槲皮素对大鼠脑胶质瘤C6细胞增殖调控的作用

目的:研究类黄酮化合物槲皮素(quercetin,QUE)对体外培养的大鼠脑胶质瘤C6细胞增殖调控的作用。方法:按QUE浓度分成10、25、50、75及100μmol.L-15个处理组和空白对照组(生理盐水)及溶剂对照组(二甲亚砜),大鼠脑胶质瘤C6细胞在RPMI 1640培养基中生长达1×106.mL-1后,在96孔板中分别加入上述浓度的QUE继续培养,每组设3复孔,作用24、48及72 h,采用MTT比色法检测QUE对大鼠脑胶质瘤C6细胞的增殖抑制情况,流式细胞术(FCM)对50及100μmol.L-1的QUE作用48 h的大鼠脑胶质瘤C6细胞进行周期分析,免疫组化法检测50μmol.L-1的QUE作用48 h的p53和bcl-2基因产物。结果:与空白对照组比较,QUE处理组随药物浓度增加和作用时间的延长,A值减小(P<0.05),对C6细胞的增殖抑制作用增强,使停滞在G0/G1期的细胞增加(P<0.01),而S和G2/M期细胞减少(P<0.05)。P53蛋白表达增加和Bcl-2蛋白表达减少。结论:QUE对C6细胞增殖抑制作用具有浓度、时间依赖性,通过P53蛋白表达增加和Bcl-2蛋白表达减少诱导细胞凋亡来实现。

全反式维甲酸诱导大鼠C6脑胶质瘤细胞凋亡的实验研究

目的:探讨全反式维甲酸对大鼠C6脑胶质瘤细胞的增殖抑制及其分子机制。方法:MTT法检测全反式维甲酸作用于大鼠C6脑胶质瘤细胞后,观察其对细胞增殖抑制率的影响。流式细胞仪观察肿瘤细胞周期及凋亡率的变化。电镜观察C6细胞超微结构变化。Western blot法在不同时间点对凋亡相关基因caspase-3活性蛋白产物的表达进行了检测。结果:MTT结果表明ATRA对C6细胞的抑制作用具有时间和浓度依赖性。流式细胞仪检测证明与对照组相比,处理组C6细胞发生G1期阻滞;S、G2期细胞比例下降;细胞出现亚二倍峰,凋亡比例明显增加。电镜下全反式维甲酸作用72h后处理组C6细胞呈凋亡改变:如核固缩、染色质趋边凝聚。Western blot检测发现,处理组出现了caspase-3蛋白活性裂解片段。结论:全反式维甲酸抑制C6脑胶质瘤细胞生长,全反式维甲酸抑制脑胶质瘤的作用机理可能至少通过改变细胞周期分布、诱导凋亡来实现。

地昔帕明单用和合用替尼泊苷对大鼠脑胶质瘤C6细胞增殖的调控作用

目的 :研究三环类抗抑郁药地昔帕明 (DMI)对脑胶质瘤C6细胞增殖的调控作用 ,并探讨与临床常用治疗脑瘤的化疗药物替尼泊苷 (VM 2 6 )合用的协同效应。方法 :采用MTT比色法测定大鼠脑胶质瘤C6细胞增殖抑制作用和流式细胞术 (FCM)进行细胞周期分析。结果 :DMI (10— 80 μmol/L)对C6细胞的增殖具有明显的抑制作用 ,呈浓度时间依赖关系 ,药物作用 2 4h的IC50 (95 %置信区间 )为 2 0 7(17 3— 2 4 2 ) μmol/L。DMI (2 0 μmol/L)可使G0 -G1期细胞增加 (P <0 0 5 )而S期细胞减少 (P <0 0 5 ) ,G2 期细胞则无改变。不同浓度DMI和VM 2 6合用显示明显协同效应 (Q =0 72 )。结论 :DMI体外对C6细胞增殖具有浓度时间依赖性抑制作用 ,使细胞阻滞于G0 -G1期 ;与VM 2

缺氧诱导C6大鼠脑胶质瘤细胞亲环素A蛋白表达及其意义

为了探讨缺氧诱导C6大鼠脑胶质瘤细胞亲环素A(Cyclophilin A,CypA)表达水平的改变及其意义。本实验分别于正常(对照)及缺氧(缺氧组)环境培养C6细胞,利用蛋白印迹和RT-PCR技术检测CypA蛋白和mRNA的表达情况;在此基础上,利用RNA干扰技术和MTT技术检测抑制缺氧环境所诱导的CypA蛋白表达对C6细胞增殖的影响。结果显示:缺氧环境诱导C6细胞CypA mRNA和CypA蛋白表达上调,缺氧环境培养1h开始上调,12h达到顶峰;用CypA-siRNA干扰C6细胞CypA表达48h后,C6细胞CypA蛋白水平明显被抑制,细胞增殖能力较对照组显著下降(P<0.01)。本研究表明,缺氧可诱导C6细胞CypA表达水平上调,抑制CypA表达则可降低C6细胞的增殖能力。由此提示,CypA可作为胶质瘤治疗的新靶点。

鼠脑C6胶质瘤细胞上清液诱导人骨髓间充质干细胞向神经元样细胞的分化(英文)

目的：观察人骨髓间充质干细胞经鼠脑C6胶质瘤细胞上清液诱导后向神经元样细胞方向的分化情况。方法：取肝素抗凝人骨髓血，Percoll梯度法体外分离培养骨髓间充质干细胞，胰酶消化后传代扩增。取第4-6代骨髓间充质干细胞，当细胞达90％融合时，按2×10^3/孔接种于24孔板内，第2天分为两组，诱导组用含有50％C6胶质瘤细胞上清液的完全培养基（含体积分数为0．1胎牛血清的L-DMEM培养基）诱导，每隔2d换液1次；对照组单纯加入完全培养基进行培养。诱导后3d，两组细胞采用S-P法进行免疫细胞化学染色，检测神经元特异性标志物的表达。结果：诱导24h后，诱导组多数骨髓间充质干细胞表现出典型的神经元样外观，对照组细胞形态无明显变化。诱导3d后，诱导组神经元烯醇化酶阳性细胞率显著高于对照组（P〈0．01）；诱导组神经丝蛋白阳性细胞率为（44．2±2．4）％，对照组为阴性；两组胶质纤维酸性蛋白均呈阴性表达。结论：鼠脑C6胶质瘤细胞上清液可成功诱导人骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化。

9L/F344与C6/Wistar大鼠脑胶质瘤模型局部细胞免疫反应的比较研究

目的对9L/F344和C6/Wistar两种大鼠脑胶质瘤模型肿瘤局部细胞免疫反应情况进行比较研究。方法采用立体定向技术建立两种大鼠脑胶质瘤模型。定期处死大鼠取脑,常规石蜡切片,苏木精-伊红染色行肿瘤组织病理学观察;冰冻切片,行免疫组织化学染色,观察大鼠脑内肿瘤淋巴细胞浸润情况。结果两种模型脑内肿瘤组织病理学均具有恶性脑胶质瘤的特点。C6/Wistar模型肿瘤周边和瘤内可见大量单个核细胞浸润,肿瘤周边血管呈现“淋巴细胞血管套”现象。肿瘤局部CD68、CD4、CD8阳性的淋巴细胞在C6/Wistar模型中多见;9L/F344模型中可见CD68阳性细胞,但数量较C6模型中为少,P<0.01,且未见CD4、CD8阳性细胞。结论9L/F344模型肿瘤局部T淋巴细胞浸润少。C6/Wistar模型肿瘤周边及瘤内淋巴细胞浸润明显,存在强烈的细胞免疫反应,不适用于胶质瘤免疫治疗的实验研究。

利用C6胶质瘤干细胞建立小鼠脑胶质瘤模型及评价

目的利用C6胶质瘤干细胞建立ICR小鼠动物模型,为深入研究胶质瘤干细胞在脑胶质瘤中的作用提供理想的模型。方法采用悬浮生长法体外培养C6胶质瘤干细胞,用Nestin巢蛋白抗体进行鉴别;利用C6干细胞建立ICR小鼠脑胶质瘤模型,考察小鼠术后的生存状态和肿瘤体积变化;通过HE染色及CD133免疫组化考察小鼠术后的病理学变化。结果 C6胶质瘤干细胞中Nestin表达量为96.01%,Nestin在所培养的C6胶质瘤干细胞球中高表达;小鼠接种肿瘤后食欲不振,体质量偏轻,且行为缓慢,反应呆滞;建模21 d时肿瘤体积为(9.77±6.58)mm3;模型经HE染色后可见脑组织呈浸润性生长,肿瘤细胞核皱缩,排列紊乱;免疫组化CD133染色显示肿瘤细胞胞质显棕色,肿瘤组织中存在大量的脑胶质瘤干细胞。结论利用胶质瘤干细胞建立的脑胶质瘤模型成瘤率高,成瘤周期短,可作为后期脑胶质瘤模型的理想模型。

氯化三乙基锡对大鼠C6脑胶质瘤细胞增殖和细胞周期的影响

目的探讨氯化三乙基锡(triethyltin chloride,TETC)对体外培养大鼠C6脑胶质瘤细胞增殖和细胞周期的影响。方法采用MTT法检测0.5、1.0和2.0μmol/L TETC对体外培养大鼠C6脑胶质瘤细胞作用24h和48h后细胞增殖的影响、采用细胞形态学观察及流式细胞术(FCM)方法检测0.5、1.0和2.0μmol/L TETC对体外培养大鼠C6脑胶质瘤细胞作用48h后细胞增殖和细胞周期的影响。结果MTT法及细胞形态学观察均检测到0.5、1.0和2.0μmol/L TETC在体外均可抑制C6细胞增殖,C6细胞增殖率存在着剂量依赖性和时间依赖性降低趋势;TETC可将C6细胞阻滞在G0/G1期。结论TETC可抑制体外培养大鼠C6胶质瘤细胞增殖,其机制可能与C6细胞周期阻滞在G0/G1期有关。

氯化三乙基锡对体外培养大鼠C6脑胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨氯化三乙基锡(TETC)对体外培养大鼠C6脑胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法采用MTT法检测0.5,1.0和2.0μmol/L TETC对体外培养大鼠C6脑胶质瘤细胞作用24 h和48 h后细胞增殖的影响、HE染色细胞形态学观察0.5,1.0和2.0μmol/L TETC对体外培养大鼠C6脑胶质瘤细胞作用48 h后细胞增殖和形态学变化。采用透射电镜观察0.5,1.0和2.0μmol/LTETC作用C6细胞48 h后的超微形态学变化。采用荧光原位末端标记方法检测细胞凋亡。结果MTT法及HE染色细胞形态学观察均显示0.5,1.0和2.0μmol/L TETC在体外均可抑制C6细胞增殖,C6细胞增殖率存在着剂量依赖性和时间依赖性降低趋势;HE染色和透射电镜可观察到C6细胞凋亡的形态学变化。荧光原位末端标记方法检测到细胞凋亡率存在剂量依赖性上升趋势。结论TETC可抑制体外培养大鼠C6胶质瘤细胞增殖,其机制可能主要与C6细胞凋亡有关。

^125IUdR对大鼠C6脑胶质瘤细胞AgNOR和PCNA表达的影响

目的探讨5-[125I]-2'-脱氧尿苷(125IUdR)对大鼠C6胶质瘤细胞中嗜银核仁组织原区蛋白(AgNOR蛋白)和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。方法体外培养C6胶质瘤细胞,建立C6胶质瘤Wistar大鼠模型,合成125IUdR和127IUdR后于肿瘤原位局部注射,5日后处死动物取标本分别行AgNOR染色和PCNA免疫组织化学染色,计算AgNOR颗粒数目、面积和PCNA标记指数。结果125IUdR治疗组C6胶质瘤细胞的AgNOR颗粒计数和面积、PCNA标记指数分别为(1.70±0.42)个/细胞,(4.32±1.38)μm2/细胞,(36.87±14.51)%;对照组分别为(2.50±0.37)个/细胞,(7.01±1.97)μm2/细胞,(52.24±10.86)%,两组相比均相差显著(P<0.05)。结论125IUdR可掺入肿瘤细胞DNA的合成中,选择性的杀伤S期的肿瘤细胞,显著的抑制C6胶质瘤细胞中AgNOR和PCNA的表达,从而抑制胶质瘤细胞的增殖。

C6大鼠脑胶质细胞瘤伽玛刀治疗的初步研究

目的:对其进行伽玛刀治疗,观察实验组与对照组伽玛刀治疗后肿瘤的影像学变化以及生存期的差异.方法:应用动物立体定向仪将传代培养的C6胶质瘤细胞接种于大鼠右侧尾状核,每只接种量为106个细胞.将荷瘤大鼠随机分为两组,每组10只,于接种肿瘤细胞后14天对实验组大鼠实施伽玛刀治疗,使用50%～70%等剂量曲线,边缘剂量为15Gy;对照组大鼠在伽玛刀治疗室放置相等时间.伽玛刀治疗前后均行MRI检查,每7天一次,观察肿瘤大小的变化,记录实验组与对照组每只大鼠的生存期,观察时间为60天.结果:在接种后7天、24天MRI显示实验组与对照组肿瘤大小无明显差异.伽玛刀治疗后7天、14天实验组肿瘤体积缩小或停止生长,对照组肿瘤增大,其肿瘤体积出现明显差异(P＜0.05).结论:确定了伽玛刀治疗脑胶质瘤的确切疗效,肿瘤体积缩小和停止生长,生存期得以延长,为临床放射外科治疗脑胶质细胞瘤提供了理论依据.但其生存期研究中,治疗组与对照组无显著差异,可能与肿瘤的治疗剂量有关,因此,对脑胶质细胞瘤的放射外科治疗,有待进行深入的量效关系的研究.

注射后留置时间对大鼠C6脑胶质瘤模型的影响

目的:采用不同的留置时间建立大鼠C6胶质瘤模型,比较不同的留置时间对于模型成功率的影响,提高肿瘤种植成功率。方法:36只SD大鼠按留置时间3min、5min、10min分为3组,C6细胞体积10μl细胞悬液、注射时间5min。第一次未种植成功者再次种植。术后用骨蜡封骨窗并清创缝合。造模术后2周和3周分别行MRI平扫及增强证实模型肿瘤生长。统计学方法采用Fisher精确检验。结果:36只大鼠,16只第一次种植成功,20只种植失败,改变条件再次种植,2只死于麻醉意外,18只成功。留置时间3min与5min,其0.01<P<0.05,留置时间对于肿瘤种植成功二者差异具有统计学意义,留置5min肿瘤成功率高于3min;留置时间5min与10min,其P<0.01,留置5min与10min两种不同的留置时间对于肿瘤种植成功二者差异具有显著的统计学意义,留置10min,肿瘤成功率明显高于5min。结论:微量注射器的留置时间与肿瘤种植成功率有关,随着留置时间的延长,肿瘤种植成功率也会提高。

异甘草素对大鼠C6胶质瘤细胞增殖和分化的影响

目的研究异甘草素对大鼠C6胶质瘤细胞增殖和分化的影响。方法采用磺酰罗丹明B(SRB)比色法和克隆形成实验考察异甘草素对C6胶质瘤细胞增殖抑制作用;Giemsa染色观察细胞形态学变化;半定量RT-PCR、Western blot鉴定细胞分化相关基因及蛋白表达水平。结果大鼠C6胶质瘤细胞经异甘草素诱导后,以浓度依赖性抑制细胞增殖(P<0.01);光镜观察到异甘草素诱导前的C6胶质瘤细胞呈两极长梭形或多角形,胞质多,胞突短;而诱导后细胞突起数目不同程度增多,细胞形态变细变长。诱导前克隆形成出现早,数量多,直径大,克隆形成率高;异甘草素处理组克隆形成率降低,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。RT-PCR、Western blot结果显示,异甘草素诱导后C6细胞GFAP mRNA和蛋白表达均明显上升(P<0.01)。结论异甘草素能抑制大鼠C6胶质瘤细胞的增殖,并能诱导C6细胞分化。

悬浮法培养C6胶质瘤细胞系和该细胞系中脑肿瘤干细胞的分离

目的研究应用无血清培养基悬浮法培养C6胶质瘤细胞系的方法;并分离该细胞系中的脑肿瘤干细胞,观察其生长方式和分化特征。方法应用培养大鼠神经干细胞的培养基和培养方法,在无血清培养基中采用悬浮法培养大鼠C6胶质瘤细胞系;再将分离获得的悬浮生长的脑肿瘤干细胞接种于含血清培养基,观察其分化;应用有限稀释和单克隆形成实验确定该细胞系中肿瘤干细胞的比例。结果C6胶质瘤细胞系中有约1.18%的肿瘤细胞在无血清培养基中能够存活、增殖,形成自由漂浮的细胞球;这种细胞球具有人脑肿瘤干细胞球的特征,并可连续传代,若重新接种于含血清培养基中可重新贴壁分化,贴壁分化后细胞形态与直接在含血清培养基中培养的C6胶质瘤细胞系无明显差别。结论C6大鼠胶质瘤细胞系中含有比例较低的、具有增殖和分化能力脑肿瘤干细胞(约1.18%),该细胞系可在含生长因子的无血清培养基中悬浮生长,并维持细胞系。

立体定向建立大鼠C6脑胶质瘤模型

目的 建立大鼠C6脑胶质瘤模型 ,采用影像学方法观察肿瘤的生长规律和时间窗 ,为肿瘤的疗效检测提供可行的方法。方法 16只SD大鼠随机分成两组 ,每组 8只 ,用立体定向技术将C6细胞接种在大鼠的右侧尾状核 ,接种细胞量分别为 1 0× 10 6 个 (第 1组 )和 1 5× 10 6 个 (第 2组 )。观察大鼠生存期 ,测量肿瘤的最大径 ,计算肿瘤体积 ,计算观察时间窗。结果 两组大鼠皆成功接种肿瘤 ,成功率为10 0 %。第 1组大鼠平均生存期为 ( 2 3 5 0± 3 93 )d ,明显大于第 2组 ( 17 75± 2 3 8)d(P <0 0 1)。肿瘤最大直径与瘤龄呈直线关系 ,体积与瘤龄呈指数关系。观察时间窗第 1组为 ( 12 0 0± 3 5 1)d ,大于第 2组 ( 8 88± 1 73 )d(P <0 0 5 )。结论 立体定向脑内定量注射C6细胞制作大鼠脑胶质瘤模型成功率高 ,肿瘤最大径和体积增长有规律性。

ANGPTL4基因对大鼠胶质瘤细胞系C6血管通道形成的影响

目的 研究ANGPTL4基因对C6细胞形成血管通道的影响。方法 将ANGPTL4蛋白进行原核表达 ,用MTT试验观察ANGPTL4对C6细胞增殖的影响 ,用体外迁移试验 ,体外侵袭试验和体外管状形成试验等体外血管新生研究模型观察ANGPTL4基因对C6细胞形成血管通道的影响。结果 ANGPTL4对C6细胞的增殖没有显著性作用 ;ANGPTL4基因可促进C6细胞的体外迁移 ,侵袭和管状形成。结论 ANGPTL4能够促进C6细胞形成血管通道。

C6脑胶质瘤动物模型肿瘤细胞的超微结构观察

本文对C6脑胶质瘤动物模型肿瘤标本进行了超微结构观察,以判定肿瘤生长方式及恶性程度。取成年雄性Wistar大鼠作为实验对象,采用立体定向方法将对数生长期的C6胶质瘤细胞悬液(1×106ml)注入靶点。2～3周后手术切除肿瘤并进行电镜标本制备,H600A型透射电镜观察。观察结果显示:肿瘤中心区有两种肿瘤细胞核型;不规则核型大于55%,细胞浆结构发育较差,核浆比例明显大于1。肿瘤与正常脑组织无明显边界,亦无包膜,呈浸润型生长,病理分级约有Grade～(WHO1993)。我们认为:C6细胞脑胶质瘤动物模型超微结构的观察,对进一步研究人类脑胶质瘤的恶性程度。

脑灵汤对阿尔茨海默病大鼠模型行为学及海马CA3区小胶质细胞和IL-6表达的影响(英文)

目的:探讨脑灵汤对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠CA3区小胶质细胞和IL-6表达的影响,初步揭示脑灵汤治疗AD的机制。方法:选用纯系SD大鼠(雌雄各半)30只随机分为5组,每组6只,分别为正常组、假手术组、模型组、西药(脑复康)组、中药(脑灵汤)组。采用Aβ1-42双侧海马注射建立AD模型,造模后喂养28天,采用Y-水迷宫和Morris水迷宫进行行为学检测,免疫组织化学法检测小胶质细胞特异性标记物OX-42和IL-6在大鼠海马CA3区组织神经元中的表达。结果:Morris水迷宫实验显示:与正常组比较,模型组隐匿平台搜索实验中逃避潜伏期延长(P<0.05),探索实验中平均穿越次数减少(P<0.05);Y-迷宫实验显示:模型组躲避电刺激所需的次数增加(P<0.05),脑灵汤可以明显改善模型鼠上述指标(P<0.05);免疫组织化学结果显示:与模型组相比,脑灵汤组大鼠海马CA3区的OX-42和IL-6表达明显下降(P<0.05)。结论:脑灵汤能明显改善AD模型大鼠学习记忆能力,抑制模型大鼠CA3区小胶质细胞活性,减少IL-6的表达,这可能是脑灵汤治疗AD的部分机制。

苦参碱对脑胶质瘤C6细胞系的诱导分化

目的 观察苦参碱对脑胶质瘤C6细胞株体外增殖的影响。方法 应用甲基噻唑基四唑(MTT)比色法检测苦参碱对C6细胞增殖的抑制作用 ,采用流式细胞仪观察苦参碱对C6细胞周期的影响 ,以免疫组化SABC染色法检测胶质纤维酸性蛋白 (glialfibrillaryacidicprotein ,GFAP)表达 ,用以了解胶质瘤细胞分化的情况。结果 苦参碱对C6细胞增殖抑制作用明显 ,在终浓度为 0 .5mg·ml-1时 ,对C6增殖的抑制率达 (2 4 .4± 0 .9) %。经流式细胞仪分析显示 ,用 0 .5mg·ml-1苦参碱培养 72h ,C6细胞出现了明显的增殖抑制现象。免疫组化SABC染色法可见C6用药组较对照组GFAP表达明显增强。结论 苦参碱对鼠胶质瘤C6细胞系的增殖有明显的抑制作用 ,发生了诱导分化现象。

核糖核酸酶抑制因子对H_2O_2损伤的大鼠神经胶质瘤细胞系C6的影响

核糖核酸酶抑制因子 (ribonucleaseinhibitor,RI)是广泛存在于哺乳动物细胞浆中的一种酸性糖蛋白 .为了进一步了解RI的功能 ,根据RI分子结构富含巯基的特点 ,研究了RI对过氧化氢(H2 O2 )损伤的大鼠神经胶质瘤细胞 (C6 )的影响 .用不同浓度的H2 O2 分别作用于转染有RIcDNA并且RI过表达的C6细胞和正常C6细胞 ,对比损伤前后 2者的细胞存活率、LDH漏出量、细胞内GSH和MDA含量差别 ,以及细胞内抗氧化酶类GPX、CAT和GST活性的差别 .结果表明 ,与正常C6细胞相比 ,RI过表达的C6细胞在H2 O2 作用下存活率高 ,LDH漏出量、MDA含量明显减少 ,而细胞内GSH较多 ;RI过表达的C6细胞在损伤前后均表现出更强的CAT和GST活性 .提示RI具有抗氧化功能 ,能够减轻H2 O2 所致的细胞过氧化损伤 .