大鼠Walker-256、小鼠H22肿瘤模型建立及应用

目的研究大鼠Walker-256及小鼠H22两种肿瘤模型的成瘤性和稳定性,并探讨其应用。方法建立大鼠Walker-256及小鼠H22两种皮下肿瘤模型,1周后观察其出瘤率和肿瘤大小,观察并绘制肿瘤生长曲线,实验结束后进行病理学检测。结果1周后两种鼠肿瘤模型出瘤率分别为98.57%、97.14%(P>0.05);肿瘤直径分别为(9.61±2.90)mm、(8.25±1.89)mm(P>0.05);大鼠Walker-256模型有肿瘤自然消退现象,而小鼠H22模型肿瘤生长稳定且少数出现肺转移;病理学检测支持上述现象。结论小鼠H22皮下肿瘤模型较大鼠Walker-256模型稳定,可用于抗肿瘤疗效评价。

不平衡氨基酸疗法及化疗对大鼠Walker-256癌肉瘤增殖的影响

目的 探索低缬氨酸高亮氨酸不平衡氨基酸TPN及 5 FU化疗对大鼠Walker 2 5 6癌肉瘤增殖的影响。方法 荷Walk er 2 5 6癌肉瘤的大鼠 ,随机分为 4组 ,A组 (平衡氨基酸TPN组 ) ,B组 (低缬氨酸高亮氨酸不平衡氨基酸TPN组 ) ,C组 (平衡氨基酸TPN +化疗组 ) ,D组 (低缬氨酸高亮氨酸不平衡氨基酸TPN +化疗组 ) ;以大鼠体重 ,血清白蛋白、前白蛋白 ,肝脏病理 ,肿瘤重量 ,及肿瘤细胞周期作为观察指标。结果 处理前后 ,A组和B组大鼠体重均有增加 (P <0 .0 5 ) ;A组和B组的血清白蛋白、前白蛋白 ,脂肪肝的发生率无差异 (P >0 .0 5 ) ;A ,B ,C ,D组的瘤重依次下降 (P <0 .0 5 ) ,G0 /G1期比例依次增高 (P<0 .0 5 ) ,S期比例依次下降 (P <0 .0 5 )。结论 低缬氨酸高亮氨酸TPN能够改善荷瘤大鼠营养状况 ,抑制肿瘤生长 ,并能够加强 5 FU的化疗作用 ,未发现低蛋白血症。

大鼠Walker-256皮下移植瘤模型的建立及其超声评价

目的探讨建立大鼠Walker-256皮下移植瘤模型两种方法的有效性及三维超声在监测肿瘤生长特性中的价值。方法24只SD大鼠随机分两组,每组12只,分别采用浓缩腹水注射法和肿瘤组织块皮下包埋法建立皮下肿瘤模型,三维容积探头观察成瘤率、肿块大小及声像图特征。三维能量多普勒显像(3D-PDI)反映两组移植瘤血管指数(VI)的变化。结果浓缩腹水注射组接种成功率100%,高于组织块皮下包埋组(75%,P<0.05),且肿瘤生长速度快于组织块皮下包埋组。浓缩腹水注射组和组织块皮下包埋组建立的移植瘤血管指数分别于16d、20d时达峰值。结论两种方法均可有效地建立皮下移植瘤模型,浓缩腹水注射法成瘤率高于组织块皮下包埋法。三维超声可作为监测肿瘤体积及血流的有效手段。

去蛋氨酸肠内营养联合阿霉素对大鼠Walker-256癌肉瘤同步化疗的研究

目的探讨蛋氨酸缺乏对阿霉素抗肿瘤效应的协同作用。方法SD大鼠空肠造瘘,皮下接种Walker-256癌肉瘤,分A组(平衡氨基酸+生理盐水组)、B组(平衡氨基酸+阿霉素组)、C组(去蛋氨酸+阿霉素组)3组,测定各组治疗后肿瘤细胞周期、细胞核DNA含量、荷瘤鼠生存时间等。结果C组G0/G1细胞百分数犤(68.5±5.3)%犦高于A、B组犤(50.6±6.0)%及(51.9±5.6)%犦,S期和G2M期百分数及增殖指数明显降低;B、C组抑瘤率分别为28.8%及42.4%(P<0.05)。C组荷瘤大鼠生存时间明显延长。结论蛋氨酸缺乏可使肿瘤细胞阻滞于晚S/G2期,增强阿霉素的抗肿瘤效应。

磁感应热疗联合免疫佐剂对Wistar大鼠Walker-256肿瘤的异位效应的研究

目的观察不同加热温度及联合免疫佐剂对大鼠Walker-256肿瘤生长及CD4+T细胞和CD8+T细胞表达的影响。方法建立大鼠双侧腋下皮下移植Walker-256肿瘤模型,接种后7d随机分成6组:Ⅰ组(单纯植入热籽对照);Ⅱ组(42～46℃单纯热疗);Ⅲ组(42～46℃热疗+免疫佐剂);Ⅳ组(50～55℃单纯热疗);Ⅴ组(50～55℃热疗+免疫佐剂);Ⅵ组(单纯免疫佐剂对照)。每3d测双侧肿瘤大小的变化,治疗后14d取肿瘤组织行HE染色,免疫组织化学方法检测肿瘤组织CD8+T细胞的表达,免疫荧光法检测CD4+T细胞的表达。结果热疗后14d,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组两侧肿瘤体积均有不同程度缩小,Ⅴ组治疗侧及对侧肿瘤体积分别缩小34.6%、60.1%,并有3只大鼠对侧肿瘤完全消退,与Ⅰ组、Ⅵ组2个对照组比较,有显著性差异(q=4.552,P<0.05;q=4.400,P<0.05)。组织学检查肿瘤细胞呈凋亡、坏死性改变,伴大量淋巴细胞浸润,V组还可见大量吞噬细胞,对侧未见明显坏死肿瘤细胞,淋巴细胞浸润较明显。免疫学检查加热后CD4+T细胞和CD8+T细胞较对照组(Ⅰ、Ⅵ组)明显增多,差异具有显著性(P<0.05),其中均以V组表达最多(P<0.05)。结论50～55℃瘤内局部加热不仅能抑制乳腺癌生长,还可增强机体的细胞免疫功能并具有异位效应,免疫佐剂能增强其抑瘤作用及异位效应。

RI与TACE联合栓塞对大鼠Walker-256肝移植模型肿瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的研究核糖核酸酶抑制因子(RI)与TACE联合栓塞Walker-256肝移植模型对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法将60只Walker-256荷瘤大鼠于移植后第14天随机分成肝动脉灌注化疗栓塞组(TACE组)、RI与TACE联合栓塞组和对照组,每组20只。各组分别经肝动脉注入:超液态碘油0.5 ml加5-Fu 20 mg/kg;RI 200单位加5-Fu 20mg/kg加超液态碘油0.5 ml;生理盐水0.5 ml。于术后第7天用TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡率,用免疫组化法检测肿瘤细胞PCNA增殖率、平均染色强度。结果PCNA增殖率和平均染色强度TACE组为44.98±7.92,168741.41±25410.37;联合栓塞组为45.02±8.42,168539.41±19675.98;对照组为35.43±6.75,137313.01±17380.59。TACE组、联合栓塞组PCNA增殖率和染色强度显著高于对照组(P<0.01),而联合栓塞组与TACE组差异无统计学意义(P>0.05)。肿瘤细胞凋亡率TACE组为16.88±2.48;联合栓塞组为23.50±5.33;对照组为11.70±2.76,TACE组、联合栓塞组显著高于对照组(P<0.01),联合栓塞组显著高于TACE组(P<0.01)。结论RI与TACE联合栓塞与TACE相比可显著提高肿瘤细胞的凋亡率。

大鼠Walker-256移植性肺癌模型的建立

目的建立大鼠Walker-256移植性肺癌模型,探讨应用Walker-256癌细胞建立大鼠移植性肺癌模型的可行性。方法 SD大鼠经尾静脉注射高、中、低三种不同细胞浓度的大鼠Walker-256细胞悬液,观察大鼠的生存时间、体重变化、移植性肺癌模型的成模率,其他脏器转移情况及病理形态学变化情况。结果注射癌细胞后14 d,模型组大鼠均出现体重下降、摄食减少等体征,与正常对照组比较体重明显降低(P<0.05);注射癌细胞后21d,高浓度组大鼠开始出现死亡;高、中、低三组不同细胞浓度的移植性肺癌成模率分别为100%、80%、30%,模型组大鼠肝脏系数和肺脏系数均高于正常对照组。病理结果显示,模型组大鼠肺部可见明显的癌症病灶,而其他脏器未发现明显异常。结论注射高浓度Walker256癌细胞(3×105个细胞/只)能成功复制移植性肺癌模型,为移植性肺癌模型的建立和应用提供实验依据。

树突状细胞疫苗对大鼠Walker-256肿瘤抑制作用

目的建立Walker-256大鼠种植瘤模型,探讨树突状细胞(DC)疫苗抑制肿瘤生长的机制。方法从大鼠骨髓细胞中利用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素4(IL-4)在体外定向诱导分化出DC,液氮冻融法提取Walker-256肿瘤细胞抗原后刺激DC制备负载抗原的DC疫苗。ELISA法检测培养液中IL-12的浓度。雌性SD大鼠,皮下注射Walker-256肿瘤细胞制备种植瘤模型,成瘤大鼠按照体重配对,分为肿瘤治疗组和肿瘤对照组。10只体重分别相对应的雌性SD大鼠作为正常对照组。肿瘤治疗组大鼠皮下注射负载抗原的DC细胞悬液,肿瘤对照组和正常对照组大鼠皮下注射等量PBS。分别检测大鼠血IL-12浓度和肿瘤最大径。结果得到大量具备典型光镜和电镜形态特征的DC,表达大鼠DC特异性标志OX62、OX6。负载抗原前后DC产生IL-12的水平存在明显差异(P<0.05)。肿瘤治疗组大鼠肿瘤最大径显著小于肿瘤对照组(P<0.01)。肿瘤对照组与正常对照组比较,IL-12明显下降(P<0.05),肿瘤治疗组与肿瘤对照组比较,IL-12明显上升(P<0.01)。肿瘤治疗组的肿瘤最大径与IL-12呈显著负相关(r=-0.826,P<0.01)。结论增强Th1介导的抗肿瘤细胞免疫可能是树突状细胞疫苗抑制肿瘤生长的机制之一。

核糖核酸酶抑制因子联合化疗栓塞治疗大鼠Walker-256移植性肝癌的实验研究

目的 评价核糖核酸酶抑制因子（RI）联合化疗栓塞（TACE）治疗大鼠Walker-256移植性肝癌的疗效。材料与方法45只Walker-256荷瘤大鼠于移植后第14d随机分成RI＋碘油栓塞组（RI栓塞组，10只）；5-氟尿嘧啶（5-Fu）＋碘油栓塞组（TACE组，12只）；RI＋5-Fu＋碘油栓塞组（联合栓塞组，13只）；对照组（生理盐水组，10只）。各组分别经肝动脉左支注入栓塞剂和药物，RI用量为200U，超液态碘油为0．4ml，5-Fu为20mg／kg体重，生理盐水为0．4ml。用MR分别于栓塞后第7d、第13d、第18d测量肿瘤横径并计算体积。于术后第18d检测肝转移结节数。观察RI的系统毒性。结果 栓塞后7～18d各治疗组肿瘤体积均明显小于对照组（P〈0．05），以联合栓塞组体积最小。在栓塞后第13d，联合栓塞组肿瘤的体积组明显小于RI栓塞组（P〈0．05）；第18d TACE组亦明显小于RI栓塞组（P〈0．05）。肝脏转移结节数各治疗组明显少于对照组（P〈0．05），联合栓塞组明显少于RI栓塞组和TACE组（P〈0．05）。RI无明显系统毒性。结论 联合栓塞与单纯TACE相比，可明显抑制大鼠Walker-256移植性肝癌的生长和减少肝转移，提高了TACE的疗效。经肝动脉给药后，RI对Wistar大鼠无明显系统毒性。

大鼠Walker-256移植性睾丸恶性肿瘤模型的建立及动态观察

目的研究大鼠Walker-256细胞移植性睾丸恶性肿瘤的成模性及稳定性。方法取健康SD大鼠25只,采用睾丸注射方法,直视下将Walker-256肿瘤细胞悬液注射在大鼠睾丸内,分别在接种肿瘤后7,14,21,28,35d行彩超检查,检查后麻醉处死,每次5只,行大体解剖以及病理学检查,以此观察移植性睾丸恶性肿瘤模型的成模率、肿块大小、其他脏器转移情况及声像图特点。结果大鼠睾丸恶性肿瘤均种植成功,于接种肿瘤组织21-28d后,大鼠开始出现轻度体重减轻、纳差以及腹水等体征,35d后大鼠开始逐渐出现死亡;超声显示移植14d睾丸见低回声包块,21d睾丸内见肿瘤边缘血供丰富。病理组织学可见肿瘤细胞呈巢状或条索状弥漫分布,形态不规则,细胞异型性大,曲精小管等正常组织结构破坏、坏死。结论采用Walker-256能成功建立移植性睾丸恶性肿瘤模型,成瘤率高,该肿瘤模型的生物学行为与临床病程相似,可用于抗肿瘤疗效评价。

超声空化联合恩度抑制大鼠Walker-256肿瘤血管新生

目的观察微泡增强超声空化毁损肿瘤微血管联合恩度对肿瘤血管新生的抑制作用。方法对健康雄性SD大鼠40只于单侧大腿内侧皮下种植Walker-256肿瘤,随机均分为超声空化联合恩度组(A组)、恩度组(B组)、超声空化组(C组)和超声假照组(D组),每组10只,每天1次、连续给予相应干预3天;干预前、干预后1天和4天分别行二维超声及超声造影(CEUS)检查。之后获取肿瘤组织,行血管内皮生长因子A(VEGFA)免疫组织化学染色,测定微血管密度(MVD)。比较各组造影峰值强度(PI)、曲线下面积(AUC)、肿瘤体积及MVD。结果干预后1天,CEUS中A组PI和AUC值明显低于其余各组(P均<0.05),B组和C组则低于D组(P均<0.05);干预后4天,各组中A组PI和AUC值仍最低(P均<0.05),B组仍显著低于D组(P<0.05)。干预后1天,A组肿瘤体积(1.94±0.64)cm^3最低,B组、C组均低于D组(P均<0.05)。干预后4天,A组肿瘤体积(5.25±1.74)cm^3仍为各组中最低(P均<0.05)。各组MVD存在差异(F=30.121,P<0.001)。A组(18.33±3.10)、B组(24.17±2.16)MVD明显低于C组(30.43±4.17)和D组(31.57±1.74)(P均<0.05)。结论微泡超声空化联合恩度治疗可显著减少肿瘤血流灌注,从而抑制大鼠Walker-256肿瘤新生血管生成及肿瘤生长。

大鼠Walker-256移植瘤Cyclin E表达水平与其对化疗药物敏感性的关系

目的:探究大鼠Walker-256移植瘤中Cyclin E的表达水平同荷瘤大鼠接受化疗治疗后生存率的关系。方法:建立大鼠Walker-256移植瘤模型,利用随机表按照安全随机法随机分为4组,对照组、阿霉素组、紫杉醇组、丝裂霉素组。分别以生理盐水、阿霉素组、紫杉醇组、丝裂霉素予以治疗。绘制各组大鼠的生存曲线、并检测各组大鼠移植瘤内Cyclin E的表达水平。以方差分析统计各组之间Cyclin E表达水平的差异,各亚组间荷瘤大鼠的生存率以Wilcoxon法及Kaplan-Meier法进行生存分析。结果:在各组之间,Cyclin E的表达水平无明显差异(P=0.875);在各组中,移植瘤内Cyclin E表达水平高的大鼠生存率较低,反之移植瘤内Cyclin E表达水平低的大鼠生存率较高,除丝裂霉素组外(P=1.000),这种差异有显著的统计学意义(对照组P=0.016,阿霉素组P=0.009,紫杉醇组P=0.043)。结论:CyclinE表达水平的高低同大鼠Walker-256移植瘤对化疗治疗的敏感性有关,对乳腺肿瘤患者进行CyclinE的检测或可有助于预测患者的化疗效果。

应用Walker-256细胞建立大鼠骨癌痛模型

目的:应用Walker-256细胞建立大鼠骨癌痛模型。方法:将4×104个W256癌细胞注入SD大鼠胫骨上段骨髓腔内,利用大鼠热板法和足跖加压法分别测量热刺激和机械刺激痛阈的变化,X线摄片进行放射学评估骨质破坏程度,同时,组织切片HE染色观察肿瘤生长和骨结构的破坏情况。结果:造模动物在12天左右开始出现热刺激和机械刺激痛阈明显下降(痛觉过敏),并呈渐进性发展;胫骨X线摄片显示14天即有明显的骨破坏,第21天时出现病理性骨折;组织切片显示骨髓腔内肿瘤生长活跃,向外侵蚀破坏骨皮质。结论:从疼痛行为学、放射学、组织学等方面的研究结果显示,应用Walker-256细胞成功建立了大鼠骨癌痛模型。

二鳖散对大鼠Walker-256肝癌肿瘤生长及血清VEGF,endostatin表达的影响

目的:探讨二鳖散对大鼠Walker-256肝癌肿瘤生长及血清血管内皮生长因子(VEGF)、内皮抑素(Endostatin)表达的影响,从抗血管生成角度探讨二鳖散的抗癌作用。方法:采用Walker-256癌肉瘤腹水接种Wistar大鼠制作肝癌模型,随机分为二鳖散低、中、高剂量(1.25,2.5,5g·kg-1·d-1)组、5-氟脲嘧啶75mg·kg-1组及模型组。于造模的第9天开始灌胃,每日1次,共21d。检测各组大鼠瘤重、肿瘤抑制率,ELISA法检测各组大鼠血清VEGF,endostatin的表达,计算比较各组VEGF/endostatin的比值。结果:二鳖散中、高剂量组和5-氟脲嘧啶组大鼠瘤重减轻,其血清VEGF表达量降低,Endostatin表达量升高,VEGF/endostatin比值降低,与模型组比较,差异有显著性(P<0.05或P<0.01)。结论:二鳖散能抑制大鼠Walker-256肝癌的生长,其机制可能与调控VEGF/endostatin的失衡而抑制肿瘤血管生成有关。

内皮抑素基因联合放射治疗对大鼠Walker-256细胞种植性肿瘤的抑制作用

目的探讨鼠源性内皮抑素(endostatin)基因联合放射治疗对大鼠种植性肿瘤的抑制效应。方法制作大鼠乳腺癌Walker-256细胞种植性肿瘤的动物模型,通过检测肿瘤重量和肿瘤生长速率观察内皮抑素基因治疗联合放疗的抑瘤效应。体外采用Western blot检测构建pCMV-endostatin质粒转染的Walker-256细胞endostatin蛋白表达,体内采用RT-PCR观察各组endostatinmRNA表达。结果基因治疗组和基因治疗联合放射治疗组均可见到endostatin mRNA及其蛋白明显表达,但两组间表达无统计学意义;基因与放射联合组肿瘤的生长速率和重量均明显小于单纯基因治疗和放疗组(P<0.01),后两组其肿瘤的生长速率和重量明显低于对照组(P<0.01),但二者之间差异无统计学意义。结论pCMV-endostatin在Walker-256细胞内有明显表达endostatin mRNA及其蛋白;endostatin基因治疗有明显的抑瘤作用,但endostatin基因联合放疗的抑瘤效应更明显,促进放疗的抑瘤效果。

大鼠Walker-256移植性卵巢癌模型的建立

目的建立大鼠Walker-256卵巢癌模型,观察分析该肿瘤的生长特性,探讨肿瘤模型超声及病理学表现。方法雌性SD大鼠24只,经腹部直视下将Walker-256肿瘤组织块种植在大鼠卵巢内,观察大鼠一般情况、卵巢癌模型的成模率、其他脏器转移情况及超声影像和病理形态学变化情况。结果大鼠卵巢癌成模率为100%,接种肿瘤组织14 d后,大鼠出现体重轻度增加、食欲差等体征,28 d后动物开始逐渐出现死亡;超声检查卵巢内见囊实混合回声,HE病理结果显示,卵巢内可见明显肿瘤病灶。结论采用Walker-256可成功建立大鼠卵巢癌模型,成瘤率高,该肿瘤模型的生物学行为与临床病程相似,为研究卵巢癌的治疗提供理想的动物模型。

不同浓度Walker-256癌性腹水腹腔接种对大鼠免疫功能的影响

目的观察不同浓度肿瘤腹水接种后,Wistar大鼠腹水产生的情况与其本身免疫功能的关系。方法24只大鼠被接种不同浓度的Walker-256肿瘤腹水0.3 ml,另外12只大鼠腹腔注入生理盐水0.3 ml作为对照组,8d后观察各组大鼠产生腹水的数量及细胞免疫及体液免疫功能各指标。结果高浓度腹水接种后产生腹水的大鼠只数少于稀释后接种的大鼠只数,各组免疫指标均具有统计学意义,P<0.05,其中高浓度腹水接种组免疫功能最好,稀释后接种的大鼠免疫功能最差。结论不适当地增加含肿瘤腹水的浓度并不能增加产生腹水的可能性,相反确有可能激活大鼠本身的细胞和免疫功能消灭腹水内肿瘤细胞,使得产生腹水的可能性降低。

Walker-256大鼠移植性肝癌模型探讨

目的 Walker-256细胞质肝内接种制备大鼠移植性肝癌模型。方法取体重150～180g雄性Spraque-Dawley(SD)大鼠72只,随机分为实验组和对照组:实验组(n=60)肝内接种Walker-256细胞质;对照组(n=12)肝包膜下注射相同剂量的生理盐水,1周后观察肿瘤大小、并进行病理学检测。结果实验组大鼠共有15只大鼠死亡,而移植瘤肝癌模型出瘤率为100%(45/45),大多数大鼠伴有肺以及腹腔转移,并且均经过病理学证实。结论 Walker-256细胞质肝内接种可以成功建立适宜临床研究的肝癌模型。

Walker-256腹水传代鼠的免疫功能研究

目的为了探讨患者免疫功能与肿瘤诱发腹水的相关性,本研究分析大鼠接种肿瘤后腹水产生组、未产生组、正常对照组之间的免疫功能差别。方法选择了接种过程中未产生腹水的大鼠,同期产生腹水的大鼠及未接种的正常大鼠各15只,观察大鼠外周血T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+的数量值及Ig免疫球蛋白IgG、IgM、IgA功能。结果三组之间的CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+均差异显著(P<0.05),其中未产生腹水组的CD3+、CD4+及CD4+/CD8+值大于正常组;产生腹水组CD3+、CD4+及CD4+/CD8+的数值小于正常组,但CD8+大于正常组的数值。免疫球蛋白IgG、IgM、IgA含量三组未见差异,P>0.05。结论腹腔接种Walker-256肿瘤细胞未产生腹水的细胞免疫被活,体液免疫则腹水生成未产生明显的影响,不同个体之间免疫功能的强弱是一种影响腹水产生的重要因素之一。