马钱苷对大鼠前脂肪细胞增殖与分化的影响

目的探讨马钱苷对大鼠前脂肪细胞增殖与分化的影响。方法原代培养大鼠前脂肪细胞,以四甲基偶氮唑盐(MTT)方法检测马钱苷对大鼠前脂肪细胞增殖的影响;以酶组织化学提取法检测其对大鼠前脂肪细胞分化过程中磷酸甘油脱氢酶(GPDH)的影响;以油红O染色方法检测其对大鼠前脂肪细胞分化过程中细胞内脂肪积聚的影响。结果8,16,32μmol/L的马钱苷能够促进大鼠前脂肪细胞的增殖,抑制其分化过程中GPDH的升高和脂肪积聚,作用呈明显量效关系。结论马钱苷具有促进大鼠前脂肪细胞增殖,抑制大鼠前脂肪细胞分化的作用。

六味地黄丸入血成分莫诺苷对大鼠前脂肪细胞增殖与分化的影响

目的:测定大鼠口服六味地黄丸后血清中莫诺苷浓度,并探讨莫诺苷对大鼠前脂肪细胞增殖与分化的影响。方法:反相高效液相色谱法检测大鼠口服六味地黄丸后血清中莫诺苷浓度;原代培养大鼠前脂肪细胞;以四甲基偶氮唑盐(MTT)方法检测莫诺苷对大鼠前脂肪细胞增殖的影响;以油红O染色方法检测其对大鼠前脂肪细胞分化过程中的细胞内脂肪积聚的影响。结果:莫诺苷与血清中其它成分较好分离。在250～2000ng范围内线性关系良好(r=0.9991),平均回收率为95.27%,莫诺苷在大鼠血中的平均血药浓度为(16.92±3.63)μg/mL;8.5～68.0μg/mL的莫诺苷促进大鼠前脂肪细胞的增殖,抑制其分化过程中的脂肪积聚。结论:莫诺苷可能为六味地黄丸的体内直接作用物质之一;有效成分分离测定与药效学研究相结合的方法将有助于阐明六味地黄丸的有效成分及作用机理。

悬浮组织块法分离培养SD大鼠脂肪干细胞的实验研究

目的:建立SD大鼠脂肪干细胞悬浮组织块分离培养法。方法:取正常SD大鼠股沟处脂肪组织,用悬浮组织块法和组织块贴壁法分离培养SD大鼠脂肪干细胞,观察细胞的生长状况及形态特征。取第3代对数期细胞,CCK-8法绘制其生长曲线;免疫荧光法检测其表面抗原CD29、CD44、CD45的表达情况;分别用成脂、成骨诱导培养液进行诱导分化,油红O、茜素红染色定性鉴定。结果:两种方法体外培养得到的SD大鼠脂肪干细胞形态为梭形纤维样,生长力旺盛,生长曲线为典型的"S"型;免疫荧光法检测显示第3代细胞强表达CD29、CD44,CD45表达阴性;细胞成脂诱导培养14 d后,油红O染色为阳性;成骨诱导培养14 d后,茜素红染色为阳性。结论:悬浮组织块法可以分离培养出SD大鼠脂肪干细胞,方法简便,为体外分离培养SD大鼠脂肪干细胞提供了一种新的方法。

不同剂型六味地黄方含药血清对大鼠前脂肪细胞增殖与分化的影响

目的:比较六味地黄方各剂型(汤、丸、超微饮片)对大鼠前脂肪细胞增殖与分化的影响。方法:原代培养大鼠前脂肪细胞,用四甲基偶氮唑盐(MTT)方法检测六味地黄方含药血清对大鼠前脂肪细胞的增殖情况,以酶组织化学法检测其对前脂肪细胞分化过程中的磷酸甘油脱氢酶(GPDH)的影响,油红O染色方法测定其对细胞内脂肪积聚的影响。结果:10%以内六味地黄方含药血清对大鼠前脂肪细胞的增殖有促进作用;对分化过程中的GP-DH的升高有抑制作用;而对于分化过程中的脂肪积聚则有促进分解的作用。结论:六味地黄汤、丸、超微饮片能促进大鼠前脂肪细胞的增殖,抑制其分化过程中的GPDH的升高和脂肪积聚;上述各作用皆以高剂量组为佳。

六味地黄丸4种入血成分组合对大鼠前脂肪细胞增殖、分化影响的最佳浓度配伍研究

目的:探讨六味地黄丸中马钱苷、芍药苷、莫诺苷、丹皮酚4种入血成分组合对大鼠前脂肪细胞增殖、分化的影响,并优选其最佳浓度配伍。方法:原代培养大鼠的前脂肪细胞,将马钱苷等4种入血成分按四因素三水平的正交试验表L9(34)安排实验,同时设立空白对照组,以四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞增殖的速度,以油红O染色方法检测其对大鼠前脂肪细胞分化过程中的细胞内脂肪积聚的影响,以光密度为指标比较各因素、水平之间的差异。结果:六味地黄丸4种入血成分组合对大鼠前脂肪细胞增殖、分化的影响以组合A3B1C3D2的作用最为显著(P<0.01);与各单体组分作用比较,具有高度显著性差异(P<0.01)。结论:六味地黄丸4种入血成分以马钱苷、莫诺苷高浓度,丹皮酚中浓度,芍药苷低浓度配伍组合对大鼠前脂肪细胞增殖、分化影响较单体组分作用显著,表现为中药组方的整体性和协同增效调节作用。

抗波形纤维蛋白单抗对大鼠前体脂肪细胞增殖分化及波形纤维形态的影响

将抗波形纤维蛋白单抗通过显微注射导入未分化的大鼠前体脂肪细胞的细胞质 ,观察其对细胞增殖、分化 ,及其中等纤维———内源波形纤维形态的影响。以注射人IgG和未注射的前体脂肪细胞作为对照 ,发现注射单抗的前体脂肪细胞呈现以下特征 :( 1)细胞呈典型的凋亡形态 ,经Hoechst 33342着染可见胞核呈致密浓染的颗粒状或块状荧光 ,胞内脂滴几乎没有 ;( 2 )增殖的细胞数和甘油三酯值均极显著低于对照组 ;( 3)波形纤维蛋白间接免疫荧光染色微弱 ,纤维束解聚成短小团块状 ,分布无序、弥散。上述结果表明 ,抗波形纤维蛋白单抗对前体脂肪细胞的增殖和分化有明显阻滞作用。

肾上腺素对大鼠前脂肪细胞增殖、分化及其细胞内cAMP的影响

目的研究肾上腺素对大鼠前脂肪细胞增殖、分化及其细胞内cAMP水平的影响,探讨肾上腺素对大鼠前脂肪细胞的作用机制。方法原代培养大鼠前脂肪细胞,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测六味地黄超微饮片含药血清对前脂肪细胞的增殖,以酶组织化学法检测其对前脂肪细胞分化过程中的磷酸甘油脱氢酶(GPDH)的影响,油红O染色方法测定其对细胞内脂肪积聚的影响。在大鼠前脂肪细胞生长旺盛时加入肾上腺素,以该细胞内的cAMP水平作为评价指标,利用cAMP与125I-cAMP和特异性蛋白激酶竞争结合原理测定该细胞内cAMP浓度。结果肾上腺素促进大鼠前脂肪细胞的增殖,抑制分化过程中GPDH的升高及脂肪积聚;升高大鼠前脂肪细胞内cAMP水平。结论肾上腺素-β受体-cAMP系统可能参与大鼠前脂肪细胞的增殖与分化。

糖氧剥夺对大鼠脂肪干细胞自噬和成脂的影响

目的研究大鼠脂肪干细胞(adipose derived stem cells,ADSC)及糖氧剥夺下,细胞自噬和对诱导分化成脂的影响。方法常规制备ADSC,设置对照组(G组)、少糖组(SG组)、缺氧组(G+CoCl;组)、缺氧少糖组(SG+CoCl;组)和自噬阳性对照组(EBSS组)。设置不同培养时间,MTT检测各组ADSC存活情况;Western blot分析细胞自噬及成脂诱导油红"O"染色与比色。结果不同培养时间,ADSC细胞均可增殖。培养24 h,各组细胞之间无差别(P>0.05),但培养48 h和72 h,G组细胞增殖明显高于其它三组(SG组、G+CoCl;组和SG+CoCl;组),P<0.05;Western blot分析,EBSS组、G组和SG组的自噬相关蛋白Ⅰ型(LC3-Ⅰ)明显弱于自噬相关蛋白Ⅱ型(LC3-Ⅱ),且G+CoCl;组和SG+CoCl;组的LC3-Ⅰ明显高于EBSS组;成脂诱导实验中,G组油红"O"比色值最高,与其它组比较均有统计学差异(P<0.05)。结论 ADSC具有较强的细胞自噬作用,推测在缺糖缺氧条件下,通过抑制细胞自噬,降低ADSC存活率以及诱导分化成脂率。

大鼠脂肪间充质干细胞与壳聚糖支架体外联合培养

目的采用大鼠脂肪间充质干细胞与壳聚糖支架体外联合培养为颅脑损伤大鼠模型神经修复提供种子细胞。方法取SD大鼠附睾周围脂肪组织,分离培养脂肪间充质干细胞,传至第3代流式细胞仪检测细胞表面标记CD29、CD90、CD44表达;冻干燥法制备壳聚糖支架材料,再取第5代细胞以2×106/m L的密度接种于壳聚糖三维支架上,促进其向神经元和胶质细胞方向分化;免疫荧光染色鉴定细胞分化结果。结果分离培养的脂肪间充质干细胞表面标记CD29、CD90、CD44阳性表达率分别为91.05%、92.76%、96.56%,达到理想的纯度;制备的壳聚糖三维支架具有合适的三维多孔结构;培养基诱导7 d左右可见检测神经细胞特异性标志(巢蛋白和β-tubulinⅢ)的表达,分化后的大部分细胞呈现典型的神经元样改变,细胞伸出细长突起或网状突起,可见较多的细胞形成网络连接。免疫荧光染色鉴定结果证实,神经球高表达巢蛋白(Nestin)阳性率(65.23±0.98)%,分化细胞β-tubulinⅢ阳性率(62.35±5.71)%,微管相关蛋白2(MAP2ab)阳性率(12.87±2.63)%。结论大鼠脂肪间充质干细胞联合壳聚糖支架培养可在体外培养得到较高比例神经细胞特异性标志的Nestin及β-tubulinⅢ阳性细胞,并有一定比例MAP2ab阳性细胞出现,该特异性标志表达的细胞用于大鼠颅脑外伤模型神经修复实验。

雌激素对老年大鼠脂肪干细胞体外诱导成骨能力的影响

目的:通过观察雌激素对老年大鼠脂肪干细胞(ADSCs)体外增殖和成骨分化能力的影响,进一步明确雌激素水平和增龄变化与骨代谢相关性。方法:选取18月龄雌性SD大鼠ADSCs,雌激素刺激浓度为10-7mol/L,采用MTT法,茜素红染色及生化检测雌激素对ADSCs体外增殖与成骨分化能力的影响。结果:成骨诱导21d镜下观测含雌激素组茜素红染色阳性面积大于常规诱导组,非诱导组染色阴性。RT-PCR半定量检测显示含雌激素组较常规诱导组OCN表达强烈。结论:雌激素能增强老年大鼠ADSCs体外增殖与诱导成骨分化能力。

大鼠脂肪源性干细胞分离培养的实验研究

目的研究分离、培养、鉴定大鼠脂肪源性干细胞的实验方法。方法提取大鼠双侧腹股沟处脂肪组织,进行原代培养及流式细胞检测仪的鉴定。用MTT法检测不同原代细胞接种密度的细胞分裂增殖率的变化,并观察第1-第13代细胞分裂增殖的特点。结果大鼠脂肪源性干细胞的生长呈大量细胞集落,表面标记物CD44、CD105、CD49d表达阳性,CD106表达阴性。不同的原代细胞接种密度会影响细胞分裂增殖,以1×106/ml细胞密度接种时细胞的增殖速率高于其它对照组。该细胞株经多次传代后仍能保持较强的分裂增殖能力。结论大鼠脂肪源性干细胞分离培养方法简便,不同的原代细胞接种密度会影响细胞分裂增殖,细胞经多次传代后仍能保持较强的分裂增殖能力。

两种培养基诱导人和大鼠脂肪干细胞向脂肪细胞分化的比较

目的比较两种培养基诱导人和大鼠脂肪干细胞(adipose-derived stem cell,ADSC)的成脂分化能力,探寻更为适宜的ADSC成脂诱导方案。方法提取3例临床患者的脂肪干细胞(h ADSCs)及出生6周大鼠的脂肪干细胞(r ADSCs),将h ADSCs、r ADSCs分别接种于六孔板,分为未诱导组、成脂诱导I组和II组,分别使用普通培养基、成脂诱导培养基I和II,培养10 d后以油红O染色,镜下观察及检测490 nm吸光度值(A490),比较脂滴形成情况。结果未诱导的h ADSCs和r ADSCs均呈成纤维细胞样生长,成脂诱导培养3 d后出现脂滴;油红O染色显示,成脂诱导组脂滴呈橘红色,h ADSCs和r ADSCs的成脂诱导II组形成的脂滴均明显大于诱导I组,统计学分析显示h ADSCs的成脂诱导II组测得的A490明显高于诱导I组(P<0.01);而两组的r ADSCs的A490无明显差异(P>0.05)。结论 h ADSCs和r ADSCs在两种诱导培养基中均可成脂分化,但成脂诱导II组优于成脂诱导I组。

聚乳酸共聚物复合脂肪干细胞对骨质疏松性骨折愈后生物力学的影响

背景:聚乳酸共聚物骨支架具有优异的生物降解性且易被塑造为三维立体支架,能促进骨组织和血管的生成、生长。目的:观察骨质疏松骨折后,聚乳酸共聚物复合脂肪干细胞对骨折愈合后生物力学的影响。方法:将60只SD大鼠随机分为4组,空白对照组不做任何处理;模型组切除双侧卵巢3个月后,制作双侧胫骨骨折模型;细胞治疗组切除双侧卵巢3个月后,制作双侧胫骨骨折模型,于骨折周围植入脂肪干细胞;联合治疗组切除双侧卵巢3个月后,制作双侧胫骨骨折模型,于骨折周围植入聚乳酸共聚物-脂肪干细胞复合体。治疗4周后,观察各组骨密度、骨痂厚度、生物力学参数及骨小梁微结构变化。结果与结论:(1)骨密度:模型组骨密度低于空白对照组(P<0.05);细胞治疗组、联合治疗组骨密度高于模型组(P<0.05),但低于空白对照组(P<0.05);联合治疗组骨密度高于细胞治疗组(P<0.05);(2)骨痂厚度:细胞治疗组、联合治疗组骨痂厚度高于模型组、空白对照组(P<0.05),且联合治疗组高于细胞治疗组(P<0.05);(3)生物力学测试:与空白对照组比较,模型组破坏载荷、极限应力、剪切强度、弹性模量降低(P<0.05),剪切应变升高(P<0.05);与模型组比较,细胞治疗组、联合治疗组破坏载荷、极限应力、剪切强度、弹性模量升高(P<0.05),剪切应变降低(P<0.05),且以联合治疗组改变更显著(P<0.05);(4)骨小梁微结构:模型组骨小梁排列紊乱,间距增大,甚至出现断裂和陷窝;细胞治疗组、联合治疗组骨小梁数目增多且增粗增厚,间距减小,陷窝减少;(5)结果表明:聚乳酸共聚物复合脂肪干细胞治疗骨质疏松骨折可明显改善愈合后骨组织的生物力学参数。

SPIO标记对成骨样分化细胞IRP1基因及蛋白表达的影响

【目的】探讨超顺磁性氧化铁(SPIO)标记大鼠脂肪间充质干细胞(RADSC)后,其成骨样分化细胞中铁调节蛋白1(IRP1)基因及蛋白表达的变化。【方法】本实验采用转染剂多聚赖氨酸(PLL)介导SPIO标记RADSC,然后将其诱导为成骨样分化细胞,分别在诱导后0、7、14、21 d进行RT-PCR及Western blot检测其IRP1基因及蛋白的表达。【结果】成骨样分化细胞IRP1 mRNA表达水平在SPIO标记与未标记组之间差异均无统计学显著性意义(F=1.571,P=0.239);IRP1蛋白表达水平在标记与未标记组之间差异均无统计学显著性意义(F=0.547,P=0.500)。【结论】SPIO标记并未对成骨样分化细胞的IRP1基因及IRP1蛋白表达产生明显影响。

人体细胞学

9927340 细胞外钠浓度上升对基因表达的机制[日]/冈崎具树∥日内分泌志.-1998,74(1).-78 冀医情9927341 探索细胞发信新的语言[日]/松尾寿之∥日内分泌志.-1997,73(5).-179

乳源酪蛋白巨肽对大鼠前脂肪细胞增殖与脂肪积聚的影响

肥胖严重威胁着人类的健康,它不仅影响整个机体的正常生理功能,还会增加心血管疾病和Ⅱ型糖尿病等并发症[1]的发生率。乳源酪蛋白肽（CMP）是存在于乳清中的一种生物活性肽[2],

5-氮胞苷对大鼠脂肪间充质干细胞的诱导分化作用及相关蛋白的表达

目的探讨5-氮胞苷(5-Aza)对大鼠脂肪间充质干细胞(ADMSCs)的诱导分化作用及相关蛋白的表达。方法采取酶消化法和贴壁法分离培养Sprague-Dawley(SD)大鼠腹部皮下脂肪组织,采用抗单核细胞人类白细胞抗原DR(HLA-DR)、兔抗CD13、CD44、CD105、血管性血友病因子(vWF)多克隆抗体对培养细胞进行鉴定,排除造血干细胞及成纤维细胞,取第3代ADMSCs细胞,以每孔1×10~4个细胞接种于24孔培养板中,并将其随机分为正常组和诱导组,正常组细胞于常规培养基中加入无菌生理盐水培养,诱导组细胞于常规培养基中加入浓度为10μmol/L的5-Aza进行诱导培养。比较2组细胞的形态结构、心肌肌钙蛋白T(cTnT)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)及缝隙连接蛋白43(Connexin43)基因表达量及cTnT、cTnI、Connexin43蛋白的表达情况。结果诱导组ADMSCs细胞增殖缓慢,体积增大并逐渐变为棒状或宽梭形,形态呈心肌细胞特征;RT-qPCR结果显示,诱导组细胞cTnT、cTnI及Connexin43基因表达量增强;免疫组化结果显示,诱导组细胞细胞质明显可见棕黄色或棕褐色颗粒物质,而正常组细胞细胞质中棕黄色或棕褐色颗粒物质较少,且诱导组细胞cTnT、cTnI及Connexin43蛋白阳性表达评分明显高于正常组(P<0.05)。结论大鼠脂肪组织中含有多向分化潜能的间充质干细胞(MSCs),5-Aza可以诱导大鼠ADMSCs向心肌细胞分化,ADMSCs有望成为治疗心肌梗死的种子细胞。

大鼠脂肪干细胞治疗卵巢早衰的实验研究

目的探讨大鼠脂肪干细胞对卵巢早衰(POF)的治疗作用。方法以顺铂连续7 d腹腔注射8~10周龄的SD大鼠建立POF模型,在造模后连续腹腔注射大鼠脂肪干细胞进行治疗,并在治疗后观察卵巢组织结构,检测雌二醇(E_2)及卵泡刺激素(FSH)分泌水平以评价大鼠脂肪干细胞对卵巢早衰的治疗效果。结果成功建立大鼠卵巢早衰模型,经过治疗后,大鼠的体重明显增加,死亡数量减少,卵巢组织结构逐渐恢复正常,E_2及FSH分泌恢复正常。结论大鼠脂肪干细胞对卵巢早衰具有治疗作用。

17β-雌二醇对大鼠脂肪源干细胞增殖及胶原蛋白合成影响研究

目的探讨雌激素对大鼠脂肪源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)增殖及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响。方法 2016年12月至2017年5月以广州医科大学第一附属医院保存的大鼠ADSCs作为研究对象,体外培养过程中加入不同浓度17-β雌二醇,MTT检测增殖能力,荧光定量PCR及蛋白质印记技术(Western blot)检测Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白mRNA表达及蛋白的表达情况。结果 17-β雌二醇浓度为10-9mol/L时,大鼠ADSCs增殖指数及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 17-β雌二醇可以促进ADSCs胶原蛋白的表达,两者联合应用有望成为治疗绝经后盆腔器官脱垂的方法之一。

重组人结缔组织生长因子对大鼠脂肪源性干细胞Ⅰ型胶原蛋白合成及分化的影响

目的探讨重组人结缔组织生长因子(hCTGF)对大鼠脂肪源性干细胞(ADSCs)分化及Ⅰ型胶原蛋白表达的影响。方法 2010年9月至2011年9月在广州医学院第一附属医院采用贴壁培养法分离纯化大鼠ADSCs,流式细胞仪分析第3代大鼠ADSCs表面抗原标记物;含100μg/L重组hCTGF的培养基作为刺激组,无重组hCTGF为对照组,分别培养7、14、28d后,RT-PCR和western-blot检测大鼠ADSCs中Ⅰ型胶原蛋白表达;观察重组hCTGF对大鼠ADSCs成骨、成脂方向分化的影响。结果大鼠ADSCs表面抗原CD44、CD90、CD105、CD49d阳性,CD34、CD45、CD106阴性;Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达量刺激组与对照组7、14、28d时分别为1.069±0.324vs.0.298±0.029、2.162±0.038vs.0.652±0.024、3.360±0.058vs.0.815±0.041,差异有统计学意义(P<0.05),Ⅰ型胶原蛋白的表达量7、14、28d时分别为0.761±0.041vs.0.679±0.029、0.834±0.115vs.0.708±0.061、0.774±0.180vs.0.720±0.026,差异有统计学意义(P<0.05)。结论重组hCTGF可上调大鼠ADSCsⅠ型胶原蛋白的表达,抑制大鼠ADSCs向成脂、成骨分化。推测重组hCTGF可能使大鼠ADSCs发生了向成纤维细胞定向分化。