利用TRIzol 试剂和液氮提取大鼠胰腺高质量总RNA

目的建立胰腺高质量总RNA快速、经济、稳定的提取方法。方法应用TRIzol试剂和液氮提取大鼠胰腺总RNA,通过总RNA含量和A260/280比值的测定及10 g/L非变性琼脂糖凝胶电泳评估总RNA的质量,并用RT-PCR检测大鼠胰岛素1、胰高血糖素、胰α-淀粉酶和β-actin的表达。结果利用TRIzol和液氮提取的大鼠胰腺总RNA量可达到3～6μg/mg胰腺组织,A260/280比值在1.75～1.89之间。在10 g/L非变性琼脂糖凝胶电泳时,均可见28S及18S条带,并且在28S、18S条带间可见明显的云雾状阴影。大鼠胰岛素1、胰高血糖素、胰α-淀粉酶、β-actin RT-PCR产物电泳结果显示均有清晰的条带。结论应用TRIzol试剂和液氮成功地提取了大鼠胰腺高质量的总RNA,后者可用于RT-PCR研究。

大鼠胰腺提取液体外诱导肌源性干细胞分化为胰岛素分泌细胞

目的:探讨大鼠胰腺提取液(RPE)对大鼠肌源性干细胞(MDSCs)定向诱导分化为胰岛素分泌细胞的作用。方法:RPE诱导MDSCs通过形态学观察、双硫腙(DTZ)染色、免疫细胞化学显色、葡萄糖刺激实验和RT-PCR,对诱导细胞进行体外结构和功能鉴定。结果:RPE诱导后第5日有胰岛样结构出现;免疫细胞化学显示,诱导后第12日细胞团表达胰岛素、胰高血糖素,而未诱导组细胞不表达上述蛋白;RT-PCR结果表明,诱导后第6日检测到PDX-1的表达,诱导后第12日检测到胰岛素1、胰岛素2、胰高血糖素和葡萄糖转运体2基因的表达。结论:体外经RPE诱导,大鼠肌源性干细胞可定向分化为胰岛素分泌细胞。

一步法实时荧光定量PCR检测大鼠胰腺组织中Insulin mRNA和PDX-1 mRNA的表达

目的通过检测大鼠胰腺组织中Insulin mRNA和PDX-1 mRNA的表达探讨EGF/Gastrin联用促进胰岛PDX-1表达增强可能的作用机制。方法采用一步法实时荧光定量PCR检测各组大鼠胰腺组织中Insulin基因和PDX-1基因在转录水平的表达。结果大鼠胰腺组织中Insulin mRNA在转录水平的表达情况正常对照组最高;糖尿病组最低,与正常对照组相比相差2.4倍(P<0.05);EGF/Gastrin组是糖尿病组的2.1倍(P<0.05)。大鼠胰腺组织中PDX-1mRNA在转录水平的表达情况正常对照组最高,糖尿病组最低,与正常对照组相比相差2.8倍(P<0.05),EGF/Gastrin组是糖尿病组的2.2倍(P<0.05)。结论 EGF/Gastrin联用促进胰岛PDX-1表达增强的作用机制可能通过其改善胰岛β细胞功能、降低血糖进而减弱糖毒性对PDX-1表达的不良影响,间接地使PDX-1的表达增强。而EGF/Gastrin联用促进胰岛新生、改善胰岛β细胞功能又有可能是通过提高PDX-1的表达而实现的。

大鼠胰腺超微结构年龄变化与胰段移植的关系

通过观察大鼠胰腺超微结构的不同年龄变化,发现胰腺外分泌部的腺细胞和内分泌部的B细胞结构变化与年龄增长相关,胰岛的分布以幼年鼠胰尾为最多。这说明胰腺移植的供体以幼年胰尾为佳,青年次之,老年不宜。

肾上腺髓质素-2在急性胰腺炎大鼠胰腺中的变化

肾上腺髓质素-2（AM2）是2004年美国和日本学者同时发现的降钙素基因相关肽（CGRP）超家族中的新成员。Onur等[1]报道在急性胰腺炎（acute pancreatitis,AP）中,

饥饿状态下大鼠胰腺胰高血糖素和嗜铬颗粒素A的变化—定量免疫组织化学研究

饥饿状态下大鼠胰腺胰高血糖素和嗜铬颗粒素Ａ的变化—定量免疫组织化学研究陈丽华张远强苏慧慈（第四军医大学基础部组织学胚胎学教研室）本研究用免疫组织化学ＡＢＣ法结合图象分析技术，在Ｂｏｕｉｎ液固定的常规石蜡切片上，观察了正常大鼠、饥饿１、２、３、４、５天...

用免疫组织化学方法结合图象分析技术观察饥饿状态大鼠胰腺胰高血糖素和胰岛素的变化

用免疫组织化学方法结合图象分析技术观察饥饿状态大鼠胰腺胰高血糖素和胰岛素的变化陈丽华张远强（第四军医大学基础部组织学胚胎学教研室）本研究用免疫组织化学ＡＢＣ法结合图象分析技术对饥饿状态大鼠胰岛Ａ、Ｂ细胞中胰高血糖素和胰岛素的免疫染色强度进行定量分析。...

γHuIL-1β对四氧嘧啶型糖尿病大鼠胰腺损伤保护性的研究

γＨｕＩＬ－１β对四氧嘧啶型糖尿病大鼠胰腺损伤保护性的研究陈丽华张远强（第四军医大学基础部组织学胚胎学教研室）本研究用免疫组织化学ＡＢＣ法结合体视学技术观察白介素－１β（γＨｕＩＬ－１β）对四氧嘧啶引起的大鼠胰腺Ｂ细胞损伤的保护作用。皮下注射四氧嘧啶...

反相高效液相色谱法测定大鼠胰腺组织中头孢噻肟钠的含量

[目的]建立反相高效液相色谱法测定大鼠胰腺组织中头孢噻肟钠的含量。[方法]以茶碱为内标,采用YMC-C18柱,以0.015mol/L磷酸二氢钾缓冲液-甲醇溶液(pH调4.70)(82︰18)为流动相,流速0.8ml/min,紫外检测波长为254nm。[结果]标准曲线线性范围为:16～0.5(μg/ml);头孢噻肟的检测限为0.25μg/ml;提取回收率为:76.70%～85.24%;方法回收率为106.21%～107.79%;日内RSD在5.74%～10.76%之间,日间RSD在5.53%～9.14%之间。[结论]该方法操作简单,结果准确,重现性好,用于大鼠胰腺组织中的头孢噻肟钠的含量测定得到满意结果。

苦参碱调控TGF-β/Smad2信号通路逆转大鼠胰腺纤维化的作用研究

目的研究苦参碱对大鼠胰腺纤维化TGF-β/Smad2信号通路的影响作用,探讨苦参碱在胰腺纤维化中的作用究。方法构建大鼠胰腺纤维化模型,并利用HE染色判断模型是否成功;实验分为:假手术组,模型组和模型+苦参碱组,利用HE检测各组病理结果;免疫组化检测各组胰腺组织α-SMA、TGF-β1、I型胶原表达结果;荧光定量PCR和Western blot检测各组胰腺组织Smad2、TβR1、TβR II的表达结果。结果模型构建后大鼠身体状态良好,无死亡现象,并通过HE结果说明腺管周围小腺管增生,腺泡细胞线粒体肿胀,间质少量纤维堆积,无细胞浸润。上述结果表明模型构建成功。假手术组无明显纤维化,无进行性改变;苦参碱组可见少量腺泡细胞线粒体肿胀。与假手术组相比,模型组的a-SMA、TGF-β1、I型胶原表达明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。与模型组相比,苦参碱组的a-SMA、TGF-β1、I型胶原表达明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。与假手术组相比,模型组的Smad2、TβR1、TβR II型胶原表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组相比,苦参碱组的Smad2、TβR1、TβR II表达明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论苦参碱可以通过下调TGF-β1、Smad2的表达抑制胰腺星状细胞的活化,此可能为抑制纤维化形成与发展的相关机制,为苦参碱应用于临床给予可靠的理论依据。

大黄牡丹汤组方对急性胰腺炎模型大鼠胰腺微循环的影响

目的研究大黄牡丹汤组方(RPDP)对急性胰腺炎(AP)模型大鼠胰腺早期胰腺微循环的改变,探讨微循环改变在AP发生发展中的作用,观察RPDP对胰腺微循环的影响。方法 60只SD大鼠随机分为药物作用4 h假手术(SO)组、模型组和RPDP组;药物作用8 h SO组、模型组和RPDP组,每组各10只。模型组和RPDP组在距离胆胰管开口0.3 mm处的胆管,经十二指肠壁浆肌层针刺,用3.5%牛磺胆酸钠0.1 m L/100 g缓慢注射,建立SD大鼠AP模型,治疗组用RPDP 40 g/kg灌胃1次。分别与给药后4 h和8 h,麻醉相应组大鼠抽取血液及腹水,检测各组血清和腹水淀粉酶含量。用荧光显微流速测试方法,观察胰腺微血管在造模后4 h和8 h的变化。结果模型组大鼠胰腺微循环血流速度存在差异,RPDP治疗组血流速度则比较一致。与SO组比较,模型组大鼠血清淀粉酶及腹水淀粉酶均显著升高;与模型组比较,RPDP组大鼠血清淀粉酶及腹水淀粉酶均显著降低(P<0.01)。结论 AP发病与胰腺微循环障碍有关,AP向重症急性胰腺炎(SAP)发展也与其有关,AP时胰腺水肿与坏死同时存在。RPDP有改善AP模型大鼠胰腺微循环的作用。

中药合剂AA-3对SAP大鼠胰腺结构和功能保护作用的研究

目的:观察中药合剂AA-3对胰腺的保护作用。方法:健康SD大鼠随机分成3组,假手术组、模型组、中药治疗组。Aho’法复制急性重症胰腺炎。建立荧光显微流速测试系统,观察造模后24小时胰腺微血管血流的变化,检测血清、腹水淀粉酶,并观察胰腺病理组织学改变及超微结构改变。结果:模型组同一只大鼠的胰腺微动、静脉存在着不同的血流速度,治疗组血流速度则相对一致。模型组胰腺组织结构损害明显,而中药治疗组损害明显改善。结论:中药合剂AA-3能明显改善SAP大鼠胰腺结构和功能。

AhR对急性胰腺炎大鼠肠道微环境及屏障功能的影响

目的探讨芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AhR)对急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)大鼠肠道微环境、屏障功能及核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf-2)通路的影响。方法通过胆胰管注射5%牛磺胆酸钠的方法建立AP大鼠模型,将50只大鼠随机分组:AP组、NC组(尾部注射5μl慢病毒空白载体)、AhR过表达组(尾部注射5μl过表达AhR慢病毒载体)、AhR抑制剂组(腹腔注射10μg 2-甲基-2H-吡唑-3-羧酸)、AhR过表达+ML385组(在AhR过表达组基础上,腹腔注射20 mg/kg ML385),另取10只大鼠为假手术组。心脏采血,检测血清中脂肪酶、淀粉酶水平以及SOD、MDA、CRP水平;分离胰腺组织,观察胰腺组织损伤程度及AhR、Nrf-2、HO-1蛋白表达水平;分离回肠组织,观察肠黏膜损伤情况并进行评分。结果与假手术组相比,模型组大鼠回肠、胰腺病理评分、CRP、MDA含量、脂肪酶、淀粉酶水平均升高,SOD含量、Nrf-2、HO-1、AhR表达显著降低(P<0.05);与模型组、NC组相比,AhR过表达组大鼠回肠、胰腺病理评分、CRP、MDA含量、脂肪酶、淀粉酶水平均降低,SOD含量、Nrf-2、HO-1、AhR蛋白表达水平显著增加(P<0.05);与模型组相比,AhR抑制剂组大鼠回肠、胰腺病理评分、CRP、MDA含量、脂肪酶、淀粉酶水平均升高,SOD含量、Nrf-2、HO-1、AhR蛋白表达水平显著降低(P<0.05);ML385逆转了AhR过表达对AP大鼠的保护作用(P<0.05)。结论增强AhR表达可以改善AP大鼠肠道微环境,恢复肠道功能,缓解大鼠胰腺和肠黏膜损伤,可能与激活Nrf-2通路有关。

大鼠胰腺干细胞转分化为胰岛样细胞簇的研究

胰岛细胞来源有限，且受到伦理及免疫排斥等因素的制约，极大地限制了胰岛移植治疗糖尿病在临床上的广泛应用。成体干细胞能避开上述缺陷，且其可塑性为临床应用提供了可能。我们进行了将大鼠胰腺干细胞转分化为胰岛样细胞簇的研究，现报告如下。

大鼠胰腺细胞表达血小板活化因子受体

血小板活化因子（PAF）是一种由多种细胞产生并可作用于多种细胞的内源活性物质，具有广泛的生物学效应。它与PAF受体（PAF-R）结合，通过G蛋白转导激活磷脂酶C，磷脂酶A2，腺苷酸环化酶和酪氨酸蛋白激酶等，从而参与炎症反应。PAF-R是PAF发挥作用的关键因素。国内科学者采用多种方法研究PAF-R在多种组织的定位。

大鼠不同发育时期胰腺相关蛋白的差异表达

探讨大鼠胰腺不同发育时期相关蛋白的差异表达 ,应用显微技术分离了大鼠孕 15 5天 ,孕 18 5天胚胎胰腺和新生鼠及成年鼠的胰腺 ,提取其蛋白质后 ,用固相pH梯度双向聚丙烯酰胺凝胶电泳和质谱分析等蛋白质组学方法 ,得到了 4个不同发育时期的蛋白质表达谱 .对其中的 6个在孕 18 5天胚胎胰腺中有高丰度表达 ,而在成年鼠胰腺中缺失的蛋白质点 ,4个在成年胰腺中特异表达的蛋白质点 ,8个在成年胰腺中表达明显下调的蛋白质点和 1个在成年中表达上调的点 ,进行了肽质量指纹分析和蛋白质鉴定 ,共获得 18个点的肽质量指纹图 .经BIOWORK等软件搜索大鼠非冗余蛋白质数据库来鉴定其身份 ,发现其中 7个点为大鼠甲胎蛋白 (AFP)、 5个点为胰脂酶相关蛋白 1前体、 1个点为微管蛋白 β、 2个点为蛋白二硫异构酶、 1个为FLN2 9基因产物的类似物、 1个为胰蛋白酶V A前体、 1个为过氧化物氧化还原酶 4 .其中AFP为特异表达于大鼠胚胎期及新生期胰腺的蛋白质 ,在孕 18 5天的胰腺中表达量最高 ,在成年胰腺中极低表达 .

高迁移率族蛋白B1诱导大鼠胰腺腺泡细胞Janus激酶2／信号转导与转录激活子3信通路活化的研究

目的观察晚期炎性因子高迁移率族蛋白B1（HMGBl）在诱导大鼠胰腺腺泡细胞Janus激酶2／信号转导与转录激活子3（JAK2／STAT3）信号通路活化中的作用。方法取胰腺分离胰腺腺泡细胞，随机分为A组：正常对照组、B组：HMGB1促进组（终质量浓度1mg／L）、C组：JAK2抑制剂-AG490处理组（25μmol／L）、D组：STAT3抑制剂-雷帕霉素处理组（40μg／L），采用实时定量反转录·聚合酶链反应（RT-qPCR）和Western blot法检测10、30、60、120min时间点细胞中JAK2、STAT3mRNA表达及60、120min时间点JAK2、STAT3蛋白表达水平。结果与A组比较，B组各时间点JAK2 mRNA（3．5221±0．3112、5．5446±1．2479、28．4939±2．0742、12．5023±0．5025）及30、60、120min时间点STAT3 mRNA的相对表达量升高（10．5726±1．1449、44．8684±2．0218、7．2113±1．4239），60、120min时间点JAK2（0．3441±0．0414、0．4872±0．0184）、STAT3蛋白表达升高（0．6380±0．0109、0．3861±0．0121），差异有统计学意义（P〈0．01）；与B组比较，c、D组各个时间点JAK2 mRNA的相对表达量（2．1207±0．1025、3．7891±0．5083、13．3262±1．4876、3．7323±0．6125；2．7262±0．4991、2．3952±0．3466、9．6233．±1．0955、4．8082±0．6442）及30、60、120min时间点STAT3 mRNA的相对表达量下降（5．8233±1．1793、11．6400±0．8085、2．6956±0．4514；3．0244±0．5343、14．9727±0．1877、5．4984±0．3878），差异有统计学意义（P〈0．05）；60、120min JAK2（0．2587±0．0141、0．3654±0．0103；0．2702±0．0558、0．3874±0．0135）、STAT3蛋白相对表达量（0．4567±0．0179、0．3272±0．0184；0．4777±0．0178、0．3509±0．0070）显著降低（P〈0．01）。结论HMGB1可诱导大鼠胰腺腺泡细胞JAK2／STAT3信号通路的活化。

大鼠胰腺离体灌注技术的建立

目的建立大鼠离体胰腺灌注技术。方法采用大鼠离体胰腺灌注技术对10只高脂肥胖大鼠胰岛β细胞功能进行研究。结果6只大鼠符合胰腺整体灌注胰腺完整性的评定标准:(1)在整个灌注期间灌注压保持在(70±5)mm Hg(1mm Hg=0.133 kPa)。(2)灌注结束后检测分离的胰腺十二指肠组织块,均存在十二指肠蠕动活性。(3)持续精氨酸刺激较持续高糖刺激胰岛素分泌幅度明显增高[最大胰岛素分泌率:(987±100)μU/min vs(545±50)μU/min,P<0.05;平均胰岛素分泌率:(544±73)μU/min vs (260±28)μU/min,P<0.05]。结论成功建立了大鼠胰腺整体灌注技术,此技术可用于大鼠离体胰岛β细胞功能研究。

长期高脂饮食诱导大鼠胰腺损伤的形态学演变

本研究通过对高脂饮食诱发的大鼠胰腺形态结构变化进行动态观察，为进一步探索长期高脂饮食与胰腺损害的发生机制提供研究基础。一。

清胰汤对急性胰腺炎大鼠胰腺NF—κB p65表达的影响

急性胰腺炎（AP）为临床常见病，病情凶险，常引起全身炎症反应综合征（SIRS），并最终导致多器官功能衰竭（MODS）。日前具体发病机制尚不明确，治疗仍以对症支持为主。因而探求AP发病机制对寻找有效的治疗方法意义重大。本研究观察清胰汤对AP大鼠胰腺NF—κB p65表达的影响。