miR-148a靶向S1PR1抑制弥漫大B细胞淋巴瘤细胞增殖和迁移机制研究

目的研究miR-148a靶向调控1型1-磷酸鞘氨醇受体(S1PR1)抑制弥漫大B细胞淋巴瘤细胞(OCI-LY19)增殖和迁移的机制。方法miR-148a mimic对OCI-LY19细胞进行转染,实验分为对照组、miR-148a阴性对照组、miR-148a mimic组,实时荧光定量法测定转染后OCI-LY19细胞中miR-148a表达水平,蛋白印迹法(WB)测定S1PR1、ERK蛋白磷酸化水平、STAT3蛋白磷酸化水平、PDGF-A、PDGF-B、BcL-XL、McL-1表达水平,MTT法测定转染后OCI-LY19细胞活性,划痕实验测定OCI-LY19细胞体外迁移能力。TargetScan数据库预测miR-148a的靶基因并采用荧光素酶报告实验进行验证。结果与HMy2.CIR细胞组相比,对照组OCI-LY19细胞miR-148a表达水平显著降低(P<0.05),S1PR1蛋白表达水平、ERK蛋白磷酸化水平、STAT3蛋白磷酸化水平明显升高(P<0.05)。与对照组、miR-148a阴性对照组相比,miR-148a mimic组OCI-LY19细胞miR-148a、S1PR1、ERK蛋白磷酸化水平、STAT3蛋白磷酸化水平、PDGF-A、PDGF-B、BcL-XL、McL-1表达水平、细胞增殖、迁移能力明显降低(P<0.05)。TargetScan数据库预测显示S1PR1是miR-148a靶基因,双荧光素酶实验证实S1PR1是miR-148a作用靶点。结论上调miR-148a可下调S1PR1蛋白表达,可能通过调控ERK/STAT3信号通路抑制OCI-LY19细胞增殖和迁移。

lncRNA-MIAT通过靶向调控miR-584/EZH2轴促进DLBCL细胞的自噬

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)-MIAT通过调控微小RNA(miR)-584/ZESTE同源物增强子2(EZH2)轴对弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞自噬的影响。方法将DLBCL细胞系Raji分为siMIAT组[lncRNA-MIAT的小干扰RNA(siRNA)构建沉默组]、沉默阴性对照组(siNC组)、miR-584的模拟物组(mimic组)、模拟物阴性对照组(mimic-NC组)。将siMIAT组的Raji继续分为miR-584的inhibitor组(inhibitor组)、inhibitor的阴性对照组(inhibitor-NC组)、EZH2过表达组(pcDNA-EZH2组)以及过表达空载体组(pcDNA-null组)。用实时定量PCR法(qRT-PCR)检测lncRNA-MIAT和miR-584的表达,用荧光原位杂交(FISH)实验检测lncRNA-MIAT在Raji中的定位。用Western blot法检测EZH2和细胞自噬标志物LC3-I、LC3-II、Atg5、Beclin-1和p62的表达。CCK-8法检测细胞的增殖活性。用双荧光素酶报告基因分析miR-584与EZH2的靶向调控作用以及miR-584与lncRNA-MIAT的靶向调控作用。结果与B淋巴细胞系MAO比,lncRNA-MIAT在Raji中高表达(P<0.05),lncRNA-MIAT的表达主要定位在MAO和Raji的细胞质中。沉默lncRNA-MIAT抑制细胞的增殖活性并抑制细胞的自噬(均P<0.05),沉默lncRNA-MIAT还抑制EZH2的表达并促进miR-584的表达(均P<0.05)。生信分析预测lncRNA-MIAT与miR-584具有多个结合位点,以及EZH2与miR-584也具有多个结合位点,双荧光素酶报告基因实验证实EZH2是miR-584的靶基因,且miR-584与lncRNA-MIAT也具有靶向调控作用。在沉默lncRNA-MIAT的细胞中,与inhibitor-NC组比,inhibitor组中细胞的增殖活性以及细胞的自噬均增加(P<0.05)。在沉默lncRNA-MIAT的细胞中,与pcDNA-null组比,pcDNA-EZH2组中细胞的增殖活性以及细胞的自噬均增加(P<0.05)。结论lncRNA-MIAT通过靶向调控miR-584/EZH2轴促进DLBCL的增殖,增强DLBCL细胞的自噬。

富于T细胞的大B细胞淋巴瘤

目的 探讨富于T细胞的大B细胞淋巴瘤的病理形态、预后和免疫组化的诊断意义。方法 对 3例富于T细胞的大B细胞淋巴瘤进行临床、组织病理和免疫组化分析 ,并复习文献。结果 3例中 2例女性 ,1例男性 ,平均年龄 5 2 7岁。 3例之肿瘤性大细胞L2 6阳性 ,背景小细胞UCHL 1阳性。富于T细胞的程度为 6 0 %～ 70 %。 1例见富于T细胞的大B细胞淋巴瘤与弥漫性大B细胞性淋巴瘤共存。

大B细胞淋巴瘤侵犯骨髓的细胞形态学特征

目的探讨4例大B细胞淋巴瘤(LBCL)侵犯患者的骨髓细胞形态学特征。方法检测并分析LBCL骨髓细胞学和骨髓组织病理学的形态学特点与免疫表型特征以作出诊断及鉴别诊断。结果 1例患者淋巴结病理学诊断4个月后发生骨髓浸润,结合病史诊断为LBCL。3例初诊患者根据骨髓细胞学特征作出提示性诊断,其中1例经骨髓活检、免疫组化、流式免疫表型检查确诊为LBCL,1例经淋巴结病理学和免疫组化确诊为LBCL,1例经骨髓病理学和免疫组化确诊为LBCL。结论LBCL细胞形态具有一定的特征,骨髓细胞学检出此类细胞可作提示性、方向性的诊断。

富于T淋巴细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤临床病理分析

目的探讨富于T淋巴细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤(THRLBCL)的组织病理学特征、免疫表型、临床特点。方法回顾性分析郑州大学第二附属医院病理科和河南省肿瘤医院病理科2013年5月至2018年9月确诊的12例THRLBCL患者的临床病理资料,并辅以免疫组化及原位杂交的方法进行分析。结果 12例THRLBCL患者年龄22~74岁,中位年龄58.5岁。男女比例7:5。临床首发症状主要为发热和淋巴结肿大。临床分期主要为Ⅲ~Ⅳ期(75%)。6例累及骨髓,5例累及脾脏,2例累及肝脏。病理检查组织均为淋巴结组织,镜下可见异形大B细胞散布于丰富的小T淋巴细胞和多少不一的组织细胞背景中。肿瘤性大B细胞CD20、BCL6、PAX5阳性,CD30、CD15阴性。背景细胞中的T淋巴细胞CD3、CD5阳性,组织细胞CD68、CD163阳性。EBER原位杂交示EB病毒阴性。结论 THRLBCL组织学形态背景富于T淋巴细胞和组织细胞,肿瘤细胞阳性表达CD20、BCL6、PAX5,阴性表达CD30、CD15,背景T淋巴细胞阳性表达CD3、CD5,组织细胞阳性表达CD68、CD163。该肿瘤应与结节型淋巴细胞为主型霍奇金淋巴瘤、经典型富于淋巴细胞型霍奇金淋巴瘤及T淋巴细胞淋巴瘤相鉴别。其发病与EB病毒感染无关。

高级别B细胞淋巴瘤26例临床分析

目的:探讨高级别B细胞淋巴瘤(HGBL)的临床特征、病理特征和治疗效果。方法:收集郑州大学第一附属医院2014年6月至2019年4月HGBL患者26例的临床资料,并进行回顾性分析。结果:26例HGBL患者中HGBL,非特指型(HGBL,NOS)患者12例,发病年龄55(24~72)岁,免疫组化MYC^+和BCL^2+双表达5例,GCB型10例,FISH检测结果显示MYC^+/BCL^2-/BCL6^-4例、MYC^-/BCL^2+3例、MYC^-/BCL6^+3例;HGBL伴有双打击/三打击患者(HGBL-DT)14例,发病年龄53(23~74)岁,MYC^+和BCL^2+双表达10例,GCB型13例,FISH检测结果显示MYC^+/BCL^2+/BCL6^-7例、MYC^+/BCL^2-/BCL6^+4例、MYC^+/BCL^2+/BCL6^+3例。12例HGBL,NOS患者PFS为14(2~58)个月,OS为15(3~58)个月,2例患者行CODOX-M/IVAC方案治疗均评价为CR。14例HGBL-DT患者PFS为7(2~26)个月,OS为11(4~48)个月。结论:HGBL患者生存期短,易侵犯结外器官,好发于GCB型,目前尚无标准的治疗方案。HGBL,NOS患者可考虑行CODOX-M/IVAC方案治疗。

结节性淋巴细胞为主型霍奇金淋巴瘤伴少见免疫结构变异1例并文献复习

目的观察结节性淋巴细胞为主型霍奇金淋巴瘤(nodular lymphocyte-predominant Hodgkin lymphoma,NLPHL)伴少见免疫结构变异即富于T细胞/组织细胞大B细胞淋巴瘤(T-cell/histiocyte-rich large B cell lymphoma,THRLBL)样转化的NLPHL的临床病理学特征,以提高对NLPHL免疫结构变异的认识、诊断及鉴别诊断。方法回顾性分析1例伴有THRLBL样转化的NLPHL的临床病理学特征及免疫表型。行EB病毒相关性和Ig/TCR基因克隆性检测,并复习相关文献。结果患者男性,58岁,腹股沟区无痛性淋巴结肿大。腹股沟淋巴结活检组织学观察可见淋巴结结构破坏,低倍镜下见浅染区和深染区交替分布,以浅染区为主,两种区域均可见散在分布的异型大细胞。免疫表型:大细胞一致强表达全B细胞标记(CD20、PAX5)、不表达CD30;CD21显示深染区内不规则滤泡树突细胞网结构,而浅染区内缺如。此外,两种结构背景细胞组成也存在明显差异。深染区背景细胞富于小B细胞,并可见PD1阳性细胞围绕大细胞形成花环样结构;浅染区背景细胞则以小T细胞和组织细胞为主,小B细胞基本缺如,且PD1阳性细胞量及强度均显著下降。EB病毒原位杂交检测两种结构内均无阳性细胞,Ig和TCR基因重排检测均未发现克隆性重排。结论伴有THRLBL样转化的NLPHL具有特殊形态学和免疫结构特征,易被误诊为原发性THRLBL,了解NLPHL免疫结构变异并结合细致全面的组织学观察和免疫组化检测有助于其诊断和鉴别诊断。

阿卡替尼增强利妥昔单抗生物类似药HLX01对非GCB型DLBCL耐药细胞株的杀伤效果

目的:探索阿卡替尼(Aca)联合利妥昔单抗(RTX)生物类似药HLX01增强对耐RTX的非生发中心B细胞样(非GCB型)弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞株杀伤效果的相关机制。方法:(1)采用RTX浓度梯度递增结合大剂量间断冲击的方法在体外构建耐RTX的人非GCB型DLBCL细胞株NU-DUL-1-R。流式细胞术检测RTX补体依赖的细胞毒性(CDC)及抗体依赖的细胞介导的细胞毒性(ADCC)作用下耐药株和亲本株的死亡率,并检测亲本株和耐药株的生长曲线、细胞周期及表面抗原CD20、CD55和CD59表达。(2)用浓度为2.5、5、10、20、40和80μmol/L的单药Aca分别处理NU-DUL-1-R细胞48 h后,采用CCK-8法检测细胞活力抑制率,并计算半数抑制浓度(IC50)。再以20%新鲜正常人血清为补体来源,羧基荧光素琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记肿瘤细胞后建立外周血单个核细胞与肿瘤细胞(效靶比为5∶1)体系,采用7-氨基放线菌素D(7-AAD)流式染色检测Aca联合RTX处理NU-DUL-1-R细胞后CDC及ADCC效应诱导的细胞死亡率,ELISA法检测白细胞介素17(IL-17)的表达,流式细胞术分析Th17细胞的比例。结果:(1)RTX对耐药株的CDC及ADCC效应均减弱;与亲本株相比,耐药株生长速度减慢,细胞周期分布改变,G1期细胞数目增加,S期细胞数目减少(P<0.05),CD20表达下调(P<0.05),但CD55及CD59表达无显著差异(P>0.05)。(2)Aca对NU-DUL-1-R细胞的IC50为12.51μmol/L;Aca与RTX联用组对NU-DUL-1-R细胞的CDC及ADCC作用均强于单药组(P<0.05)。Aca处理后Th17细胞比例降低,IL-17的分泌减少;与单用RTX组相比,Aca与RTX联用后Th17细胞比例和IL-17分泌水平均显著降低(P<0.05)。结论:耐RTX的人非GCB型DLBCL细胞株NU-DUL-1-R较亲本株生长速度减慢,细胞周期分布改变,表面CD20抗原表达减少;Aca增强了RTX生物类似药HLX01对非GCB型DLBCL耐药细胞株的杀伤作用,其机制可能与Aca减少IL-17的分泌有关。

BRD4抑制剂通过靶向BTK杀伤ABC-DLBCL细胞(英文)

目的:研究含布罗莫结构域蛋白4(BRD4)抑制剂JQ1和I-BET-762对活化B细胞样弥漫大B细胞淋巴瘤(ABC-DLBCL)的杀伤作用及其分子机制。方法:以不同浓度的BRD4抑制剂JQ1和I-BET-762及布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)抑制剂依鲁替尼(ibrutinib)处理ABC-DLBCL细胞,CCK-8法检测细胞活力,PI染色检测细胞凋亡,real-time PCR检测B细胞受体(BCR)/核因子κB(NFκB)信号通路BTK、磷脂酶Cγ(PLCγ)、LYN、SYK、白细胞介素6(IL-6)、蛋白激酶Cβ(PKCβ)、黏膜相关淋巴样组织淋巴瘤易位蛋白1(MALT1)等分子及转录因子MYC和RELA的m RNA表达,Western blot检测BTK、PLCγ、MYC和RELA的蛋白表达;通过生物信息学分析ABC-DLBCL细胞系HBL-1和生发中心B细胞样弥漫大B细胞淋巴瘤(GCB-DLBCL)细胞系Ly1中的BTK基因是否受超级增强子调控。结果:与Burkit淋巴瘤细胞系Raji和GCB-DLBCL细胞系BJAB相比,ABC-DLBCL细胞系HBL-1和Ly10对BRD4抑制剂JQ1更加敏感,JQ1能够抑制BCR/NFκB靶分子IL-6的表达。另一种BRD4抑制剂I-BET-762同样具有杀伤ABC-DLBCL细胞的作用。进一步机制研究发现,JQ1和I-BET-762能明显抑制BCR/NFκB信号通路关键分子BTK,而对其它分子影响较小。生物信息学分析显示,BTK基因附近无超级增强子,但JQ1处理可显著抑制BRD4结合到BTK基因区。有意思的是,BRD4抑制剂对耐ibrutinib的SU-DHL-2细胞也具有较强的杀伤作用。结论:BRD4抑制剂通过抑制BTK对ABC-DLBCL细胞有显著杀伤作用,与BCR信号通路抑制剂联合应用效果更为显著。JQ1或可用于治疗耐BTK抑制剂ibrutinib的ABC-DLBCL。

儿童侵袭性成熟B细胞淋巴瘤的临床病理学及分子遗传学特点

目的分析总结中国儿童各类型侵袭性成熟B细胞淋巴瘤的临床病理学及分子遗传学特点，为其诊断的标准化提供依据。方法收集97例儿童侵袭性成熟B细胞淋巴瘤石蜡包埋组织标本，包括伯基特淋巴瘤（BL）81例、弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）8例、介于BL和DLBCL间的不能分类的B细胞淋巴瘤（BL／DLBCL）8例，利用免疫组织化学技术和间期荧光原位杂交（FISH）技术检测其免疫表型和分子遗传学特征。结果BL的bcl-2和MUM1的阳性率分别为3％（2／66）和17％（12／71），DLBCL分别为50％（4／8）和63％（5／8），BL／DLBCL分别为50％（4／8）和63％（5／8）。BL、DLBCL和BL／DLBCL的Ki-67平均值分别为（93±4．4）％、（83±14．3）％和（80±11．5）％。BL、DLBCL和BL／DLBCL的c—myc基因易位的比例分别为98％（79／81）、38％（3／8）和50％（4／8）。38％（3／8）的DLBCL和25％（2／8）的BL／DLBCL存在bcl-6基因的多拷贝，BL与DLBCL之间、BL与BL／DLBCL之间bcl-2、MUM1和Ki-67平均值的差异及c—myc基因易位和bcl-6基因多拷贝的差异均有统计学意义（均P〈0．05）。结论儿童侵袭性成熟B细胞淋巴瘤的诊断和分型需要综合分析形态学、免疫表型和分子遗传学特征。儿童BL／DLBCL可能是DLBCL的一个亚型。CD10^＋、bcl-6^＋、bel-2^-．Ki-67〉90％、伴有IGH／c-myc重排、不伴有bcl-2和bcl-6重排时，支持BL的诊断；bcl-2^＋、Ki-67为50％-90％，同时伴有bcl-6基因的多拷贝时，支持DLBCL或BL／DLBCL的诊断。

T细胞/组织细胞丰富的大B细胞淋巴瘤病理学诊断特征分析

目的探讨T细胞/组织细胞丰富的大B细胞淋巴瘤的病理诊断学特征。方法回顾性分析12例2010年1月至2017年12月经泰安市中心医院病理科确诊的T细胞/组织细胞丰富的大B细胞淋巴瘤患者的临床资料,观察T细胞/组织细胞丰富的大B细胞淋巴瘤的病理形态学特点及免疫表型。结果患者男性7例,女性5例,年龄46~78岁;光镜下均可见淋巴结正常结构破坏,在小淋巴细胞和数量不等的组织细胞的背景下,散在单个大细胞;免疫组化显示大细胞CD20阳性,小淋巴细胞CD3阳性。结论T细胞/组织细胞丰富的大B细胞淋巴瘤是一种相对少见的淋巴瘤,以在小T淋巴细胞和数量不等的组织细胞的背景下散在一定数量的不典型大B细胞为特征;临床及组织学表现均易与其他类型的淋巴瘤相混淆,掌握其共同的特征并结合免疫组化方能正确诊断。

伴MYC、BCL2、BCL6基因重排的DLBCL/HGBL临床病理学特征分析

背景与目的:伴MYC、BCL2和BCL6基因重排的弥漫性大B细胞淋巴瘤/高级别B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma/high-grade B-cell lymphoma,DLBCL/HGBL)又称三重打击淋巴瘤(triple-hit lymphoma,THL),其发病率低且文献报道较少,人们对其缺乏充分认识。本研究旨在探讨THL的临床病理学特征及患者预后。方法:收集复旦大学附属肿瘤医院病理科2016年6月—2021年12月诊断的THL病例10例,回顾性分析其临床特征,采用H-E染色观察其组织病理学特征,采用免疫组织化学法分析其免疫表型,采用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)法检测MYC、BCL2和BCL6基因重排,采用EB病毒编码RNA(Epstein-Barr virus-encoded RNA,EBER)原位杂交法检测判断EB病毒的感染状态。结果:10例THL患者中,男性4例,女性6例。中位年龄54岁(43~80岁)。其中2例发生在淋巴结,6例发生在结外器官,其余2例结内外均受累。临床分期Ⅲ/Ⅳ期4例(40%),Ⅰ/Ⅱ期6例(60%)。40%(4/10)的患者国际预后指数(international prognostic index,IPI)评分≥3分。50%(4/8)的患者有骨髓侵犯。2例(20%)有B症状。40%(4/10)的患者有乙肝病毒既往感染史。显微镜下观察5例呈非特指DLBCL(DLBCL,not otherwise specified,DLBCL-NOS)形态,2例兼具DLBCL与伯基特淋巴瘤特征,1例呈母细胞样形态,其余2例因组织挤压严重无法准确分类。免疫组织化学染色显示,80%为生发中心B细胞(germinal center B-cell,GCB)型,20%为非GCB(non-GCB)型;78%(7/9)为MYC/BCL2双表达,BCL6阳性率为80%,Ki-67增殖指数均≥80%。FISH检测显示,10例均同时有MYC、BCL2和BCL6基因重排。EBER原位杂交均呈阴性。除1例手术切除病灶后未化疗外,9例均接受系统治疗。10例患者的总生存期为2.0~55.5个月,中位总生存期为16.8个月。1年总生存率为68.6%,其中Ⅰ/Ⅱ期患者的1年总生存率100%,Ⅲ/Ⅳ期患者为25%。结论:THL好发于中老年人,以结外器官受累更常见,是一组形态学表现多样、以GCB型为主并常伴有MYC/BCL2双表达的侵袭性B细胞淋巴瘤。本研究患者中临床分期Ⅰ/Ⅱ期占多数且预后较好,因此及早甄别THL对于及时干预、改善预后具有重要临床意义。

回肠富于T细胞的大B细胞淋巴瘤合并结肠癌一例

患者男,48岁,因上腹隐痛4个月入院。门诊查肠镜示:升结肠恶性肿瘤;病理示:高级别上皮内瘤变,高度可疑为腺癌。入院查体:腹部无阳性体征。实验室检查示:血红蛋白65 g/L,大便隐血阳性(3+),癌胚抗原、甲胎蛋白、C A-199及CA-125均正常。腹部C T示升结肠管壁增厚、管腔狭窄,周围多发肿大淋巴结影;考虑为升结肠肿瘤性病变,伴周围淋巴结转移(图1A)。初步诊断:升结肠肿瘤。

骨髓T细胞/组织细胞丰富型大B细胞淋巴瘤一例并文献复习

目的探讨T细胞/组织细胞丰富型大B细胞淋巴瘤的临床病理诊断要点。方法采用免疫组织化学法对1例骨髓活组织标本进行检测。结果骨髓活组织标本的免疫组织化学染色显示在弥漫性增生的CD3阳性的小淋巴细胞背景中,存在少量CD20阳性的不典型大细胞,数量不到淋巴细胞总数的10%,分布于小淋巴细胞及组织细胞(CD163阳性)的背景中,不易辨认,瘤细胞核大,呈泡状核,有一定异型性,偶见双核细胞,核仁明显,呈嗜碱性。骨髓间质广泛纤维化。结论T细胞/组织细胞丰富型大B细胞淋巴瘤侵犯骨髓时通常伴有纤维化,如果原发灶不明显,骨髓活组织检查及相应的免疫组织化学法则对诊断起至关重要的作用。

结节性淋巴细胞为主型霍奇金淋巴瘤向富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤样转化一例并文献复习

目的:探讨结节性淋巴细胞为主型霍奇金淋巴瘤(NLPHL)经治疗后复发并向富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤(THRLBCL)样转化患者的临床特点,提高对NLPHL和THRLBC鉴别诊断与治疗的认识。方法:回顾性分析复旦大学附属华东医院2019年10月收治的1例NLPHL治疗后复发并向THRLBCL样转化患者的治疗经过,并进行相关文献复习。结果:该患者经ABVD方案治疗后复发,再次经病理活组织及免疫组织化学检查诊断为THRLBCL样转化,经R-CHOP方案治疗后完全缓解。结论:NLPHL化疗效果不佳时需考虑是否存在向THRLBCL样转化的可能,需及时行活组织病理检查,调整治疗方案。