菩人丹对高糖诱导的INS-1细胞凋亡、BAD和FOXO1蛋白表达的影响

目的:观察菩人丹(Puren Dan,PRD)对高糖诱导的INS-1细胞凋亡、Bal-xl/Bcl-2相关死亡促进因子(BAD)和叉头框转录因子O亚族1(FOXO1)蛋白表达的影响,探讨PRD恢复INS-1细胞分泌功能的相关分子机制。方法:采用血清药理学方法制备菩人丹含药血清,建立高浓度葡萄糖(33.3 mmol·L-1)诱导INS-1细胞损伤模型,以菩人丹药物血清干预24 h;实验分为5组,即正常对照组(control组)、高糖模型组(HG组)、菩人丹药物血清高剂量组(H-PRD组)、菩人丹药物血清低剂量组(L-PRD组)和二甲双胍药物血清对照组(MF组);采用CCK8试剂盒检测细胞活力,流式Annexin V-FITC/PI双染法考察细胞凋亡水平,Western blotting assay检测BAD和FOXO1蛋白表达水平及其磷酸化水平。结果:与正常组比较高糖能够显著降低INS-1细胞活力、诱导细胞凋亡、降低INS-1细胞BAD,FOXO1丝氨酸磷酸化水平;与模型组比较菩人丹含药血清(终体积分数10%)则能抑制INS-1细胞凋亡,增加细胞活力,下调FOXO1表达,促进BAD和FOXO1丝氨酸磷酸化。结论:菩人丹药物血清能够减少高糖诱导的INS-1细胞凋亡,这种作用与上调BAD和FOXO1蛋白丝氨酸磷酸化水平直接相关。

香菇多糖抑制STZ诱导的INS-1细胞凋亡的作用及机制

目的探讨香菇多糖（lentinan，LNT）对链脲佐菌素（streptozoein，STZ）诱导的大鼠胰岛素瘤细胞系（INS-1）细胞凋亡的影响，并探索其可能的作用机制。方法四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色（MTT）法观察STZ单独处理、STZ和不同浓度LNT共同处理INS-1细胞24h后细胞活力的改变：AnnexinV-PI双染法检测细胞凋亡；Hoechst33258染色和末端转移酶介导的dUTP切口末端标记（TUNEL）法验证STZ和LNT的处理对INS-1细胞凋亡的影响；放免法检测经药物处理后INS-1细胞贮存、分泌胰岛素的功能；Western印迹分析经STZ、LNT处理后INS-1细胞相关信号通路蛋白PDX-1、Bcl-2（抗凋亡基因）、Bax和Cleavedeaspase-3（促凋亡基因）的表达差异。结果与空白组相比，LNT能浓度依赖性地抑制STZ引起的INS-1细胞活力下降，浓度为200μg／ml时开始有统计学差异（P〈0．05）；LNT能抑制STZ诱导的INS-1细胞凋亡；LNT可抑制STZ诱导的INS-1细胞贮存、分泌胰岛素功能受损和PDX-1蛋白表达量下降；LNT能影响细胞凋亡信号通路相关蛋白Bcl-2、Bax、Cleavedcaspase．3表达水平。结论香菇多糖能抑制STZ诱导的INS-1细胞凋亡，可能是通过影响凋亡信号通路中相关蛋白分子的水平实现的。