基于大鼠脑缺血再灌注损伤模型建立芍药内酯苷的PK-PD模型

[目的]建立芍药内酯苷的药动学-药效学(PK-PD)模型。[方法]首先采用液质联用法测定大鼠脑缺血再灌注损伤模型给予辛芍组方后的不同时间点所得血浆样本中芍药内酯苷的药物浓度,获得药时曲线;同时采用试剂盒测定不同时间点所得血浆样本中的超氧化物歧化酶(SOD)和乳酸脱氢酶(LDH)含量,获得时效曲线。然后用Win Non Lin软件采用房室模型的分析方法对芍药内酯苷的药代动力学参数进行拟合,获得PK参数。在此基础之上,固定相关的药代动力学参数,对时效关系进行拟合,得到相关的PD参数,根据PD参数,建立辛芍组方中芍药内酯苷的PK-PD模型。[结果]当以SOD为药效指标时,可得辛芍组方中芍药内酯苷的PK-PD模型为E=21.04+(7.16×Ce)/(Ce+372.4);当以LDH为药效指标时,可得辛芍组方中代表成分芍药内酯苷的PK-PD模型为E=216.83-(37.31×Ce)/(Ce+0.04)。[结论]SOD和LDH的浓度与芍药内酯苷的浓度存在一定的相关性。芍药内酯苷可通过提高SOD、降低LDH发挥抗氧化作用来实现保护脑缺血再灌注损伤。

灯盏甲素在大鼠脑缺血再灌注损伤模型的PK-PD结合模型研究

本研究旨在建立辛芍组方中灯盏甲素的PK-PD结合模型。首先采用液质联用法测定大鼠脑缺血再灌注损伤模型给药后的不同时间点所得血浆样本中灯盏甲素的药物浓度,获得药时曲线;同时采用试剂盒测定不同时间点所得血浆样本中的两种药效指标(SOD和LDH),获得时效曲线。然后用Win Non Lin软件采用房室模型的分析方法对灯盏甲素的药代动力学参数进行拟合,获得PK参数。在此基础之上,固定相关的药代动力学参数,对时效关系进行拟合,得到相关的PD参数,根据PD参数,建立辛芍组方中灯盏甲素的PK-PD结合模型。当以SOD为药效指标时,可得辛芍组方中灯盏甲素的PK-PD模型为E=20.67+(1.22×Ce)/(Ce+5.58);当以LDH为药效指标时,可得辛芍组方中代表成分灯盏甲素的PK-PD模型为E=214.17-(32.72×Ce)/(Ce+0.08)。结果表明,SOD和LDH的浓度与灯盏甲素的浓度存在一定的相关性。辛芍组方及其主要活性成分灯盏甲素可通过提高SOD、降低LDH发挥抗氧化作用来实现保护脑缺血再灌注损伤。

改良线栓法大鼠脑缺血再灌注损伤模型的建立

目的：通过改良线栓法建立稳定的Wistar大鼠大脑中动脉脑缺血/再灌注模型。方法：60只雄性Wistar大鼠,参考Longa法并适当改进建立大鼠大脑中动脉脑缺血/再灌注模型30只,对照组30只。实验组结扎右侧颈总动脉近心端,夹闭颈总动脉远心端,颈总动脉剪一小口,从颈总动脉经颈内动脉插入线栓,缺血1 h后,在麻醉状态下完全拔出线栓,并结扎颈内动脉远心端。对照组结扎右侧颈内动脉近心端及远心端,但不插入线栓。术后取脑组织行TTC染色,并进行神经功能评定。结果：经改良线栓法制作脑缺血再灌注损伤模型,成功率达82.75%,平均操作时间约（20.4±5.3）min,模型大鼠右侧眼裂变小,行走时向右侧转圈,模型大鼠神经功能评分均在3-4分,经TTC染色梗死侧大脑半球颜色苍白,脑梗死区范围一致,梗死体积约（34.62±5.32）%;对照组无任何临床症状,无神经功能缺失表现,经TTC染色无梗死灶。结论：通过改良,成功建立了Wistar大鼠大脑中动脉脑缺血/再灌注模型。

大鼠脑缺血再灌注损伤模型评价与分析

目的总结脑缺血再灌注损伤模型的复制方法，对脑缺血不同造模方法及其优缺点进行再评价，以期为临床和实验研究提供参考。方法计算机检索中国期刊全文数据库（CNKI，1979．1—2015．3）、中国科技期刊全文数据库（VIP，1989．1～2009．9）和中国生物医学文献数据库（CBM，1978．1～2015．3），按纳入与排除标准选择文献、提取资料，选择五因素三指标对脑缺血再灌注模型进行再评价，分析影响模型成功的因素及效应指标。结果所选指标：神经功能缺损评分、脑梗死容积增长率、脑组织含水量增长率平均值分别为2．40％、21．72％和4．45％，与假手术组相比差异有显著性意义（P〈0．05）。说明线拴法复制脑缺血模型是可行的。结论线栓法复制脑缺血再灌注损伤模型为目前公认的较为合适的动物模型，可以模拟缺血性脑血管病。

黄角汤对大鼠脑缺血再灌注损伤模型自由基影响的实验研究

目的 :探讨黄角汤对大鼠脑缺血再灌注损伤时自由基损伤的影响以探讨其治疗机制。方法 :采用大脑双侧颈总动脉闭塞的不完全性脑缺血再灌注模型 ,选用黄角汤及尼莫地平对模型进行治疗 ,并设正常组及模型组。观察各组大鼠血浆超氧化物歧化酶 (SOD)、丙二醛 (MDA)含量的变化。结果 :模型组大鼠血浆MDA值显著高于正常组 ,SOD值显著低于正常组。黄角汤组SOD、MDA值有不同程度的恢复(P <0 .0 5 ,P <0 .0 1)。结论 :黄角汤对大鼠脑缺血再灌注损伤的机制与纠正血浆SOD/MDA平衡失调 ,抗自由基损伤等有关。

黄角汤对大鼠脑缺血再灌注损伤模型自由基影响的实验研究

目的 探讨黄角汤对大鼠脑缺血再灌注损伤时自由基损伤的影响 ,以探讨治疗其可能机制。方法 采用大脑双侧颈总动脉闭塞的不完全性脑缺血再灌注模型 ,选用黄角汤及尼莫地平对模型进行治疗 ,并设正常组及模型组。观察各组大鼠血浆超氧化物歧化酶 (SOD)、丙二醛 (MDA)含量的变化。结果 模型组大鼠血浆MDA值显著高于正常组 ,SOD值显著低于正常组。黄角汤组SOD、MDA值有不同程度的恢复 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1)。结论 黄角汤对大鼠脑缺血再灌注损伤的机制与纠正血浆SOD/MDA平衡失调、抗自由基损伤等有关。

构建大鼠脑缺血再灌注损伤模型的方法

临床工作中发现,缺血性脑血管病的发病部位大多在大脑中动脉,临床的主要治疗手段是溶栓治疗,但溶栓治疗成功、血管再通后会带来一系列脑缺血再灌注损伤的问题,这已经成为目前医学需要迫切解决的问题[1]。因而能够建立模拟人类脑血管病的动物模型,将为研究人类脑缺血再灌注损伤的发病机制和寻求保护脑组织的方法提供实验依据。

GSTT对大鼠脑缺血再灌注损伤模型脑组织IL-1、TNF-αmRNA水平的影响

目的:观察蒺藜总皂苷(gross saponins from tribulus terrestris,GSTT)对大鼠脑缺血再灌注损伤模型IL-1、TNF-α在mRNA水平表达影响的实验研究。方法:SD大鼠40只,适应性喂养一周后,随机分为:正常对照组;MCAO模型组;大、小剂量GSTT治疗组。制备大鼠大脑中动脉栓塞模型,缺血2h,再灌注24h后,检测大鼠神经功能评分;预处理组大鼠术前7d,按照GSTT大、小剂量给予治疗,Real-time方法检测IL-1、TNF-α在mRNA水平的表达。结果:与正常对照相比较,模型组,大、小剂量GSTT治疗组,大鼠神经功能平分较高(P<0.05);与模型组相比较,大、小剂量GSTT治疗组,明显上调IL-1、同时显著下调TNF-α在mRNA水平的表达(P<0.05);且大治疗组效果更加显著。结论:GSTT抑制炎症因子IL-6表达的同时,促进抗炎因子TNF-α的表达,从而实现其对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤后神经元的拮抗保护作用。

丁苯酞对大鼠脑缺血再灌注损伤模型细胞凋亡作用及机制初步研究

目的探讨丁苯酞对大鼠脑缺血再灌注损伤模型细胞凋亡的作用及机制。方法选择SD雄性大鼠30只,鼠龄58~65 d,体质量200~220 g。构建大鼠脑缺血再灌注损伤模型,缺血2 h后腹腔注射丁苯酞记为实验组,同时设置模型组和假手术组,每组30只。模型组和假手术组用0.9%氯化钠溶液(生理盐水)代替丁苯酞。24 h后,对其神经功能进行评分,氯化三苯基四氮唑(TTC)染色检测脑梗死体积,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)测定细胞凋亡,Western blot检测组织中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)表达情况,黄嘌呤氧化法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性,硫代巴比妥酸显色法测定丙二醛(MDA)含量,分光光度法检测还原型谷胱甘肽(GSH)含量。结果模型组神经功能评分、脑梗死体积比例、细胞凋亡数目、Cleaved Caspase-3表达水平及MDA含量均明显高于假手术组[(2.84±0.47)分vs 0分、(31.95±1.54)vs 0、(36.15±2.58)vs(4.92±2.61)、(1.42±0.08)vs(0.19±0.03)、(13.94±2.81)mmol/mg prot vs(4.75±1.68)mmol/mg prot],而GSH含量、SOD活性明显低于假手术组[(36.15±2.67)mg/mg prot vs(59.23±4.62)mg/mg prot、(14.42±1.48)U/mg prot vs(18.56±1.61)U/mg prot;P<0.05]。实验组神经功能评分[(2.35±0.37)分]、脑梗死体积比例(26.48±1.68)、细胞凋亡数目(25.64±3.28)、Cleaved Caspase-3表达水平(1.10±1.03)及MDA含量[(7.35±1.72)nmol/mg port]均明显低于模型组,而GSH含量[(46.26±3.94)mg/mg port]、SOD活性[(16.84±1.36)U/mg prot]明显高于模型组(P<0.05)。结论丁苯酞能够有效改善脑缺血再灌注大鼠模型神经功能,降低脑组织中的细胞凋亡和MDA含量,减少脑梗死体积,提高SOD活性和GSH含量。

乙酰葛根素纳米制剂联合Wnt/β-catenin信号通路在大鼠脑缺血再灌注损伤模型中调节自噬发挥神经保护作用

目的:探索乙酰葛根素纳米制剂——乙酰葛根素-聚乳酸-乙醇酸纳米颗粒(AP-PLGA-NPs)通过与Wnt/β-catenin通路的联合作用在大鼠脑缺血再灌注损伤(CIRI)期间对自噬的影响。方法:将48只雄性SpragueDawley(SD)大鼠随机分为3组(16只/组):实验组(AP-PLGA-NPs联合Wnt/β-catenin激动剂氯化锂)、CIRI组和对照组。制备AP-PLGA-NPs后,采用大脑中动脉缝合闭塞法,在缺血2 h后再灌注24 h,建立CIRI大鼠模型。然后使用Garcia神经功能评分评估所有组的神经行为表现。使用2%三苯基四氮唑(TTC)对脑梗死体积进行鉴定和染色,并通过Western Blot和密度测定法测定皮层β-catenin、Bcl-2和Bax的表达。结果:与CIRI组相比,实验组神经行为评分明显降低(P<0.05),脑梗死体积相应减小(P<0.05);与CIRI组相比,实验组β-catenin表达增加,皮质Bax和Bcl-2表达也明显降低(P<0.05)。结论:AP-PLGA-NPs联合Wnt/β-catenin信号可以下调自噬水平、减轻大鼠的脑缺血再灌注损伤。

基于PI3K/AKT信号通路探讨针刺对脑缺血再灌注损伤模型大鼠线粒体自噬的机制研究

目的 观察针刺疗法对脑缺血再灌注损伤(CIRI)模型大鼠脑组织线粒体自噬的影响,并探究其对脑组织保护作用的机制。方法 40只SD大鼠根据随机数字表法分为假手术组、CIRI组、非穴位针刺组、针刺穴位组,每组6只。通过改良线栓法建立CIRI模型大鼠,针刺穴位组针刺“大椎”“人中”“百会”三穴,非穴位针刺组针刺穴位左侧旁开0.3 cm处,假手术组和CIRI组不行针刺。针刺疗法72 h后,通过Zea Longa法评价大鼠神经功能,分离大鼠脑组织,通过TTC法检测脑组织梗死体积,JC-1法检测脑组织线粒体膜电位。通过Western blot检测自噬相关蛋白及PI3K-AKT信号通路相关蛋白表达。结果 与假手术组比较,CIRI组大鼠神经功能损伤评分明显升高[(3.50±0.96)分比(0.00±0.00)分,P<0.05],CIRI组大鼠脑组织线粒体自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、Bcl2腺病素EIB19KD相互作用蛋白(BNIP3)水平[(4.48±0.75)比(1.00±0.14),(4.77±0.44)比(1.00±0.09),P<0.05]显著升高,p62水平[(0.98±0.14)比(5.01±0.17),P<0.05]降低,自噬增强,线粒体膜电位降低[红/绿荧光比(1.08±0.10)比(4.99±0.13),P<0.05],同时PI3K-AKT信号通路相关蛋白磷酸化水平显著降低[p-PI3K:(1.04±0.08)比(5.09±0.07),p-AKT:(0.99±0.15)比(4.43±0.14),p-mTOR:(0.84±0.08)比(5.00±0.16),P<0.05];与非穴位针刺组比较,针刺穴位组CIRI模型大鼠脑组织损伤减轻,表现为大鼠神经功能损伤评分[(2.17±0.90)分比(3.17±0.69)分,P<0.05]、脑梗死体积百分比[(31.25±1.97)%比(39.23±1.89)%,P<0.05]以及脑半球肿胀百分比[(3.42±0.32)%比(4.98±0.37)%,P<0.05]显著降低(P<0.05),线粒体膜电位升高[红/绿荧光比(3.24±0.13)比(1.25±0.06),P<0.05],自噬水平降低,同时PI3K-AKT信号通路相关蛋白p-PI3K、p-AKT和p-mTOR水平显著升高[p-PI3K:(3.07±0.14)比(1.18±0.12),p-AKT:(3.50±0.15)比(1.42±0.13),p-mTOR(2.65±0.16)比(1.01±0.11),P<0.05]。结论 针刺疗法可能通过激活PI3K/AKT信号通路抑制线粒体自噬,从而实现对CIRI模型大鼠的脑保护作用。

RIC在脑缺血再灌注损伤小鼠模型中的神经保护作用

研究脑缺血再灌注后RIC是否可以发挥神经保护作用,从而减轻神经功能缺损。方法 60只10~12周龄SPF级雄性C57BL/6小鼠,采用大脑动脉闭塞(MCAO)线拴方法建立右侧脑缺血再灌注损伤(I/R)模型,按随机数字表法分为sham组、I/R组和I/R+RIC组,每组各20只。sham组不建模、I/R组和I/R+RIC组建模。I/R+RIC(remote ischemic conditioning,RIC)组在造模后对I/R组大鼠进行RIC干预连续干预5d,I/R组建模后不给予任何处理。统计分析3组脑损伤面积、神经行为学评分,海马CAI区、大脑皮质TUNEL及细胞色素C的阳性细胞数。结果 Sham组小鼠无梗死区域;I/R组小鼠梗死区域较Sham组有显著增加(P<0.01);而I/R+RIC组较I/R组小鼠脑梗死区域显著减小(P<0.01)。与对照组相比,遭受I/R的小鼠在海马CAI区和大脑皮质中,TUNEL和细胞色素C阳性的细胞数量明显增多,且此增大幅度在统计学上具有显著差异(P值小于0.05)。然而,经过RIC处理的I/R+RIC组小鼠,这些区域的TUNEL和细胞色素C阳性细胞数量显著下降,这一变化同样在统计学上具有显着性(P值小于0.05)。结论 脑I/R后RIC干预具有保护脑I/R后神经细胞功能损伤,对脑缺血再灌注损伤有神经保护作用。

醒神通督针刺对脑缺血再灌注损伤大鼠自噬的作用研究

目的从自噬探讨醒神通督针刺抗脑缺血再灌注损伤的作用机制。方法雄性SD大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注模型组(简称模型组)和脑缺血再灌注+醒神通督针刺组(简称针刺组)。采用大脑中动脉线栓法构建脑缺血再灌注损伤模型,针刺组大鼠造模前5 d开始干预,取穴“百会”“四神聪”“足三里”,每日针刺1次,直至再灌注24 h。另外2组大鼠只抓取不针刺。再灌注24 h后采用氯化三苯基四氮唑(triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色观察脑梗死面积,透射电镜观察神经元及自噬的亚显微结构,Western blot、免疫荧光检测缺血皮层微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein light chain 3B,LC3)、肌球蛋白样BCL2结合蛋白(coiled coil moesin like BCL2 interacting protein,Beclin-1)、自噬相关蛋白(autophagy related protein,Atg)12、蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称Akt)与磷酸化Akt(phosphorylated Akt,p-Akt)的表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠大脑中动脉供血区梗死面积明显增加(P<0.05),且缺血皮层神经元结构严重破坏,自噬明显激活,自噬蛋白Beclin-1、Atg12表达及LC3Ⅱ/I比值显著升高(P<0.05),p-Akt表达下降(P<0.05)。与模型组比较,针刺组大鼠脑梗死面积减少(P<0.05),透射电镜显示神经元结构较为正常,自噬体较少。此外,针刺组自噬蛋白Beclin-1、Atg12表达及LC3Ⅱ/I比值明显降低(P<0.05),p-Akt表达显著上调(P<0.05)。结论针刺具有抗脑缺血再灌注损伤作用,可能通过抑制自噬的活化实现。

人参皂苷Rc通过调控AMPK通路介导的细胞焦亡减轻小鼠脑缺血再灌注损伤

目的:探讨人参皂苷Rc对脑缺血再灌注损伤(CIRI)小鼠的保护作用,并从细胞焦亡角度阐释其作用机制。方法:将C57BL/6小鼠随机分为假手术(sham)组、大脑中动脉闭塞/再灌注(MCAO/R)组、人参皂苷Rc+MCAO/R组(Rc组)、AMP活化蛋白激酶(AMPK)激动剂阿卡地新(AICAR)+MCAO/R组(agonist组)和人参皂苷Rc+MCAO/R+AMPK抑制剂Compound C组(Rc+inhibitor组)。对agonist组小鼠给予AICAR(500 mg/kg)腹腔注射,Rc+inhibitor组小鼠给予Compound C(20 mg/kg)腹腔注射;Rc组和Rc+inhibitor组小鼠造模后给予人参皂苷Rc(40 mg/kg)灌胃,每天一次,连续7 d;sham组和MCAO/R组则给予等体积的纯化水。Zea Longa评分观察小鼠神经功能缺损程度,TTC染色观察小鼠脑梗死体积,干湿重法观察小鼠脑水肿程度,HE染色观察小鼠脑组织病理形态的改变,RT-qPCR和Western blot检测小鼠脑组织AMPK、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶1(caspase-1)和焦亡效应蛋白消皮素D(GSDMD)的表达,ELISA检测炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18的含量。结果:Rc组和agonist组小鼠神经功能缺损症状减轻,脑梗死体积减小,脑水肿和神经元病理损伤受到抑制,脑组织pAMPK/AMPK比值和AMPK mRNA表达水平升高,细胞焦亡相关蛋白NLRP3、caspase-1和GSDMD的mRNA和蛋白表达水平降低,炎症因子IL-1β和IL-18表达水平降低。Rc+inhibitor组小鼠脑组织p-AMPK/AMPK比值和AMPK mRNA表达水平较Rc组显著下降(P<0.05),NLRP3、caspase-1和GSDMD的mRNA和蛋白表达水平,以及IL-1β和IL-18表达水平显著升高(P<0.05),小鼠神经功能缺损程度评分升高,脑梗死体积增大,脑水肿和神经元病理损伤显著加重(P<0.05)。结论:人参皂苷Rc可能通过活化AMPK通路抑制NLRP3/caspase-1/GSDMD介导的细胞焦亡,从而减轻小鼠CIRI。

精胺后处理上调线粒体自噬保护脑缺血/再灌注损伤小鼠模型的分子机制研究

目的 探讨精胺后处理保护脑缺血/再灌注损伤(I/RI)小鼠模型的疗效及其分子机制。方法 60只6~8 w龄C57BL小鼠随机分为6组(每组10只):(1)对照(Control)组;(2)假手术(Sham)组;(3)模型(MCAO)组;(4)模型+精胺治疗(MCAO+Spm)组;(5)MCAO+Spm+Adv shRNA-Drp-1组;(6)MCAO+Spm+Adv shRNA-NT组。构建大脑中动脉闭塞(MCAO)小鼠模型。TTC(2,3,5-氯化三苯基四氮唑)染色脑切片测定脑梗死体积。尼氏(Nissl)染色脑组织切片测定神经元死亡情况。ELISA测定活性氧自由基(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平。腺病毒转染敲低脑组织动态相关蛋白-1 (Drp-1)。Western blot测定脑组织Drp-1、B淋巴细胞瘤基因-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤基因-2(Bcl-2)、PTEN诱导激酶1(PINK1)和自噬相关蛋白(Parkin-1)的表达情况。结果 与Sham组相比,MCAO组脑梗死体积所占百分比升高(P<0.05),Nissl阳性细胞所占百分比降低(P<0.05),ROS和MDA水平升高(P<0.05),SOD水平降低(P<0.05),Drp-1、Bax、PINK1和Parkin-1的表达水平升高(P <0.05),Bcl-2表达水平降低(P<0.05)。与MCAO组相比,MCAO+Spm组脑梗死体积所占百分比降低(P<0.05),Nissl阳性细胞所占百分比增多(P <0.05),ROS和MDA水平降低(P <0.05),SOD水平升高(P <0.05),Drp-1、Bcl-2、PINK1和Parkin-1的表达水平升高(P<0.05),Bax的表达水平降低(P<0.05)。与MCAO+Spm组相比,MCAO+Spm+Adv shRNA-Drp-1组Drp-1和Bax表达水平降低,Bcl-2、PINK1和Parkin-1的表达水平升高(P <0.05)。结论 Spm后处理通过Drp-1上调线粒体自噬发挥保护I/RI损伤小鼠模型的功效。

羟基红花黄色素A通过调控环氧合酶2/前列腺素E_(2)信号通路减轻大鼠脑缺血再灌注损伤

目的观察羟基红花黄色素A(HSYA)对环氧合酶2(COX-2)/前列腺素E_(2)(PGE_(2))信号通路的影响,探讨HSYA对脑缺血再灌注损伤(CIRI)的保护机制。方法90只雄性SD大鼠随机分为假手术组(S组)、手术组(CIRI组)、HSYA组和塞来昔布组(C组),HSYA组进一步分为HSYA低剂量组(HSYA-L组)、HSYA中剂量组(HSYA-M组)和HSYA高剂量组(HSYA-H组),每组15只。线栓法制备脑缺血再灌注损伤模型。各组大鼠于术前30 min腹腔注射给药,HSYA各组分别给予HSYA 10、15、25 mg/kg,C组给予塞来昔布40 mg/kg,S组和CIRI组给予等量的生理盐水。各组大鼠模型制作苏醒后立刻进行神经功能学评分,再灌注24 h时进行脑梗死体积检测,同时Nissl染色观察神经细胞损伤,Real-time PCR和Western blotting检测COX-2 mRNA和蛋白的变化,ELISA检测PGE_(2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素(IL)-1β的变化。结果与S组比较,CIRI组神经功能学评分显著升高(P<0.05),脑梗死体积显著增加(P<0.05),神经细胞损伤较重,数目显著降低(P<0.05),COX-2 mRNA和蛋白的表达显著增多,同时PGE_(2)、TNF-α和IL-1β的表达也显著增多(P<0.05);与CIRI组比较,HSYA组及C组神经功能学评分明显降低(P<0.05),脑梗死体积明显减少(P<0.05),神经细胞损伤减轻,数目明显增加(P<0.05),COX-2 mRNA和蛋白及PGE_(2)、TNF-α和IL-1β的表达均明显下降(P<0.05),且HSYA各组之间及HSYA-L组和HSYA-M组与C组比较差异均较显著(P<0.05),而HSYA-H组与C组比较差异无显著性(P>0.05)。结论HSYA减轻缺血性脑卒中再灌注损伤可能与抑制COX-2/PGE_(2)信号通路有关。

外源性胆红素对大鼠脑缺血再灌注损伤的预防作用及其机制

目的:研究外源性胆红素对脑缺血再灌注损伤(I/R)的作用及其对凋亡的影响。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组(I/R组)、5 mg/kg胆红素组(I/R+5 mg组)、10 mg/kg胆红素组(I/R+10 mg组)和15 mg/kg胆红素组(I/R+15 mg组),造模前连续给药7 d,采用线栓法建立大鼠脑I/R模型。造模24 h后取材,氯化三苯基四氮唑染色测定脑梗死面积,H-E染色观察大鼠脑梗死区域病理改变,TUNEL染色检测大鼠脑组织凋亡细胞,免疫荧光组织化学检测大鼠脑p-caspase 3水平。结果:与I/R组相比,I/R+10 mg组脑梗死面积显著降低;与I/R组相比,I/R+5 mg组和I/R+10 mg组脑组织形态较为正常;与I/R组相比,I/R+10 mg组脑组织TUNEL阳性细胞数量显著减少,I/R+5 mg组、I/R+10 mg组和I/R+15 mg组脑组织p-caspase 3阳性细胞数量显著减少。结论:外源性胆红素在一定剂量范围内对大鼠脑缺血再灌注损伤有预防作用,其保护机制与抑制凋亡有关。

GRSF1/GPX4轴调控的铁代谢紊乱在小鼠脑缺血再灌注损伤中的作用

目的探讨GRSF1/GPX4轴调控的铁代谢紊乱在小鼠脑缺血再灌注损伤中的作用。方法清洁级雄性C57BL/6小鼠18只,采用随机数字表法将其分为假手术组、脑缺血再灌注组、脑缺血再灌注+GRSF1过表达组,每组各6只。脑缺血再灌注组采用线栓法制备小鼠脑缺血再灌注损伤模型;脑缺血再灌注+GRSF1过表达组于造模前7天注射GRSF1过表达慢病毒。再灌注24h后行神经功能评分,TUNEL法检测细胞凋亡率,Western blot法检测GRSF1、GPX4、IRP2、TfR1和铁蛋白表达水平。结果与假手术组比较,脑缺血再灌注组神经功能评分、凋亡率、IRP2、TfR1、铁蛋白表达水平升高,GRSF1、GPX4表达水平降低(P<0.05);与脑缺血再灌注组比较,脑缺血再灌注+GRSF1过表达组神经功能评分、凋亡率、IRP2、TfR1、铁蛋白表达水平降低,GRSF1、GPX4表达水平升高(P<0.05)。结论过表达GRSF1通过上调GPX4抑制铁离子代谢紊乱进而减轻小鼠脑缺血再灌注损伤。

硫氢化钠对脑缺血再灌注大鼠脑皮质损伤的影响及机制

目的探讨硫氢化钠(NaHS)对脑缺血再灌注大鼠脑皮质损伤的影响及机制。方法将80只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为假手术组、NaHS组、缺血再灌注组和缺血再灌注+NaHS组,每组20只。缺血再灌注组和缺血再灌注+NaHS组大鼠制备缺血再灌注模型,缺血再灌注+NaHS组大鼠在脑缺血后腹腔给予NaHS 50μmol·kg^(-1),缺血再灌注组大鼠在脑缺血后腹腔给予等体积生理盐水;假手术组和NaHS组只分离出血管不插线栓,NaHS组大鼠分离出血管后腹腔给予NaHS 50μmol·kg^(-1),假手术组大鼠分离出血管后腹腔给予等体积生理盐水。造模24 h后,采用改良神经系统严重程度评分(mNSS)评估4组大鼠神经功能缺损情况,氯化三苯基四氮唑染色法观察4组大鼠脑组织梗死情况,酶联免疫吸附法检测4组大鼠缺血侧脑皮质组织中促炎因子白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)水平,Western blot法检测4组大鼠缺血侧脑皮质中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)表达,免疫荧光法检测4组大鼠缺血侧脑皮质小胶质细胞活化情况。结果假手术组和NaHS组大鼠脑组织呈均匀橘红色,缺血再灌注组和缺血再灌注+NaHS组大鼠缺血侧大脑皮层和纹状体有苍白的梗死区。缺血再灌注组和缺血再灌注+NaHS组大鼠脑梗死面积显著大于假手术组和NaHS组,缺血再灌注+NaHS组大鼠脑梗死面积显著小于缺血再灌注组(P<0.05)。缺血再灌注组和缺血再灌注+NaHS组大鼠mNSS评分显著高于假手术组和NaHS组,缺血再灌注+NaHS组大鼠mNSS评分显著低于缺血再灌注组(P<0.05)。缺血再灌注组和缺血再灌注+NaHS组大鼠缺血侧脑皮质中NLRP3蛋白相对表达量显著高于假手术组和NaHS组,缺血再灌注+NaHS组大鼠缺血侧脑皮质中NLRP3蛋白相对表达量显著低于缺血再灌注组(P<0.05)。缺血再灌注组和缺血再灌注+NaHS组大鼠缺血侧脑皮质中IL-1β和IL-18水平显著高于假手术组和NaHS组,缺血再灌注+NaHS组大鼠缺血侧脑皮质中IL-1β和IL-18水平显著低于缺血再灌注组(P<0.05)。假手术组和NaHS组大鼠缺血侧脑皮质区小胶质细胞均呈正常形态;与假手术组和NaHS组相比,缺血再灌注组大鼠缺血侧脑皮质区小胶质细胞突起明显减少,小胶质细胞胞体亮度明显增强,细胞呈团块状,失去正常形态,处于活化状态的小胶质细胞占比较多;与缺血再灌注组相比,缺血再灌注+NaHS组大鼠缺血侧脑皮质区小胶质细胞突起增多,处于活化状态的小胶质细胞占比较少,形态明显改善。缺血再灌注组和缺血再灌注+NaHS组大鼠缺血侧脑皮质区小胶质细胞总数显著少于假手术组和NaHS组,缺血再灌注+NaHS组大鼠缺血侧脑皮质区小胶质细胞总数显著多于缺血再灌注组(P<0.05)。结论NaHS可抑制NLRP3引起的炎症反应和小胶质细胞活化,降低促炎因子IL-1β和IL-18水平,并显著改善缺血再灌注大鼠脑损伤。

龙生蛭胶囊保护脑缺血再灌注损伤大鼠的作用及机制研究

目的探讨龙生蛭胶囊对脑缺血再灌注损伤大鼠的脑保护作用及机制。方法通过改良线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型。实验分为假手术组(仅分离血管不插线栓,予同体积生理盐水)、模型组(造模,予同体积生理盐水)、尼莫地平组(阳性对照,造模,给药剂量为20 mg/kg)和龙生蛭胶囊低、中、高剂量组(造模,给药剂量依次为0.72、1.44、2.88 g/kg),每组10只。各组大鼠灌胃相应药液/生理盐水,每天1次,连续7 d。末次给药1 h后,采用Zea Longa评分法对各组大鼠的神经功能缺失情况进行评分;ABC-酶联免疫吸附试验法检测大鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平;TTC染色观察大鼠脑梗死体积并计算脑梗死体积比;苏木精-伊红染色观察大鼠脑组织病理形态的变化;免疫组化法检测大鼠脑组织NLRP3蛋白阳性表达情况;实时荧光定量PCR法检测大鼠脑组织Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)mRNA表达;Western blot法检测大鼠脑组织TLR4、NLRP3、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)及细胞核内NF-κB蛋白表达情况。结果与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺失评分,血清TNF-α和IL-6水平,脑梗死体积比,脑组织NF-κB和TLR4 mRNA的相对表达水平,以及脑组织TLR4、NLRP3、p-NF-κB蛋白的相对表达水平及其细胞核内NF-κB蛋白的相对表达水平均显著升高(P<0.01);大鼠脑组织皮层神经细胞间隙增大、水肿明显,可见大量炎性细胞浸润;大鼠脑组织中NLRP3蛋白阳性表达明显增多。与模型组比较,龙生蛭胶囊中、高剂量组及尼莫地平组大鼠以上指标水平均有不同程度逆转,大部分差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);病理形态观察结果明显好转,大鼠脑组织中NLRP3蛋白阳性表达均明显减少。结论龙生蛭胶囊可能通过抑制TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路,抑制神经炎症反应,从而达到对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。