大鼠阴道黏膜上皮细胞原代分离及培养方法的改进

目的:研究大鼠阴道黏膜上皮细胞(RVECs)体外培养的影响因素,探索建立RVECs稳定的体外分离培养方法。方法:比较大鼠动情周期、DispaseⅡ配制方法、Dis-paseⅡ浓度、胰酶消化法及培养基对RVECs体外培养的影响。结果:动情前期的大鼠阴道上皮层更厚,消化后可获得更多RVECs;上皮层用D-KSFM配制的DispaseⅡ消化后能很好的贴壁,用PBS配制的DispaseⅡ消化后细胞贴壁欠佳;1.2U/ml DispaseⅡ的分离效果优于0.6U/ml DispaseⅡ;三步胰酶消化法比一步胰酶消化法可获得更多的贴壁细胞;RVECs在含血清培养基中生长快,但易受成纤维细胞污染。结论:动情前期的大鼠阴道组织依次经D-KSFM配制的1.2U/ml DispaseⅡ及三步胰酶消化后,在不含血清的D-KS-FM中培养,可获得更多的RVECs,细胞显示上皮细胞特征。

苦黄栓的制备与刺激性评价

[目的]制备中药妇科栓剂苦黄栓,并进行初步刺激性评价。[方法]以融变时限为指标,筛选了水溶性基质与油溶性基质,并进行苦黄栓儿茶的薄层色谱鉴别。以健康雌性SD大鼠为模型动物,考察SUPPOCIRE NAS50基质苦黄栓的大鼠阴道黏膜刺激性。[结果] SUPPOCIRE基质栓剂偏硬,融变时限符合药典规定。S40基质栓剂与PEG1500基质栓剂的融变时限偏长。综合考虑,采用SUPPOCIRE NAS50作为苦黄栓的基质;在与对照品色谱和对照药材色谱相应的位置上,供试品色谱显相同颜色的荧光斑点,阴性无干扰,大鼠阴道解剖前后直观结果与病理切片分析结果表明,SUPPOCIRE NAS50基质苦黄栓给药组与空白组间无显著性差异。[结论]选择SUPPOCIRE NAS50作为苦黄栓的基质;SUPPOCIRE NAS50基质苦黄栓对大鼠阴道黏膜无刺激,安全性好,可用于阴道炎的治疗。