天冬多糖的复合酶提取工艺优化及其理化性质、吸湿性和抗氧化活性

采用响应面法优化天冬粗多糖的复合酶提取工艺,考察提取时间、提取温度、酶底质量比和缓冲液pH值对天冬粗多糖得率的影响,并对最优条件下获得的天冬粗多糖的理化指标、抗氧化活性和吸湿性进行鉴定。结果表明,复合酶法提取天冬粗多糖的最佳工艺条件为提取时间4.5 h,提取温度42.0℃,酶底质量比1.5%,缓冲液pH值5.3,粗多糖得率为18.54%。天冬粗多糖中糖纯度高达95.49%,蛋白质和多酚含量分别为1.07%和0.11%。单糖组成结果表明,天冬粗多糖主要由葡萄糖、果糖、岩藻糖、半乳糖和木糖组成,摩尔比为53.91:26.00:6.19:5.33:4.53,且具有双螺旋结构。吸湿性实验结果表明,天冬粗多糖的吸湿率,与甘油的吸湿率相似,远高于透明质酸钠的吸湿率;抗氧化实验结果表明,天冬粗多糖具有良好的抗氧化活性。该研究为复合酶法提取并获得新型的高纯度、高活性的天冬粗多糖开发利用提供了理论基础和应用价值。

响应面法优化天冬多糖的提取条件

以天冬多糖提取率(Y1)和含量(Y2)为响应值,利用响应面法对天冬多糖提取工艺进行多目标同步优化。根据统计模型发现3个影响因素——提取时间、提取温度、液料比均对多糖提取率和含量有显著影响。由响应面三维及等高线叠加图推测得到天冬多糖提取率与含量均较高的最佳提取工艺参数为提取时间4.2h,提取温度78℃,液料比22:1(mL/g)。验证优化工艺参数得到多糖提取率达到5.24%,多糖含量达到26.42%,与模型预测值非常接近。采用响应面法对天冬多糖提取条件进行优化合理可行。

天冬多糖的提取与单糖组成分析

目的从常用中药天冬中提取多糖,并建立柱前衍生化高效液相色谱法分析天冬多糖的单糖组成。方法采用水提醇沉法提取天冬多糖。用2 mol.L-1硫酸溶液将多糖水解成单糖,用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)与水解后的单糖进行衍生化反应;衍生产物采用反相高效液相色谱法分离,并在250 nm波长处检测,研究天冬多糖的单糖组成。结果水提醇沉法提取的多糖经过精制后,所得多糖的平均含量可达95.84%。用高效液相色谱法检测天冬多糖中单糖组成比例为甘露糖∶鼠李糖∶葡萄糖醛酸∶葡萄糖∶半乳糖∶阿拉伯糖(2.18∶0.95∶1.00∶1.62∶2.06)。结论该多糖提取及精制方法可得到含量较高的天冬多糖。柱前衍生的高效液相色谱法可用于天冬多糖的单糖组分分析,该法操作简便,结果准确,适用于多糖中的单糖组成分析。

天冬多糖对小鼠免疫功能影响的实验研究

目的:探讨天冬多糖对小鼠免疫功能的影响。方法:通过小鼠胸腺和脾脏指数的测定,确定了小鼠巨噬细胞吞噬的功能、淋巴细胞转化率和血清溶血素的形成。结果:天冬多糖的高、中、低剂量明显能使小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞百分率、吞噬指数和胸腺、脾脏等免疫器官重量的增加,从而使小鼠淋巴细胞转化率及胸腺、脾脏指数的增加和小鼠血清溶血素水平的提高。结论:天冬多糖有增强机体免疫功能的作用。

天冬多糖对低氧条件下人肝癌细胞生长、侵袭及迁移的影响

目的观察天冬多糖对低氧条件下人肝癌细胞生长、侵袭及迁移能力的影响,探讨天冬多糖的抗肿瘤作用机制。方法培养人肝癌细胞HepG2细胞,在96孔培养板中分别加入天冬多糖500、1 000、1 500、2 000、3 000、4 000μg/m L,另设空白对照孔加入生理盐水,放入低氧培养箱(95%N2,5%CO_2,1%O_2)继续培养,培养24、48、72 h时采用CCK-8法观察并计算细胞的抑制率。按照天冬多糖IC_(50)、IC_(20)、IC_(10)分别干预HepG2细胞,作为天冬多糖高浓度组、天冬多糖中浓度组、天冬多糖低浓度组,空白对照组不干预。各组放入低氧培养箱培养24 h后,采用Transwell法检测各组HepG2细胞的迁移及侵袭能力。结果不同浓度、不同作用时间的天冬多糖对HepG2细胞均有明显的生长抑制作用。相关性分析示,细胞生长抑制率与天冬多糖浓度呈正相关(r=0.980,P<0.05),具有剂量依赖性。天冬多糖低浓度组、天冬多糖中浓度组、天冬多糖高浓度组的侵袭及迁移细胞数均低于空白对照组(P均<0.01)。结论天冬多糖对低氧条件下人肝癌细胞的生长有明显的抑制作用,并能有效抑制人肝癌细胞的侵袭与迁移。

天冬多糖低氧下抑制肝癌作用的体外实验研究

目的探讨低氧环境下天冬多糖对人肝癌细胞生长的影响及初步作用机制。方法氯化钴(CoCl2)化学模拟低氧下培养4种人肝癌细胞株(HepG2、Hep3B、SMMC-7721及Bel-7402),加入不同浓度的天冬多糖(0mg/m L、0.9 mg/m L、1.2 mg/m L、1.8 mg/m L、2.4 mg/m L、2.7 mg/m L、3.6 mg/m L)培养,CCK-8法检测天冬多糖对4种人肝癌细胞株细胞增殖的影响,根据IC50选取0.9 mg/m L、1.8 mg/m L、2.7 mg/m L作为后续实验的天冬多糖低、中、高剂量浓度。后续实验4种细胞均设6组:常氧对照组只加入培养液培养;低氧对照组加入200μmol/L CoCl2培养;低氧低剂量组加入200μmol/L CoCl2+0.9 mg/m L天冬多糖培养;低氧中剂量组加入200μmol/L CoCl2+1.8 mg/m L天冬多糖培养;低氧高剂量组加入200μmol/L CoCl2+2.7 mg/m L天冬多糖培养;常氧高剂量组加入2.7 mg/m L天冬多糖培养。培养24 h后,Real-time PCR检测各组血管内皮生长因子(VEGF)、Bax、Bcl-2 mRNA表达情况,Western-blot方法检测各组缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、VEGF、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、Cleaved Caspase-3蛋白表达情况。结果低氧下天冬多糖可明显抑制人肝癌细胞株的生长,且抑制作用呈剂量依赖性。天冬多糖可明显抑制HIF-1α、VEGF、MMP-9蛋白表达及VEGF mRNA、Bcl-2mRNA表达,促进Cleaced Caspase-3蛋白及Bax mRNA表达,且低氧下高剂量作用最明显。结论天冬多糖在体外低氧条件下能抑制肝癌细胞的生长,其可能通过抑制HIF-1α/VEGF表达及肝癌细胞的侵袭、促进肝癌细胞凋亡起到抗肝癌的作用。

天冬多糖逆转缺氧诱导的上皮间质转换抑制人肝癌细胞迁移

目的:探讨天冬多糖(ASP)逆转缺氧(1%氧)诱导的上皮间质转化(EMT)抑制人肝癌细胞迁移,揭示ASP抗肝癌作用的可能机制。方法:人肝癌细胞SK-Hep1和Hep-3B分为常氧组,缺氧组,缺氧+ASP(2. 5 mg/m L)组,缺氧+ASP(5 mg/m L)组,缺氧+ASP(10 mg/m L)组。用CCK8法和创伤愈合实验分别检测各组人肝癌细胞的增殖和迁移;观察各组人肝癌细胞的形态学变化;Western blot法检测各组人肝癌细胞EMT相关蛋白表达的变化。结果:CCK8实验结果表明ASP在缺氧培养24 h和48 h均可明显地抑制人肝癌细胞的增殖(P <0. 05)。划痕实验结果表明,缺氧组的人肝癌细胞较常氧组迁移能力明显增强(P <0. 05),加入ASP后可明显的抑制缺氧诱导的人肝癌细胞的迁移,且具有明显的剂量依赖性(P <0. 05)。细胞形态学观察发现,缺氧组较常氧组人肝癌细胞形态变长,呈间质型,加入不同浓度ASP后形态变圆,呈上皮型;Western blot法检测发现,与常氧组相比,缺氧组人肝癌细胞E钙黏素表达下调,N钙黏素和波形蛋白表达上调,加入不同浓度ASP后,E钙黏素表达开始上调,N钙黏素和波形蛋白表达开始下调。结论:ASP可明显的抑制缺氧诱导的人肝癌细胞迁移,其机制可能是通过逆转缺氧诱导的EMT实现的。

天冬多糖对人肝癌SMMC-7721细胞株的作用及其机制

研究结果表明中药天冬所含的多糖是其抗肿瘤的有效成分。我们通过提取的天冬多糖作用于体外培养的人肝癌SMMC-7721细胞株，探讨其对肝癌细胞的作用及机制。

不同产地的天冬药材中多糖含量的比较研究

目的:为制定天冬药材的质量标准、保证天冬GAP项目的顺利完成,对不同产地的天冬药材中多糖含量作了比较研究。方法:采用紫外分光光度法(苔黑酚-硫酸法,棉子糖作标准)。结果:四川内江产天冬的多糖含量最高,为14.84％,广西玉林产天冬的多糖含量最低,为9.52％。结论:不同产地的天冬药材中多糖的含量有明显的差别。

天冬多糖协同HIF1αRNAi在缺氧环境下抑制肝癌血管生成的研究

目的研究天冬多糖联合HIF1αRNAi在缺氧环境下对肝癌血管生成的影响。方法在缺氧环境下培养人肝癌细胞SK-Hep1,构建HIF1αRNAi慢病毒载体。实验细胞分为阴性对照组(LV-Ctrl)、RNAi组(LV-LV-shHIF1α)、协同作用组(LV-shHIF1α+天冬多糖)。使用CCK8法检测细胞增殖情况、划痕实验和Transwell小室侵袭实验检测细胞迁移侵袭情况、HUVEC诱导的基质胶血管生成实验检测细胞血管生成的能力,免疫印迹法检测相关蛋白表达。结果在缺氧环境下,天冬多糖协同HIF1αRNAi明显抑制肝癌细胞增殖、迁移及血管生成,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论天冬多糖协同HIF1αRNAi具有明显的抗肝癌血管生成作用。

基于HIF-1α/VEGF/NF-κB信号通路探讨天冬多糖调控COMMD3抑制肝癌血管生成的作用机制

目的:研究天冬多糖通过HIF-1α/VEGF/NF-κB信号通路调控COMMD3抑制肝癌血管生成的作用机制。方法:体外实验:采用平板克隆实验、流式细胞凋亡检测、划痕实验、Transwell小室实验和血管形成实验检测天冬多糖干预COMMD3过表达的SK-Hep1和Hep-3B细胞的增殖、凋亡、迁移、侵袭和血管生成。Western Blot测定COMMD3、HIF1-α、VEGF和NF-κB蛋白表达水平。体内实验:通过构建裸鼠皮下移植瘤模型,观察天冬多糖灌胃干预后裸鼠瘤体的变化和免疫组化染色检测各组裸鼠皮下移植瘤的HIF-1α、VEGF、NF-κB和CD34的表达变化。结果:体外实验:与Control组的肝癌细胞SK-Hepl和Hep-3B比较,OvCOMMD3组的增殖(P<0.01)、迁移(P<0.05)、侵袭(P<0.05)和血管生成(P<0.01)能力显著增强,Control+ASP组的增殖(P<0.05,P<0.01)、迁移(P<0.01)、侵袭(P<0.01)和血管生成(P<0.01)能力显著降低,促凋亡(P<0.01)能力显著增强。与Control组比较,ASP对肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭和血管生成的抑制作用和对COMMD3、HIF-1α、VEGF、NF-κB蛋白表达的抑制作用都被OvCOMMD3所回补。体内实验:ASP对裸鼠瘤体生长和血管生成的抑制作用能够被COMMD3过表达所回补,ASP对瘤体中HIF-1α、VEGF、NF-κB和CD34表达的抑制作用也被COMMD3过表达所回补。结论:天冬多糖可以通过下调COMMD3的表达抑制肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭和血管生成,其机制可能与调节HIF-1α/VEGF/NF-κB信号通路有关。

天冬功能饮料配方分析

天冬为百合科植物天门冬的块根,含19种氨基酸,有很好的营养保健功效。《神农本草经》《药典》《千金要方》中记载,天冬有益气延年、保定肺气、去寒热、养肌肤、滋阴、润燥、清肺和降火等保健功效。玫瑰花是一种珍贵的药材,对女性有美容养颜、通经活络、软化血管的作用,对于心脑血管、高血压、心脏病和妇科病等有显著疗效。玫瑰花含丰富的维生素A、C、B、E、K和单宁酸,能改善内分泌失调,对消除疲劳和伤口愈合也有帮助。勿忘我是紫草科勿忘草属植物,味甘、寒,入肝、脾、

安体优调节PG细胞MMP2/TIMP2表达的体外实验研究

[目的]探讨安体优主要成分防治肿瘤复发和转移机理。[方法]体外细胞培养、RT鄄PCR方法研究安体优主要成分对PG细胞MMP2、TIMP2mRNA的影响。[结果]安体优体外对PG细胞MMP2mRNA转录影响不明显。安体优体外对PG细胞TIMP2mRNA的转录具有促进作用。安体优体外可以提高TIMP2/MMP2mRNA比率。[结论]安体优体外促进PG细胞TIMP2mRNA转录、提高TIMP2/MMP2mRNA比率为其防治肿瘤转移和复发的机理之一。

高中生过招“肿瘤君”

上学时,贺婉卓是北京八中一名高中生;课余时间和假期,她是中国科学院生物物理研究所的一名'研究员'。亲人患癌去世使她立志学医,并想做'长生不老药'给妈妈。执着与'肿瘤君'过招的她,小小年纪破解了难题,研究发现了天冬多糖杀伤髓源抑制性细胞。目前,她荣获第十六届北京青少年科技创新市长奖、全国科技创新大赛银奖、北京市青少年科技创新大赛金奖等20多个奖项。亲人离世,她立志过招'肿瘤君'