心脉通胶囊对离体大鼠胸主动脉条的作用及机制

目的探讨心脉通胶囊(XMT)对离体大鼠胸主动脉舒张作用的影响及机制。方法采用大鼠胸主动脉环张力测定法,观察不同浓度XMT(200、400及800 g/L)对去甲肾上腺素(NE)和氯化钾(KCl)预收缩胸主动脉环的舒张作用及量效曲线的影响;以NE作为血管收缩刺激剂,观察XMT对内钙释放与外钙内流的影响。结果XMT使NE和KCl的量效曲线向右下移动,最大反应性降低;在无钙Kerbs液中,XMT抑制NE诱导内钙释放所诱导的血管收缩反应,对复钙后NE所致的血管持续收缩具有抑制趋势。结论XMT可使离体大鼠胸主动脉条舒张,该作用可能与钙离子拮抗有关。

DL0805抑制血管紧张素Ⅱ通过Ca^(2+)依赖和非Ca^(2+)依赖途径引起的大鼠胸主动脉环收缩

目的探讨Rho激酶抑制剂DL0805抑制血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)收缩大鼠胸主动脉环的机制。方法体外培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC),在有/无1.8 mmol/L Ca2+的环境下采用Fura2/AM荧光探针法测定细胞内游离钙(intracellular calcium,[Ca2+]i)的变化。应用Western blotting检测大鼠胸主动脉环肌球蛋白磷酸酶靶亚基1(myosin phosphatase target subunit 1,MYPT1)和Akt蛋白磷酸化,以及Rho激酶1(Rho kinase 1,ROCK1)蛋白表达水平。结果 DL0805(1、10μmol/L)抑制AngⅡ(100 nmol/L)引起的VSMC细胞内钙释放和外钙内流。DL0805(25、50μmol/L)抑制AngⅡ(100 nmol/L)引起的MYPT1和Akt磷酸化水平以及ROCK1蛋白表达水平增高。结论 DL0805能抑制AngⅡ通过Ca2+依赖和非Ca2+依赖途径引起的大鼠胸主动脉环收缩。

螺内酯对离体大鼠胸主动脉环舒张功能的作用和机制

目的研究螺内酯(spironolactone,SPT)对离体血管平滑肌张力影响,同时探讨SPT的作用机制。方法离体血管平滑肌张力记录法,应用SPT,观测其对Sprague Dawley(SD)大鼠离体胸主动脉环的作用及不同工具药的影响。结果 SPT对KCl(30 mmol.L-1)和NE(1μmol.L-1)预收缩的血管环具有浓度依赖的舒张作用,对内皮完整和去内皮血管环舒张作用无差异,该舒张作用为非内皮依赖性。Na+/H+交换阻滞剂氨氯吡咪(amiloride,AM,1μmol.L-1)对SPT的舒血管作用有抑制作用。在KCl预收缩基础上,加入钾通道阻断剂氯化钡(BaCl2,2μmol.L-1)、四乙胺(TEA,0.2 mol.L-1)、四氨基吡啶(4-AP,1 mmol.L-1)均不能抑制SPT的舒血管效应,ATP敏感钾通道(KATP)格列苯脲(Gli,10μmol.L-1)能抑制SPT对血管的舒张作用。在无钙的生理盐溶液中,SPT对CaCl2收缩血管有明显抑制作用。结论 SPT舒张血管的作用具有浓度依赖性,其作用机制可能与抑制Na+/H+交换、ATP敏感钾通道(KATP)以及钙离子内流有关。

氯胺酮对大鼠胸主动脉环张力的影响及机制

目的研究氯胺酮舒张大鼠胸主动脉的作用及机制。方法采用离体血管环灌流装置,观察氯胺酮预对收缩状态下的胸主动脉的作用并探讨其机制。结果氯胺酮(0.01-1mmol·L-1)显著舒张内皮完整的胸主动脉环,而轻微舒张去内皮的胸主动脉环。孵育TEA(10mmol·L-1)、Bacl2(1mmol·L-1)及L-NAME(0.1mmol·L-1)减弱氯胺酮的舒张作用,预孵4-AP(1mmol·L-1)、Gly(0.01mmol·L-1)及Indo(0.01mmol·L-1)对氯胺酮的舒张作用无影响。结论 BKCa、Kir及一氧化氮合酶参与氯胺酮显著舒张胸主动脉的作用,该作用呈浓度和内皮依赖性。

大鼠胸主动脉平滑肌细胞的原代培养及分离鉴定

本实验通过建立简单高效的大鼠主动脉平滑肌细胞体外原代培养和鉴定方法,为下一步培养其他动物主动脉平滑肌细胞奠定基础。取成年SD雄性大鼠胸主动脉组织,显微镜下分离出主动脉中膜层,采用组织块联合酶消化法进行大鼠胸主动脉平滑肌细胞体外原代培养。再通过观察细胞形态学特征,免疫组织化学染色观察细胞中α-SMA和CD105两种蛋白表达情况对细胞进行鉴定。实验结果表明,组织块联合酶消化培养5 d细胞开始增殖,10~12 d细胞长满。显微镜下观察细胞呈纺锤形、三角形或椭圆形;免疫组化结果显示平滑肌细胞中α-SMA表达为阳性,CD105表达为阴性,表明分离出大鼠胸主动脉平滑肌细胞中不含有内皮细胞和成纤维细胞。

钾通道抑制剂减弱吉非罗齐对离体大鼠胸主动脉环的舒张作用

目的观察吉非罗齐对大鼠离体胸主动脉肌源性反应的影响,并探讨其作用机制。方法采用离体血管张力方法观察吉非罗齐对SD大鼠胸主动脉环静息张力及苯肾上腺素(PE)预收缩的影响;观察一氧化氮合成酶(NOS)抑制剂、环氧合酶抑制剂和K+通道阻断剂对吉非罗齐作用的影响。结果吉非罗齐(1×10-5～3×10-4mol.L-1)对大鼠胸主动脉静息张力无影响,但对PE(10-6mol.L-1)所致的预收缩具有浓度依赖性舒张作用,其最大舒张率为最大舒张的80.42%±6.35%。电压依赖性钾通道(KV)阻断剂四氨基吡啶(4-AP,10-3mol.L-1)、钙激活钾通道(KCa)阻断剂四乙胺(TEA,10-2mol.L-1)、内向整流钾通道(KIR)阻断剂氯化钡(BaCl2,10-3mol.L-1)和ATP敏感钾通道(KATP)阻断剂格列苯脲(Gli,10-5mol.L-1)均可减弱吉非罗齐的血管舒张作用(P<0.05),而一氧化氮合酶(NOS)抑制剂L-NAME(10-4mol.L-1)及环氧酶抑制剂吲哚美辛(10-5mol.L-1)对吉非罗齐的舒张作用无影响(P>0.05)。结论吉非罗齐对大鼠主动脉具有舒张作用,该舒张作用与NO及前列环素无关;可能与开放KV、KCa、KIR和KATP通道有关。

大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞的培养方法初探

目的:建立大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞组织贴块法培养模型。方法:分离大鼠胸主动脉外膜,切成1 mm×1 mm×1 mm大小组织块,均匀贴于细胞培养瓶壁上,加入含20%血清的细胞培养液DMEM,置入细胞培养箱于37℃,5%CO2条件下传代培养。结果:第3～4 d,少量细胞从组织块周边游出,第6～8 d后,细胞围绕组织块生长至亚融合状态,0.25%胰酶消化后传代,可得到较纯成纤维细胞。结论:利用组织贴块法培养大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞存活率高,操作简单,结果稳定,在血管重塑、血管纤维化、细胞凋亡、细胞表型转变等研究领域具有应用价值。

大鼠胸主动脉舒缩反应节段性差异的等效转换

目的 :通过相关分析消除离体动脉不同节段反应差异对实验结果的影响。方法 :以生理多道记录仪记录离体大鼠胸主动脉环从下到上 4节段舒缩张力反应 ,用回归方程对舒缩反应节段性差异作等效转换。结果 :大鼠胸主动脉下段对苯肾上腺素收缩反应高于次下段、次上段和上段 ,次下段高于次上段、上段 (P <0 .0 5 ) ;下段对乙酰胆碱舒张反应高于次下段、次上段和上段 ,次下段高于次上段和上段 (P <0 .0 5 )。相关分析显示节段间收缩反应呈直线相关 ;舒张反应上段对下段呈曲线相关 ,余呈直线相关。按相关方程等效转换各动脉节段的舒缩反应 ,可消除反应的节段差异 (P >0 .0 5 )。结论 :通过回归方程作等效转换可消除动脉舒缩反应的节段性差异。

Rho激酶抑制剂DL0805-0对大鼠离体胸主动脉的舒张作用及机制研究

目的探讨Rho激酶抑制剂DL0805-0对离体大鼠胸主动脉的舒张作用及作用机制。方法采用大鼠胸主动脉环张力测定法,观察DL0805-0对内皮完整或剔除的大鼠胸主动脉环的影响。应用法舒地尔、左旋硝基精氨酸甲醋(LNAME)、亚甲蓝、吲哚美辛、四乙胺(TEA)、格列本脲和4-氨基吡啶(4-AP)等工具药,研究DL0805-0舒张血管的作用机制。结果 DL0805-0能剂量依赖性的舒张KCl(60 mmol·L-1)和NE(0.1μmol·L-1)预收缩的大鼠胸主动脉环。LNAME可明显抑制DL0805-0对NE收缩血管的舒张作用,而亚甲蓝和吲哚美辛无明显影响。TEA可明显抑制DL0805-0对NE收缩血管的舒张作用,而格列本脲和4-AP无明显影响。DL0805-0能够明显抑制NE在无钙K-H液中引起的血管收缩和复钙诱导的外钙依赖性血管收缩。结论 DL0805-0具有明显的舒张血管作用,其作用可能依赖于血管内皮功能,另外开放血管平滑肌细胞上钙激活的钾离子通道以及阻滞钙离子通道可能也是作用机制之一。

黄芩苷对离体大鼠胸主动脉的舒张作用及机制

研究黄芩苷对大鼠离体胸主动脉环的舒张作用并探讨其可能的机制。记录去甲肾上腺素(NE)和KCl预收缩的大鼠离体主动脉环张力变化,观察黄芩苷的舒血管作用及不同工具药对其影响。实验发现黄芩苷对NE和KCl引起的去内皮和内皮完整大鼠胸主动脉环的收缩均有舒张作用;L-硝基精氨酸甲酯、亚甲蓝不能抑制黄芩苷对大鼠胸主动脉环的舒张作用,吲哚美辛能显著抑制;钾离子通道阻断剂4-氨基吡啶、四乙基胺、BaCl2不能抑制黄芩苷对胸主动脉环的舒张作用,格列苯脲能抑制黄芩苷的舒张作用;无钙环境下,黄芩苷预处理对NE收缩有明显抑制作用。因此,黄芩苷具有浓度依赖性血管舒张作用,此作用具有内皮依赖性和非内皮依赖性特点,内皮依赖性收缩可能与前列环素途径有关,非内皮依赖机制可能与KATP通道及钙离子通道有关。

ERK1/2及JNK参与DL0805抑制血管紧张素Ⅱ引起的大鼠离体胸主动脉环收缩

目的研究Rho激酶抑制剂DL0805对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)引起的大鼠离体胸主动脉环收缩反应的影响及其可能的机制。方法测定离体血管张力观察大鼠胸主动脉环收缩反应,Western blot检测大鼠离体胸主动脉环ERK1/2和JNK蛋白磷酸化,和AngⅡ1型受体(AT1R)蛋白表达水平。结果 DL0805(10、25和50μmol/L)浓度依赖性地抑制AngⅡ(100 nmol/L)引起的内皮完整或去内皮的大鼠离体胸主动脉环收缩(P<0.01,P<0.001),DL0805(25和50μmol/L)抑制AngⅡ(100 nmol/L)诱导的ERK1/2和JNK的活化(P<0.05,P<0.01和P<0.001),但DL0805(5、25和50μmol/L)对AngⅡ刺激的血管环AT1R蛋白表达水平无显著影响。结论 DL0805抑制AngⅡ引起的大鼠离体胸主动脉环收缩,其机制可能与其抑制AngⅡ诱导的ERK1/2和JNK活化有关。

H3K9me3参与调节高糖诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞增殖

目的:研究H3K9me3在高糖诱导大鼠胸主动脉平滑肌A7r5细胞增殖中的作用,并初步探讨其可能的作用机制。方法:应用MTT法检测高糖刺激下不同浓度的H3K9甲基转移酶SUV39H1特异性抑制剂Chaetocin(0、10、25、50、75、100 nmol/L)和50nmol/L H3K9甲基转移酶SUV39H1特异性抑制剂Chaetocin在不同时间点(24、48、72 h和5 d)对细胞增殖的影响。应用Western bolt法观察50 nmol/L H3K9甲基转移酶SUV39H1特异性抑制剂Chaetocin在高糖浓度下干预A7r5细胞72 h后,对H3K9me3和p53表达的影响。结果:Chaetocin可显著抑制高糖诱导下A7r5细胞的增殖,且抑制作用呈浓度和时间依赖性。与正常糖相比,Chaetocin可显著下调A7r5细胞在高糖诱导下表达增多的H3K9me3,同时显著上调在高糖诱导下表达减少的p53(P<0.05)。结论:高糖可通过H3K9me3下调p53的表达促进大鼠胸主动脉平滑肌A7r5细胞的增殖,H3K9甲基转移酶SUV39H1特异性抑制剂Chaetocin可抑制上述过程,为减少糖尿病大血管并发症提供了治疗的新思路。

Rho激酶抑制剂DL0805对血管紧张素Ⅱ刺激的大鼠离体胸主动脉环的舒张作用及机制研究

目的探讨Rho激酶抑制剂DL0805对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)刺激的大鼠离体胸主动脉环的舒张作用与机制。方法制备SD大鼠胸主动脉环,测定离体血管张力,观察DL0805对AngⅡ收缩血管作用及量效曲线的影响;Western blot检测大鼠离体胸主动脉环肌球蛋白轻链(myosin light chain 2,MLC2)蛋白磷酸化水平。结果DL0805对AngⅡ(100 nmol·L-1)收缩的血管环具有浓度依赖性的舒张作用,其舒张血管作用部分依赖于内皮。25、50μmol·L-1的DL0805使AngⅡ量效曲线呈非平行右移,最大反应压低,pD'2为4.65±0.04。DL0805(25、50μmol·L-1)抑制AngⅡ(100 nmol·L-1)引起的MLC2磷酸化水平增加。结论 DL0805呈浓度依赖性地舒张AngⅡ收缩的大鼠离体胸主动脉环,其机制可能与拮抗血管紧张素Ⅱ1型受体(angiotensinⅡtype 1 receptor,AT1R),抑制AngⅡ引起的MLC2磷酸化水平增加有关。

异叶青兰总黄酮对离体大鼠胸主动脉环的舒张作用及其机制

探讨异叶青兰总黄酮(DHBF)对大鼠胸主动脉血管环张力的影响,并探讨其可能的作用机制,为新疆地方药材的开发和有效利用提供理论依据。采用离体血管灌流技术,通过生物信号采集和分析系统测定不同质量浓度的DHBF(0.015,0.030,0.060,0.120,0.240和0.360 mg/L)对大鼠胸主动脉环血管环张力的影响。结果显示:(1)不同质量浓度的DHBF对静息状态下血管环的张力无明显影响(P>0.05);(2)与对照组比较,DHBF对去甲肾上腺素预收缩的内皮完整组和去内皮组血管环均具有明显的舒张作用(P<0.05),且内皮完整组的舒张作用明显强于去内皮组(P<0.05);与对照组比较,DHBF对KCl预收缩的血管环有明显的舒张作用(P<0.05),且内皮完整组和去内皮组血管环的差异无统计学意义(P>0.05);(3)与对照组和去内皮组比较,DHBF+L-NAME组(DHBF+MB)组对血管环的舒张作用明显被抑制(P<0.05),并呈浓度依赖性。DHBF对NE及KCl预收缩的血管环有明显的舒张作用,这可能与抑制了胞内肌浆网钙释放和Ca^(2+)通道等有关,且部分依赖于内皮细胞,这可能与作用于内皮依赖性的NO-cGMP信号通路有关。

苦物质引起去甲肾上腺素预收缩的大鼠主动脉平滑肌舒张的作用机理研究

为研究苦物质舒张预收缩的大鼠胸主动脉平滑肌的作用机制,以测定肌张力为主要手段,结合多种细胞信号通路阻断剂研究了苦物质的作用通路.结果表明:苦物质对于去甲肾上腺素介导的大鼠胸主动脉的收缩具有高效、快速的舒张作用,此舒张作用与IP3受体和L型钙通道的阻断密切相关.故以氯喹和苦精为代表的苦物质因对血管平滑肌具有良好的舒张作用,有望成为针对高血压等血管相关疾病的新的治疗药物.

氨基胍改善高果糖对大鼠主动脉内皮依赖性舒张功能损伤的保护作用及机制

目的探讨氨基胍对高果糖致大鼠离体胸主动脉环内皮依赖性舒张反应损伤的保护作用及机制。方法用离体血管环灌流装置,观察不同浓度氨基胍对高果糖引起血管内皮依赖性舒张反应损伤的保护作用;并分析血管壁中NO含量以及eNOS、Akt和ERK1/2蛋白磷酸化的表达。结果高果糖抑制乙酰胆碱诱导的内皮依赖性舒张,降低血管壁中NO的含量和eNOS活性,并促进ERK1/2磷酸化水平上调,但对Akt磷酸化无显著影响;用氨基胍与高果糖共同孵育后,明显改善高果糖对内皮依赖性舒张反应的损伤并恢复血管壁NO含量和eNOS活性,同时降低ERK1/2磷酸化水平。结论氨基胍能改善高果糖对离体胸主动脉环内皮依赖舒张反应的损伤作用。其保护机制与抑制ERK1/2磷酸化和恢复eNOS活性有关,而与AKT磷酸化活性无关。

普罗托品对大鼠血管平滑肌收缩反应及细胞内游离钙浓度的影响

目的 探讨普罗托品(protopine ,Pro)对大鼠血管平滑肌细胞内游离钙浓度的影响。方法 采用无Ca2 + 复Ca2 + 的实验法,间接观察Pro对大鼠血管平滑肌细胞内游离钙浓度([Ca2 + ] i)的可能影响,再利用钙荧光指示剂Fura 2 AM负载的培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞,直接观察在Pro存在下,对去甲肾上腺素(NA)和高钾所致的[Ca2 + ] i 的升高的影响。结果 在无钙Krebs液中,Pro 10、3 0、10 0 μmol L对NA所致血管条的短暂收缩均有明显的浓度依赖性抑制作用,对复Ca2 + 后NA所诱发的持续收缩也呈剂量依赖性抑制作用。在Fura 2 AM负载血管平滑肌细胞的实验表明,Pro (5 0 μmol L ,10 0 μmol L)对静息时的[Ca2 + ] i 无明显影响;在有外钙存在条件下,Pro 5 0 μmol L能明显降低NA所致[Ca2 + ] i 的升高,对KCl引起的[Ca2 + ] i升高有降低趋势;当Pro的浓度增加到10 0 μmol L时,对NA和KCl引起的[Ca2 + ] i 升高均有明显的抑制作用。结论 Pro可能通过抑制Ca2 + 释放和(或)Ca2 + 内流来降低NA和高钾所致血管平滑肌[Ca2 + ] i 的升高,从而抑制血管平滑肌的收缩反应。

金鸡菊对大鼠主动脉的舒张作用及钾通道机制

目的：研究金鸡菊（Coreopsis tinctoria Nuff.）乙醇提取物对离体血管平滑肌张力影响,同时探讨其作用机制。方法：采用大鼠离体胸主动脉灌流,应用金鸡菊提取物（0.25、0.50、0.75和1.00 mg/ml）记录张力变化,观测其对Sprague Dawley（SD）大鼠离体胸主动脉环的作用,L-NAME及不同钾通道阻滞剂的影响。结果：金鸡菊提取物0.50~1.00 mg/ml对氯化钾（60 mmol/L）和苯肾上腺素（0.3μmol/L）预收缩的血管环具有浓度依赖的舒张作用,对内皮完整和去内皮血管环舒张作用无差异,该舒张作用为非内皮依赖性。在KCl预收缩基础上,加入一氧化氮合酶抑制剂（L-NAME,100μmol/L）和内向整流钾通道阻断剂钾通道阻断剂氯化钡（BaCl2,30μmol/L）均不能抑制金鸡菊提取物提取物的舒血管效应,非选择性钾通道阻断剂（TEA,10mmol/L）、电压依赖性钾通道阻断剂四氨基吡啶（4-AP,1 mmol/L）、ATP敏感钾通道阻断剂（Gli,10μmol/L）及大电导激活钾通道阻断剂（IbTX,100 nmol/L）能抑制金鸡菊提取物提取物对血管的舒张作用。结论：金鸡菊提取物提取物舒张血管的作用具有浓度依赖性,其作用机制可能与激活KATP、BKca和Kv有关。

蜂胶总黄酮对大鼠血管舒张功能的影响及其机制

目的观察蜂胶总黄酮(Total flavonoids of propoli,TFP)对离体大鼠胸主动脉舒张功能的影响并探讨其可能的机制。方法取SD大鼠制备离体胸主动脉环,并随机分为内皮完整组、去内皮组、L-NAME预孵育内皮完整组、Indo预孵育内皮完整组、L-NAME+Indo预孵育内皮完整组;观察累计浓度的TFP(0.011~2.700 g/L)对分别用KCl和PE预收缩的各组血管环的作用。结果 TFP对分别用KCl和PE预收缩的血管环具有浓度依赖性舒张作用;在去内皮组,最大舒张率均明显降低,与内皮完整组比较有显著差异(P<0.01)。在KCl和PE预收缩的内皮完整血管环,用一氧化氮(NO)合酶抑制剂(L-NAME,3×10^(-4)mol/L)预孵育后,TFP的最大舒张率降低,与未用L-NAME预孵育组比较,有显著差异(P<0.01);用环氧酶抑制剂吲哚美辛(Indo,1×10^(-5)mol/L)预孵育后,TFP的舒张作用降低,与未用Indo预孵育组比较,有显著差异(P<0.01);联合应用L-NAME+Indo预孵育后,TFP的最大舒张率与去内皮组比较,无显著差异(P>0.05)。结论 TFP具有血管舒张作用,其舒张血管作用与刺激血管内皮细胞释放NO和PGI_2有关。

黄芪注射液对体外血管新生的影响

背景:血管新生受生长因子的影响,黄芪可与血管内皮生长因子具有协同促血管新生的功效,但机制尚不明确。目的:通过与单一血管内皮生长因子干预比较,观察中药黄芪对体外血管新生的作用机制。方法:将黄芪注射液及血管内皮生长因子作用于SD大鼠胸主动脉内皮细胞,应用细胞增殖、细胞迁移、小管形成实验观察黄芪注射液对体外血管新生的促进作用,用Western blot实验检测血管内皮生长因子的表达。结果与结论:黄芪能明显促进大鼠胸主动脉内皮细胞的增殖(P<0.01),迁移的细胞数增加(P<0.01),胸主动脉内皮细胞的小管形成数增加(P<0.01),并明显促进内皮细胞血管内皮生长因子的表达(P<0.01)。说明黄芪能明显促进内皮细胞增殖、细胞迁移、小管形成,具有显著的促进体外血管新生作用,其机制可能是通过增加血管内皮生长因子的表达而实现的。