿瘤反应性TILS的数量。促进肿瘤反应性TILS在低或低免疫原性肿瘤中的生成和浸润,并扩大这种TILS用于细胞过继治疗可能是骨肿瘤治疗的新策略。

黄芩苷抑制大鼠胰岛细胞瘤细胞株增殖的分子机制研究

目的探索黄芩苷对大鼠胰岛细胞瘤细胞的影响及作用的分子机制。方法应用光学显微镜、MTT测定、流式细胞仪、报告基因分析以及WesternBlot等方法,探讨黄芩苷对细胞增殖和细胞周期的影响及作用分子机制。结果黄芩苷处理大鼠胰岛细胞瘤细胞后,分裂相细胞显著减少,细胞增殖受到抑制,细胞的生存率下降,随黄芩苷浓度的增加和/或作用时间的延长,抑制率呈上升趋势,并出现凋亡细胞;胰岛细胞瘤细胞株凋亡过程中caspase3活性以时间依赖性方式增高;通过流式细胞仪检测细胞周期发现,随黄芩苷处理浓度增加,S期细胞逐渐减少,从38.2%下降至9.4%,G0/G1期细胞所占百分率逐渐增加,从56.4%上升至85.9%,细胞出现G1阻滞;同时,细胞周期蛋白基因启动子活性显著下调,细胞周期蛋白表达明显降低。结论黄芩苷能诱导细胞凋亡,其作用可能与caspase3活化有关;黄芩苷还能以剂量依赖性方式和时间依赖性方式抑制胰岛细胞瘤细胞增殖,黄芩苷诱导细胞周期蛋白基因转录和表达下调可能在其中起着重要作用。

棕榈酸对小鼠胰岛β细胞瘤MIN6细胞凋亡的影响及其机制探讨

目的观察棕榈酸对小鼠胰岛β细胞瘤MIN6细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法培养于含0.5 mM棕榈酸的培养基中的MIN6细胞为实验组,仅含5%BSA的培养基培养的MIN6细胞为对照组,采用流式细胞术和原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测两组MIN6细胞凋亡情况。实验组于培养12(实验1组)、24(实验2组)、36(实验3组)h后,对照组于培养36 h后,采用Western blot法检测MIN6细胞中的凋亡诱导因子(AIF)及survivin。构建survivin过表达载体并转染实验组细胞,36 h后,同前法检测转染及未转染survivin过表达载体的MIN6细胞在含棕榈酸培养基中的凋亡情况。结果培养36 h后实验组MIN6细胞凋亡率为30.27%±3.15%,明显高于对照组的4.61%±0.51%(P<0.01)。实验1、2、3组MIN6细胞核中的AIF的相对表达量高于对照组,sur-vivin相对表达量低于对照组(P均<0.05)。棕榈酸培养36 h后,转染survivin过表达载体的MIN6细胞凋亡率为11.6%±2.09%,低于未转染者的31.27%±2.97%(P<0.01)。结论棕榈酸可诱导小鼠胰岛β细胞瘤MIN6细胞凋亡,可能与下调survivin表达和激活AIF凋亡信号通路有关;survivin表达上调可抑制棕榈酸诱导的MIN6细胞凋亡。

ω-3多不饱和脂肪酸促进1型糖尿病模型小鼠胰岛β细胞再生的作用研究

目的探讨ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3 PUFAs)促进胰岛α细胞向β细胞转分化的作用。方法在小鼠胰岛α细胞系αTC1培养基中添加不同配比的ω-3 PUFAs,4周后,利用荧光染色观察胰岛素和胰高血糖素的表达,并通过荧光定量PCR(qRT-PCR)检测胰岛α细胞和胰岛β细胞特异性基因表达情况。野生型(WT)组和mfat-1转基因组小鼠连续5天腹腔注射60 mg·kg^(-1)链脲佐霉素(streptozocin,STZ)。选取注射STZ 7周后的WT小鼠,给予97%EPA和75%鱼油(50%EPA和25%DHA)饮食干预,每周检测随机血糖。8周后,通过免疫荧光染色观察小鼠胰腺中胰岛β细胞再生情况。结果在DHA与EPA混合液培养以及与单独EPA培养后,胰岛α细胞可分泌胰岛素,而对照组细胞没有胰岛素染色阳性;qRT-PCR结果显示,经过ω-3 PUFAs处理的细胞中,胰岛β细胞特异性基因明显上调。注射STZ后,mfat-1组和饮食干预组小鼠不仅随机血糖水平明显低于WT组,而且免疫荧光结果显示mfat-1组和饮食干预组小鼠胰岛中出现胰岛素和胰高血糖素共定位的细胞。结论初步证明ω-3 PUFAs能够促进胰岛α细胞分泌胰岛素,缓解1型糖尿病小鼠的高血糖症状。

稠李花色苷酶法制备及对H_2O_2诱导大鼠胰岛素瘤细胞损伤的保护作用

目的:探究纤维素酶酶法制备稠李花色苷的最佳条件,并研究制备的稠李花色苷对H_2O_2诱导的大鼠胰岛素瘤(Ins-1)细胞损伤的保护作用。方法:通过单因素试验和正交试验,优化得到酶法制备稠李花色苷的最佳条件;稠李花色苷处理大鼠Ins-1细胞,进行形态学观察、3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT]细胞活力实验、2’,7’-二氢二氯荧光素二乙酸酯(2’,7’-dichloro dihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)荧光探针法检测细胞内活性氧实验研究稠李花色苷对H_2O_2诱导损伤的Ins-1细胞保护作用。结果:纤维素酶法提取稠李花色苷的最佳条件为:温度60℃、纤维素酶添加量9 mg/g、料液比1∶35(g/m L)、p H 3.5,此条件下稠李花色苷得率为(0.956±0.027)mg/g;形态学观察及MTT细胞活力实验显示,稠李花色苷对H_2O_2诱导损伤的Ins-1细胞具有较强的保护作用,DCFH-DA法检测细胞内活性氧实验说明,稠李花色苷能够显著地清除Ins-1细胞内的活性氧。结论:纤维素酶法制备稠李花色苷是一种有效的方法,制备的稠李花色苷对H_2O_2诱导的大鼠Ins-1细胞损伤具有较强的保护作用。

SLC5A8基因敲除后皮下种植结肠癌细胞株的负瘤模型小鼠肿瘤微环境中T淋巴细胞亚群占比观察

目的观察SLC5A8基因敲除后皮下种植结肠癌细胞株MC-38的负瘤模型小鼠肿瘤微环境中T淋巴细胞亚群占比变化,为结肠癌基因治疗提供实验依据。方法应用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建SLC5A8基因敲除型C57BL/6小鼠,记为实验组。将普通C57BL/6小鼠记为对照组。将两组小鼠皮下种植结肠癌细胞株MC-38细胞悬液制备MC-38负瘤模型,制备成功后完整剥离肿瘤组织,采用流式细胞法测算各组小鼠结肠肿瘤微环境中T淋巴细胞亚群占比。结果实验组小鼠肿瘤微环境中CD3^(+)T淋巴细胞、CD4^(+)T淋巴细胞、CD8^(+)T淋巴细胞占比分别为27.730%±2.861%、50.923%±4.823%、10.205%±1.234%,对照组小鼠肿瘤微环境中CD3^(+)T淋巴细胞、CD4^(+)T淋巴细胞、CD8^(+)T淋巴细胞占比分别为40.790%±9.940%、58.355%±3.292%、22.950%±1.948%,两组相比,P均<0.05。结论与普通C57BL/6小鼠相比,SLC5A8基因敲除后皮下种植MC-38细胞的负瘤模型小鼠肿瘤微环境中CD3^(+)T淋巴细胞、CD4^(+)T淋巴细胞、CD8^(+)T淋巴细胞占比均下降。

TBBPA-DHEE暴露对大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤PC12细胞的影响及机制

目的:研究四溴双酚A双(2-羟基乙基)醚[tetrabromobisphenol A bis(2-hydroxyetyl)ether,TBBPA-DHEE]对大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤(PC12)细胞的影响及潜在的作用机制。方法:将PC12细胞随机分为5组,分别为空白对照组、溶剂对照组(0.05%二甲基亚砜)、TBBPA-DHEE低剂量组(5μg/mL)、中剂量组(20μg/mL)和高剂量组(35μg/mL),按分组对应处理48 h;通过MTT实验分析TBBPA-DHEE对PC12细胞的半数抑制浓度(IC_(50));采用试剂盒检测PC12细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛和活性氧含量,以及细胞培养液中NO和Ca^(2+)含量;采用ELISA法检测PC12胞内电压门控钙离子通道(voltage-gated calcium channel,VGCC)含量;采用蛋白质免疫印迹法测定钙离子信号通路相关蛋白表达。结果:TBBPA-DHEE(≥20μg/mL)暴露显著抑制PC12细胞活力,半数抑制浓度为33.4μg/mL;与对照组相比,5、20和35μg/mL TBBPA-DHEE组PC12细胞SOD活力、丙二醛及活性氧含量显著升高(P<0.05),细胞培养液中NO和Ca^(2+)含量显著增加(P<0.01或P<0.05),VGCC含量显著降低(P<0.01);5μg/mL TBBPA-DHEE组钙离子信号通路中p-CaMKⅡ、p-ERK1/2和p-CREB蛋白相对表达水平显著降低(P<0.01),20和35μg/mL TBBPA-DHEE组CaM、MKP-1、p-CaMKⅡ、p-ERK1/2和p-CREB蛋白相对表达水平显著降低(P<0.01)。结论:TBBPA-DHEE暴露可显著抑制PC12细胞活力并导致细胞氧化损伤,其可能通过下调VGCC表达,影响细胞钙离子稳态,进而影响钙离子信号通路相关蛋白的表达,从而产生神经毒性。

艾塞那肽对大鼠胰岛β细胞瘤细胞株RIN-m5F葡萄糖激酶和葡萄糖转运蛋白2表达的影响

葡萄糖激酶（GK）和葡萄糖转运蛋白2（Glut2）作为葡萄糖“感受器”,通过调节胰岛素释放来调控血糖变化[1].艾塞那肽是胰高血糖素样肽1（GLP-1）的类似物,有报道其可保持胰岛细胞正常形态和功能、抑制凋亡、增加胰岛细胞数量并促进胰岛细胞葡萄糖依赖的胰岛素释放[2].本实验旨在观察艾塞那肽对RIN-m5F细胞胰岛素分泌功能和GK、Glut2 mRNA表达水平的影响.

少突胶质前体细胞延长神经胶质母细胞瘤大鼠高剂量放疗后的生存期

背景:胶质母细胞瘤是成人常见的恶性脑肿瘤,目前尚缺乏有效的治疗方法,临床预后不良。目的:观察单次高剂量放疗对神经胶质母细胞瘤的疗效,以及少突胶质前体细胞修复放射性脑损伤的可行性。方法:通过质粒转染构建可表达荧光素酶(Luc)的人源性U-87 MG肿瘤细胞系。15只Fisher 344大鼠制备Luc-U-87 MG神经胶质母细胞瘤模型,随机分为肿瘤模型组(n=3)、放疗组(n=6)和放疗+细胞移植组(n=6),后两组放疗方式为单次80 Gy辐射;放疗后5周,放疗+细胞移植组大鼠联合少突胶质前体细胞移植治疗。利用活体成像的方法监测肿瘤细胞的生长;MRI观察放疗引起的脑组织影像学变化;采用Kaplan-Meier生存分析明确细胞移植对放疗大鼠生存率的影响;对移植细胞的存活及分化情况进行组织学观察。结果与结论:①体外生物成像示转染后的U-87 MG细胞与Luc底物产生反应发出生物信号,信号强度与转染细胞的数量呈线性正相关;②动物活体成像结果显示,肿瘤模型大鼠的颅内胶质母细胞瘤信号持续上升直至接种第5周(全部死亡);放疗大鼠在治疗后2周,肿瘤信号开始衰减,4周后未见肿瘤发光信号;③放疗后5周,T2WI上可见放疗大鼠坏死的肿瘤组织;10周后未见肿瘤显影,但出现脑组织损伤信号,少突胶质前体细胞移植大鼠脑组织未见类似信号;15周后,放疗组和放疗+细胞移植组大鼠在T2WI上均可见高、低混杂的组织损伤信号,但放疗+细胞移植组的损伤信号程度明显低于单纯放疗组;④生存分析结果显示模型组、放疗组及放疗+细胞移植组大鼠的中位生存期分别为30 d,114.5 d和232.5 d,各组大鼠的中位生存期之间差异均有显著性意义(P<0.01);⑤组织学观察到存活的移植细胞,呈多极样,部分细胞表达髓鞘碱性蛋白,且放疗+细胞移植组的髓鞘碱性蛋白表达明显高于放疗组(P<0.01);⑥上述结果表明,单次高剂量放疗可有效治疗大鼠人源性神经胶质母细胞瘤,少突胶质前体细胞移植可通过修复放射性脑损伤延长放疗大鼠的生存期,促进髓鞘化是其修复损伤脑组织的机制之一。

NOD-Scid小鼠播散性弥漫大B细胞淋巴瘤模型的构建

目的利用免疫缺陷的NOD-Scid小鼠建立播散性弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)小鼠模型,为动物模型的构建提供新思路。方法先将人源DLBCL细胞OCI-Ly8导入荧光素酶基因,使其长期稳定表达荧光素酶。再将OCI-Ly8-luc^(+)细胞经尾静脉注射到NOD-Scid小鼠体内,利用生物发光成像系统每隔3天观察1次小鼠体内肿瘤细胞播散情况。结果实验第7天监测到OCI-Ly8-luc^(+)细胞在小鼠体内发生播散,并且进展迅速,20天时出现小鼠死亡。结论利用OCI-Ly8-luc^(+)细胞尾静脉注射成功构建了NOD-Scid小鼠DLBCL模型,为DLBCL的动物模型构建提供新方法。

一例Han-Wistar大鼠垂体细胞瘤的病理学分析

在为期两年的致癌试验中发现空白对照组Han-Wistar大鼠出现1例垂体细胞瘤。临床观察及大体剖检未见明显异常。HE染色结果显示,垂体神经部肿瘤组织呈结节状增生,边界清晰,压迫周围正常组织;肿瘤细胞与神经胶质细胞类似,细胞核呈圆形或卵圆形,细胞质丰富呈嗜酸性或空泡状;肿瘤细胞分化良好,细胞多形性不明显,核分裂象可见;部分肿瘤细胞呈假菊形团状排列。免疫组织化学染色结果显示,胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)及S-100蛋白呈阳性。结合HE染色及免疫组织化学染色结果诊断该肿瘤为自发性良性垂体细胞瘤。

芍药甘草复合精油对过氧化氢诱导鼠嗜铬细胞瘤细胞氧化损伤的保护作用研究

目的:探讨芍药甘草复合精油(SGO)对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导鼠嗜铬细胞瘤(PC12)细胞氧化损伤的保护机制。方法:采用200μmol/L的H_(2)O_(2)处理PC12细胞建立氧化应激损伤模型。将PC12细胞分为对照组、模型组(200μmol/L H_(2)O_(2))、SGO低浓度组(1μmol/L SGO+200μmol/L H_(2)O_(2))、SGO高浓度组(10μmol/L SGO+200μmol/L H_(2)O_(2))。细胞处理结束后,采用CCK-8法检测细胞存活率;试剂盒检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活力及丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)含量;流式细胞术检测细胞凋亡率;免疫印迹法检测细胞中剪切化半胱氨酸天冬氨酸蛋白激酶-3 (C-Caspase3)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组的细胞存活率、GSH-PX含量、SOD活力及Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05),细胞凋亡率、MDA含量及C-Caspase3、Bax蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,SGO低高浓度组的细胞凋亡率、MDA含量及C-Caspase3、Bax蛋白表达水平明显降低(P<0.05),细胞存活率、GSH-PX含量、SOD活力及Bcl-2蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论:SGO对H_(2)O_(2)诱导的PC12细胞氧化损伤具有保护作用,其作用机制与抗氧化应激损伤、抗细胞凋亡有关。

人胰岛提取物与大鼠β肿瘤细胞具有共同抗原决定簇

鉴定抗大鼠β肿瘤细胞系Rin5F细胞膜单克隆抗体所结合的胰岛特异性抗原。采用匀浆后超速离心的方法提取动物胰腺及胰岛细胞膜蛋白。经SDS-PAGE、电转移后,分别与大鼠β肿瘤细胞系Rin5F细胞膜单克隆抗体1A2(第一抗体)和羊抗鼠(第二抗体)反应。用放射自显影、Dot blot、western blot方法显示结果。除单抗1C7以外的其他6株抗大鼠β肿瘤细胞系Rin5F细胞膜单克隆抗体能与正常大鼠胰腺提取物不同成分结合。其中单抗1A2能与大鼠、狗、猪、猴、人的胰腺提取物及人、猪胰岛提取物不同分子量的抗原结合。大鼠β肿瘤细胞系Rin5F细胞与正常大鼠胰腺有共同的抗原决定簇。单抗1A2所结合抗原在不同动物胰腺,尤其是在人和猪胰岛上具有共同抗原决定簇。为1型糖尿病自身免疫发病机制及临床前早期诊断带来了新的希望。