天冬氨酸氨基转移酶/丙氨酸氨基转移酶与儿童噬血细胞性淋巴组织细胞增生症预后的相关性研究

背景天冬氨酸氨基转移酶(AST)/丙氨酸氨基转移酶(ALT)是近年来评估急危重症预后的新指标。目前AST/ALT仅报道可用于评估成人噬血细胞性淋巴组织细胞增生症(HLH)的预后,而儿童HLH尚未见相关研究。目的探讨HLH患儿AST/ALT与临床特征的关系及预后意义,为临床早期识别并诊断儿童HLH提供理论依据。方法选取2013年1月—2022年5月遵义医科大学附属医院确诊为HLH的128例住院患儿为研究对象,通过电子病历系统收集患儿的基线资料。将患儿按AST/ALT三分位数分为3组:T1组(AST/ALT≤1.57,n=43),T2组(1.57<AST/ALT<3.22,n=42),T3组(AST/ALT≥3.22,n=43)。采取门诊复查和电话随访形式对患儿进行随访。随访开始时间为患儿出院时间,每6个月随访1次,随访截至2022-06-01,终止事件为患儿死亡或失访。采用Spearman秩相关分析探讨AST/ALT与实验室检查结果的相关性。绘制实验室指标预测HLH患儿死亡的受试者工作特征曲线(ROC曲线),计算ROC曲线下面积(AUC)并计算最佳截断值。采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线分析不同AST/ALT分组对患者总生存期的影响,并用Log-rank检验进行比较。采用Cox比例风险回归分析探讨HLH患儿死亡的影响因素。结果3组患儿性别、进入儿童重症监护室(PICU)情况、治疗方式比较,差异有统计学意义(P<0.05)。3组患儿呼吸衰竭、休克发生率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。T3组患儿乳酸脱氢酶、肌酸激酶同工酶、血清铁蛋白和活化部分凝血活酶时间高于T1、T2组,白蛋白、纤维蛋白原水平低于T1、T2组(P<0.05);T2、T3组Na^(+)水平低于T1组,C反应蛋白水平高于T1组(P<0.05)。相关性分析结果显示,AST/ALT与中性粒细胞绝对值(r_(s)=0.182,P=0.040)、C反应蛋白(r_(s)=0.419,P<0.001)、总胆红素(r_(s)=0.182,P=0.040)、肌酸激酶同工酶(r_(s)=0.310,P<0.001)、乳酸脱氢酶(r_(s)=0.474,P<0.001)、活化部分凝血活酶时间(r_(s)=0.316,P<0.001)、血清铁蛋白(r_(s)=0.311,P<0.001)呈正相关,与白蛋白(r_(s)=-0.352,P<0.001)、纤维蛋白原(r_(s)=-0.179,P=0.043)、Ca^(2+)(r_(s)=-0.259,P=0.003)、Na^(+)(r_(s)=-0.244,P=0.006)呈负相关。ROC曲线结果显示,C反应蛋白、乳酸脱氢酶、活化部分凝血活酶时间、血清铁蛋白、纤维蛋白原预测患儿死亡的AUC分别为0.560〔95%C(I 0.451,0.669)〕、0.666〔95%C(I 0.560,0.772)〕、0.605〔95%CI(0.499,0.710)〕、0.724〔95%CI(0.626,0.822)〕、0.648〔95%CI(0.551,0.745)〕、0.715〔95%CI(0.624,0.807)〕,最佳截断值分别为82.08 mg/L、40.5 U/L、927.5 U/L、53.95 s、1897μg/L、1.45 g/L。随访过程中T1、T2、T3组患儿死亡率分别为14.0%(6/43)、33.3%(14/42)、44.2%(19/43),差异有统计学意义(χ^(2)=9.518,P=0.009)。多因素Cox比例风险回归分析结果显示,发生休克〔HR=4.24,95%CI(2.09,8.61),P<0.001〕、活化部分凝血活酶时间≥53.95 s〔HR=2.44,95%CI(1.24,4.81),P=0.010〕、血清铁蛋白≥1897μg/L〔HR=3.05,95%CI(1.02,9.09),P=0.046〕是HLH患儿死亡的影响因素。结论HLH患儿的AST/ALT更高,其预后不良的发生率更高,且其总生存期更短,患儿预后更差,早期关注AST/ALT变化对HLH患儿预后具有重要临床意义。

烤瓷熔附金属冠颈缘位置对龈沟液中内毒素及天冬氨酸基转移酶表达的影响

目的探讨烤瓷熔附金属(PFM)冠边缘位置对牙周健康的影响。方法将因下颌第一磨牙牙体缺损要求采用镍铬合金PFM冠修复的60例患者随机分成2组,并根据冠的颈缘位置不同分为A组(龈下)和B组(平龈)。分别测定并分析基牙修复前和修复后1、3、6个月龈沟液(GCF)量及其中内毒素和天冬氨酸基转移酶(AST)的含量变化。结果与修复前相比,A组龈沟内的GCF量及其内毒素和AST的含量在冠修复1、3、6个月后明显增加,差异有统计学意义(P<0.05),而B组的差异无统计学意义(P>0.05);同时,两组之间比较,在GCF量、内毒素和AST的平均含量上,在修复后相同时间段的差异有统计学意义(P>0.05)。结论烤瓷冠颈缘位置对牙周健康有一定影响,平龈的设计明显优于龈下设计。

乌鲁木齐市汉族健康人群丙氨酸氨基转移酶及天门冬氨酸氨基转移酶参考区间的初步调查

目的建立乌鲁木齐市汉族健康人群血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)催化活性浓度的参考区间。方法对8244例汉族健康体检者ALT、AST活性在不同性别、年龄分布进行统计分析。结果 ALT、AST活性男性明显高于女性(P<0.01)。ALT参考区间上限为:男性为51U/L,女性为36U/L。男性血清ALT活性在30～<40岁最高,ALT参考区间上限为:≤30岁为56U/L,30～<40岁为59U/L,40～<50岁为53U/L,50～<60岁为47U/L,≥60岁为41U/L。女性血清ALT活性在50岁以后最高,ALT参考区间上限为:≤30岁为30U/L,30～<40岁为32U/L,40～<50岁为38U/L,50岁以上为45U/L。AST参考区间上限为:男性为35U/L,女性为30U/L。不同年龄男性AST活性比较差异无统计学意义,AST区间上限为35U/L,女性血清AST活性在50岁以后最高,AST参考区间上限为:≤40岁为33U/L,40～<50岁为35U/L,≥50岁为39U/L。结论 ALT、AST活性在不同性别、年龄有明显差异,各实验室应按不同性别、年龄建立本地区、本实验室血清ALT、AST参考区间。

天门冬氨酸氨基转移酶参考方法建立及性能评价

目的建立测定血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的参考方法,并对其主要分析性能进行评价。方法按照国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)颁布的AST一级参考测量程序(37℃)的要求建立参考方法,并根据美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)系列文件(EP15-A、EP6-A)对建立的参考方法的精密度、线性范围等性能进行评价,通过测定有证参考物质(ERM)和参加国际参考实验室间比对活动(RELA)对准确度性能进行评价。结果所有仪器性能均符合IFCC公布的关于AST的测定参考方法(37℃)的标准操作程序以及CNAS-CL33:《检测和校准实验室能力认可准则在临床酶学参考测量领域的应用说明》中对临床酶学参考实验室的主要设备的计量学性能要求;CV批内<1%,CV总<1%,符合参考方法精密度性能要求;ERM测定均值在其给定的参考值范围内,RELA测定结果在其给定的置信区间内,符合参考方法准确度性能要求;在AST参考方法所涉及的浓度范围内(16.05～361.88U/L)呈线性,本实验室检测线性范围上限为361.88U/L,高于IFCC公布的AST参考方法的最大线性范围(247.65U/L)。结论 AST参考方法已基本建立,精密度、准确度及线性范围等性能指标均符合方法要求。可以提供给参考物质赋值等参考测量服务以及进行相关标准化研究。

天冬氨酸氨基转移酶血小板比值可作为肝癌经肝动脉化疗栓塞术后的预后指标

目的探讨天冬氨酸氨基转移酶血小板比值指数(APRI)与行经肝动脉化疗栓塞(TACE)治疗的肝癌患者的预后关系。方法回顾性分析388例肝癌患者的临床资料,根据TACE术前外周血APRI水平分为低APRI组(APRI<1.30,237例)和高APRI组(APRI≥1.30,151例),比较2组患者的1年及3年生存率。结果高APRI组的1年及3年生存率分别为25.5%和2.6%,低APRI组为71.2%和30.0%,2组间差别有统计学意义(P<0.001)。术前白蛋白及天冬氨酸氨基转移酶(AST)的水平、Child-Pugh分级、肿瘤大小、脉管癌栓、APRI、TACE次数是肝癌患者术后总生存时间的独立预后因素。经ROC曲线分析比较显示,APRI较其他临床预后因素有更大的ROC曲线下面积。结论 APRI可作为判断行TACE治疗的肝癌患者预后有价值的指标。

脾脏硬度值、天冬氨酸氨基转移酶和血小板比率指数、FIB-4指数对肝硬化食管静脉曲张的预测价值

目的探讨脾脏硬度值(SSM)、天冬氨酸氨基转移酶和血小板比率指数(APRI)、FIB-4指数在肝硬化食管静脉曲张(EV)无创诊断中的应用价值。方法选择2016年6月至2018年12月在阜阳市第二人民医院就诊的105例肝硬化病人,均行胃镜检查、测量SSM、检测肝功能及血常规等生化指标,应用受试者工作曲线评估SSM、APRI、FIB-4预测肝硬化病人EV程度的能力。结果 SSM、APRI及FIB-4值均随EV程度的加重而呈上升趋势,在不同程度EV之间差异有统计学意义(P<0.05)。SSM、APRI、FIB-4预测肝硬化EV的AUC值分别为0.859、0.753、0.795,预测重度EV的AUC值分别为0.833、0.788、0.801。结论SSM、APRI及FIB-4在预测肝硬化病人EV是否存在及严重程度有较好的应用价值。

N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂氯胺酮抑制大鼠吗啡戒断症状的表达

目的 :观察N 甲基 D 天冬氨酸 (N methyl D aspartate ,NMDA)受体拮抗剂氯胺酮 (ketamine)在不影响运动功能的条件下 ,是否能抑制吗啡依赖大鼠的戒断症状。方法 :给大鼠连续注射递增剂量吗啡 5d ,造成其对吗啡的依赖 ,用纳洛酮催促戒断症状的出现。应用行为药理学的研究方法 ,经腹腔 (2～ 16mg·kg-1)、侧脑室 (4～ 10 0μg)及相关核团 (0 .4～ 10 μg)给予不同剂量的氯胺酮。结果 :反复 4次 (1)腹腔注射 8mg·kg-1,最后一次注射 3h后 ,能显著抑制 2种戒断症状 ;16mg·kg-1能显著抑制 3种戒断症状。 (2 )反复 4次脑室注射 10 0 μg氯胺酮 ,能显著抑制 2种戒断症状。 (3)伏核内注入 0 .4～ 10 μg的氯胺酮可显著抑制 4种戒断症状 ,但注入杏仁核则无效。 结论 :在不影响大鼠运动功能的条件下 ,氯胺酮对吗啡戒断症状有明显抑制作用 。

NOD样受体家族蛋白3/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3在大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用

目的探究NOD样受体家族蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)在大鼠心肌缺血再灌注损伤诱导的心肌细胞凋亡中的作用及其对自噬的影响。方法选择SPF级雄性大鼠60只,建立心肌缺血再灌注损伤模型,将大鼠分为假手术组、模型组及尼莫地平组,每组20只。检测各组大鼠缺血再灌注后心功能,测定心肌酶、细胞因子。采用苏木精-伊红染色检测心肌病理改变;流式细胞术测定细胞凋亡率;透射电镜下计数自噬小体,RT-PCR和Westernblot法检测NLRP3和Caspase-3表达。结果各组大鼠左心室舒张末期压力、左心室收缩压、左心室压力最大上升及下降速率、心肌细胞凋亡率、TNF-α、白细胞介素6、肌酸激酶、天冬氨酸转氨酶和乳酸脱氢酶水平比较,差异有统计学意义(P<0.01)。模型组和尼莫地平组自噬小体计数明显高于假手术组[(10.55±1.87)个、(6.32±1.43)个vs(3.45±0.67)个,P<0.01],且尼莫地平组自噬小体计数明显低于模型组,差异有统计学意义(P<0.01)。与假手术组比较,模型组和尼莫地平组大鼠NLRP3、Caspase-3mRNA及蛋白表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,尼莫地平组大鼠NLRP3、Caspase-3mRNA及蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论大鼠缺血再灌注损伤可增加细胞凋亡率,降低心功能,诱发炎性反应,增强机体自噬小体形成能力,与NLRP3/Caspase-3的异常高表达有关。

氯胺酮对N-甲基-D-天冬氨酸诱导大鼠脊髓背角星形胶质细胞损伤的作用(英文)

背景:氯胺酮是临床常用的静脉全麻药,静脉或硬脊膜外腔用药都有镇痛作用,它是N-甲基-D-天冬氨酸受体非竞争性拮抗剂,可拮抗兴奋性氨基酸的毒性作用。目的:观察氯胺酮对N-甲基-D-天冬氨酸受体过度激活诱导大鼠脊髓背角星形胶质细胞凋亡的影响,探讨其可能的作用机制。设计:随机对照观察。单位:郧阳医学院附属太和医院麻醉科。材料:实验于2003-09/2005-01在郧阳医学院基础医学研究所细胞生物学实验室完成。由武汉大学动物实验中心提供新生两三天Wistar大鼠。方法:取Wistar大鼠T11～L6脊髓背角星形胶质细胞原代纯化培养。胶质纤维酸性蛋白鉴定星形胶质细胞纯度达98%后用于实验。将培养细胞24孔板随机分为6组(每组9份):①对照组加Hanks液50μL。②N-甲基-D-天冬氨酸组加药浓度为100μmol/L。③氯胺酮组加药浓度为1mmol/L。④100μmol/LN-甲基-D-天冬氨酸+0.1mmol/L氯胺酮组。⑤100μmol/LN-甲基-D-天冬氨酸+0.5mmol/L氯胺酮组。⑥100μmol/LN-甲基-D-天冬氨酸+1mmol/L氯胺酮组。1mmol/L氯胺酮为临床镇痛剂量。培养24h后检测超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量,免疫细胞化学观察Bcl-2蛋白和形态学变化,流式细胞仪检测星形胶质细胞凋亡率。主要观察指标:①Bcl-2蛋白免疫组织化学苏木精-伊红复染细胞着色及形态学变化。②流式细胞仪检测星形胶质细胞凋亡率。③丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性变化。结果:①Bcl-2平均吸光度值(A)作为半定量测量Bcl-2蛋白表达水平:100μmol/LN-甲基-D-天冬氨酸组低于对照组,差异显著[分别为0.054±0.021,0.108±0.039,P<0.01],100μmol/LN-甲基-D-天冬氨酸+1mmol/L氯胺酮组高于100μmol/LN-甲基-D-天冬氨酸组,差异显著[分别为0.148±0.045,0.054±0.021,P<0.01]。②流式细胞仪检测星形胶质细胞凋亡率:100μmol/LN-甲基-D-天冬氨酸组高于对照组,差异显著[分别为(25.26±6.13)%,(5.66±2.24)%,P<0.01],100μmol/LN-甲基-D-天冬氨酸+1mmol/L氯胺酮组低于100μmol/LN-甲基-D-天冬氨酸组,差异显著[分别为(24.41±4.82)%,(25.26±6.13)%,P<0.01]。③丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性变化:100μmol/LN-甲基-D-天冬氨酸使星形胶质细胞内丙二醛含量显著升高,而超氧化物歧化酶活性明显降低;1mmol/L氯胺酮明显降低丙二醛含量,显著增强超氧化物歧化酶活性,该效应在临床镇痛剂量以内有明显量效关系,与N-甲基-D-天冬氨酸组相比差异显著(P<0.01)。1mmol/L氯胺酮组与对照组相比、100μmol/LN-甲基-D-天冬氨酸+0.1mmol/L氯胺酮组与N-甲基-D-天冬氨酸组相比差异均无显著性。结论:N-甲基-D-天冬氨酸受体过度激活可诱导大鼠脊髓背角星形胶质细胞大量凋亡,适量氯胺酮显著抑制细胞凋亡,其机制可能增强星形胶质细胞Bcl-2蛋白表达,同时抑制自由基的产生和增强超氧化物歧化酶活性。

复方氯胺酮口服液对鼠小脑N-甲基D-天冬氨酸受体1和γ氨基丁酸A受体的影响

目的观察大鼠服用复方氯胺酮口服液(CKOS)后不同时点行为变化及小脑中N甲基D天冬氨酸受体1(NMDAR1)和γ氨基丁酸A受体(GABAAR)的分布,探讨其口服液对鼠小脑NMDAR1和GABAAR的影响及其作用机制。方法采用免疫组化、原位杂交技术检测SD大鼠服用CKOS后不同时点NMDAR1和GABAAR在小脑Purkinje细胞的表达情况。结果0点处(正常对照)NMDAR1在小脑Purkinje细胞表达最多;随着药效的增加,NMDAR1在小脑Purkinje细胞上的表达逐渐减少,30min时NMDAR1表达最低值,120min时Purkinje阳性细胞逐渐恢复,360min恢复接近正常。而GABAAR与NMDAR1的表达方式正相反,GABAAR在Prukinje细胞上的表达随着药效的增强而增加,又随着药效减低而减少。结论CKOS对鼠小脑NMDAR1在Purkinje细胞上的表达呈剂量依赖抑制,应产生不协调运动。但GABAAR在Purkinje细胞上的表达呈剂量依赖增强,抑制不协调运动。CKOS对小脑的作用为促使大鼠协调运动。

N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂类药物在脑缺血损伤中的应用进展

综述了近年来N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂治疗脑缺血的应用进展,并从不同作用位点分别对各类药物特点作了阐述。

术前天冬氨酸氨基转移酶与丙氨酸氨基转移酶比值对小肝癌患者术后早期复发的预测价值

目的探究术前天冬氨酸氨基转移酶与丙氨酸氨基转移酶比值(AAR)对单发小肝细胞癌根治性切除术后早期复发的预测价值。方法采用回顾性队列研究方法。回顾性分析2017年1月至2021年7月在宁夏医科大学总医院接受肝癌根治性切除术患者137例的临床资料。按照术后早期复发与否将其分为复发组(n=72)和非复发组(n=65)。通过训练队列中的单因素和多变量logistic回归分析确定了小肝癌早期复发的独立危险因素。将AAR进行分组,采用倾向性匹配(PSM)法将logistic模型估计的倾向性评分接近的患者按照1∶1配对,卡钳值0.02,消除混杂因素。再次应用logistic回归模型,分析匹配后AAR对小肝癌患者术后早期复发的预测价值。结果单因素分析显示,年龄(χ^(2)=4.22,P=0.040)、纤维蛋白原与白蛋白比值(χ^(2)=8.26,P=0.004)、AAR(χ^(2)=5.83,P=0.016)是小肝癌根治性术后早期复发的相关因素;多因素logistic回归分析显示,年龄(P=0.042)、纤维蛋白原与白蛋白比值(P=0.024)、AAR(P=0.018)为单发性小肝癌根治性术后早期复发的独立危险因素;经PSM法排除混杂因素,共25对患者匹配成功,匹配后,经logistic回归分析显示,AAR(>0.74)(P=0.005)、年龄(>60岁)(P=0.024)是单发性小肝癌根治性切除患者术后早期复发的独立危险因素。结论术前AAR是单发小肝癌患者术后早期复发的独立危险因素,具有良好的预测价值。

艾司氯胺酮与N-甲基-D-天冬氨酸受体的分子作用机制

采用分子对接和分子动力学方法研究了艾司氯胺酮与N-甲基-D-天冬氨酸受体之间的分子作用机制,结果表明艾司氯胺酮结合于N-甲基-D-天冬氨酸受体的口袋部位,从而改变了蛋白的运动方式,增加了蛋白内部的氢键数目,使蛋白结构更加稳定。本文为阐明艾司氯胺酮的抗抑郁机制和新型抗抑郁药物的开发提供了理论依据。

RGD肽类血小板聚集抑制剂的研究Ⅰ.N─乙酰─精氨酰─甘氨酰─天冬氨酸─苯乙酰胺的合成

活化的血小板暴露膜糖蛋白复合物（GPⅡb／Ⅲa），作为受体识别结合纤维蛋白原（Pg）等粘附蛋白共有的精氨酰─甘氨酰─天冬氨酸（Arg－Gly－Asp，即RGD）序列，导致血小板聚集和血栓形成。人工合成的含RGD多肽可阻断GPⅡb／Ⅲa与Fg等结合，从而抑制血小板聚集和血栓形成。为了开展肽类血小板聚集抑制剂的研究，我们用液相法合成了Ac－Arg－Gly一Asp－NHCH2CH2Ph。初步体外活性实验结果表明，该RGD肽衍生物对ADP诱导的血小板聚集具有较强的抑制作用，在血浆中3h作用强度基本不变。

去甲斑蝥素通过半胱氨酸天冬氨酸酶诱导HeLa细胞凋亡

目的 :研究去甲斑蝥素 (NCTD)通过半胱氨酸天冬氨酸酶 (caspase)途径诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的机制。方法 :采用MTT法、形态学观察、DNA凝胶电泳、乳酸脱氢酶 (LDH)检测及Westernblot检测法。结果 :去甲斑蝥素能显著诱导HeLa细胞发生凋亡 ,caspase -家族、caspase - 3、- 8、- 10抑制剂可以部分地抑制NCTD诱导的细胞死亡。细胞凋亡时caspase - 3、- 8、- 9酶活力升高 ,而且caspase - 3的作用底物 -caspase - 3激活的DNA酶抑制物 (ICAD)蛋白表达下降。结论 :去甲斑蝥素通过激活caspase途径诱导HeLa细胞凋亡。

依赖天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3的肝细胞凋亡在肝硬化大鼠肝缺血再灌注损伤中的作用

目的 :探讨肝硬化大鼠肝缺血 /再灌注 (I/R)损伤是否与肝细胞凋亡相关及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 - 3(caspase- 3)活性变化与肝细胞凋亡的关系。方法 :Pringle法复制肝I/R模型 ,将肝硬化大鼠随机分为 2组 :A组 :单纯肝门阻断 ;B组 :血流阻断 +抑制剂 :N -苯甲基氧化碳酰 -缬氨酸 -丙氨酸 -天冬氨酸 -氟化丙酮(ZVAD -fmk) 15mg/kg ;取无肝硬化大鼠 ,作单纯肝门阻断为C组。各组肝门阻断时间均为 30min ,再灌注 72h。比较 3组的血清天冬氨酸转氨酶 (AST)、肝组织的caspase - 3活性和肝细胞凋亡数。结果 :A组大鼠肝组织caspase - 3活性、肝细胞凋亡数在再灌注后 6h达高峰 ,分别为 (18 1± 1 8) μmolAMC·h-1·g-1(tissue)和 2 0 9%± 4 9% ,与I/R前的 (6 6± 2 0 ) μmolAMC·h-1·g-1(tissue)和 0 5 %± 0 3%相比 ,P <0 0 1。肝细胞凋亡数、caspase - 3的活性随灌注时间的延长而减低 ,两者随时间的变化一致。 3组中A组肝损伤最严重 ,表现为再灌注后 6h血清AST最高 ,与B、C组比较有显著差异 ,大鼠 7d生存率只为 6 2 5 %。进一步研究表明 ,再灌注后 6h ,A组的肝组织caspase - 3活性、肝细胞凋亡数亦明显比B、C组高。结论 :肝细胞凋亡是肝硬化大鼠肝I/R损伤的主要病理改变。

二苯乙烯苷对淀粉样前体蛋白/早老蛋白-1双转基因小鼠脑组织半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3和淀粉样前体蛋白表达的影响

目的观察二苯乙烯苷(TSG)对淀粉样前体蛋白(APP)/早老蛋白-1(PS1)双转基因小鼠脑组织半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)、APP表达水平的影响,探讨其防治AD的可能机制。方法 2014年10月,将50只SPF级、雄性、APP/PS1双转基因小鼠按照随机数字表法分为模型组、石杉碱甲组、TSG低剂量组、TSG中剂量组、TSG高剂量组,每组10只。并选取10只SPF级、雄性、C5B7L/6J小鼠为正常对照组。石杉碱甲组小鼠灌胃给予石杉碱甲0.020 mg/kg,TSG低剂量组、TSG中剂量组、TSG高剂量组小鼠分别灌胃给予TSG 0.033、0.100、0.300 g/kg,模型组、正常对照组小鼠灌胃给予0.9%氯化钠溶液10.000 ml/kg;1次/d,连续给药60 d。采用免疫组化法检测各组小鼠脑皮质和海马区caspase-3阳性细胞数,Western blotting法检测各组小鼠脑组织APP表达水平。结果正常对照组、石杉碱甲组、TSG低剂量组、TSG中剂量组、TSG高剂量组小鼠脑皮质、海马区caspase-3阳性细胞数少于模型组(P<0.05);TSG低剂量组、TSG中剂量组、TSG高剂量组小鼠脑皮质、海马区caspase-3阳性细胞数与石杉碱甲组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。正常对照组、石杉碱甲组、TSG低剂量组、TSG中剂量组、TSG高剂量组小鼠脑组织APP表达水平均低于模型组(P<0.05);TSG低剂量组、TSG中剂量组、TSG高剂量组小鼠脑组织APP表达水平与石杉碱甲组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TSG对APP/PS1双转基因小鼠有明显的治疗作用,其防治AD的机制可能与抑制caspase-3和APP表达、减少β淀粉样蛋白产生、减缓神经元凋亡等机制有关。

聚天冬氨酸抑制庆大霉素致耳蜗自由基产生的实验研究

目的 观察聚天冬氨酸 (polyasparticacid ,PAA)对庆大霉素 (gentamicin ,GM)致耳蜗组织氧自由基产生的影响 ,进一步探讨PAA对GM耳毒性拮抗作用机制。方法 将 88只豚鼠随机分为Ⅰ组 单用GM、Ⅱ组 PAA +GM、Ⅲ组 单用PAA、Ⅳ组 单用生理盐水 ,采用电子顺磁共振法 (electronparamagneticresonancespectroscopy ,EPR) ,直接探测在体给药 1、5、10d后 ,豚鼠耳蜗组织羟自由基(OH-)的产生量 ;同时 ,记录ABR ,用透射电镜观察耳蜗Corti器毛细胞溶酶体形态改变。结果 ①给药 1dⅠ、Ⅱ组耳蜗组织EPR积分值有升高趋势 ;ABR阈值 4组间差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;耳蜗Corti器毛细胞溶酶体形态无明显改变。②给药 5dⅠ组耳蜗组织EPR积分值 (37.74± 4.10 )较其他 3组明显升高 (P <0 .0 1) ,给药 10d 4组间耳蜗组织EPR积分值差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;超微结构Ⅰ组耳蜗Corti器毛细胞皮板下溶酶体改变给药 10d较给药 5d更明显 ,可见溶酶体聚集数量增多 ,体积明显增大 ;Ⅰ组ABR阈值随用药时间延长而升高。结论 PAA对GM致耳蜗组织氧自由基的产生有抑制作用 。

布洛芬对淀粉样β蛋白片段1~40引起的大鼠海马p38 MAP激酶信号传导通路及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶级联的影响(英文)

目的研究布洛芬对淀粉样β蛋白片段1-40 (Aβ1-40)所致大鼠海马损伤的保护作用及作用机制。方法大鼠ig给予布洛芬15 mg.kg-1,连续应用3周,脑室内一次性注射Aβ1-40(5μL,1 mmol.L-1),注射后6h快速取海马CA1区,Western免疫印迹法观察磷酸化丝裂原激活的蛋白激酶的激酶3/6(MKK3/MKK6)、磷酸化丝裂原激活的蛋白激酶p38(p38 MAP激酶)、磷酸化MAPK活化的蛋白激酶2(MAPKAPK2)、磷酸化热休克蛋白p27(Hsp27)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)9, 3,7以及ADP-核糖聚合酶(PARP)的蛋白表达水平的改变。结果脑室内注射Aβ1-40可引起海马CA1区磷酸化的MKK3/MKK6和磷酸化p38 MAP激酶表达明显增加,但可使磷酸化MAPKAPK2和磷酸化的Hsp27表达降低,这些改变伴随有caspase级联的激活。此外,也发现Aβ1-40可使海马CA1区完整的PARP蛋白表达明显减少,而劈切PARP(分子量为89 ku)表达明显增加。布洛芬可明显对抗Aβ1-40引起的磷酸化的MKK3/MKK6和磷酸化p38 MAP激酶表达增加,上调磷酸化MAPKAPK2和磷酸化的Hsp27表达水平,同时抑制Aβ1-40引起的caspase级联激活和PARP的劈切。结论布洛芬通过抑制Aβ1-40引起的磷酸化的MKK3/MKK6和磷酸化p38 MAP激酶表达,明显增加以及上调磷酸化的Hsp27表达水平,对抗Aβ1-40引起的海马的神经细胞损伤。

高分子聚乙烯和氧化铝陶瓷磨损颗粒诱导细胞凋亡及与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3信号传导的相关性

目的:观察动物体内由高分子聚乙烯和氧化铝陶瓷磨损颗粒诱导的生物反应过程中细胞凋亡的动态变化,以及与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3信号传导的相关性。方法:实验于2005-09/12在南昌大学医学院病理科和动物实验中心完成。①选取健康昆明种小鼠48只,随机数字表法分成3组:模型对照组、氧化铝陶瓷磨损颗粒组、高分子聚乙烯磨损颗粒组,16只/组。②各组均建立Air-pouch动物模型,注射部位无红肿、流脓、硬结及渗出为模型构建成功。氧化铝陶瓷磨损颗粒组向air-pouch内注射经超声分散后的氧化铝陶瓷磨损颗粒悬液3mL,高分子聚乙烯磨损颗粒组注射高分子聚乙烯磨损颗粒悬液3mL,模型对照组注射等量磷酸盐缓冲盐水。③于术后第3,7天每组各处死8只小鼠,取air-pouch囊壁组织制备切片,光镜下观察囊壁组织结构的变化,TUNEL原位检测细胞凋亡情况,免疫组化染色检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性细胞率的表达。结果:48只小鼠均进入结果分析。①囊壁组织结构变化观察结果:光镜下氧化铝陶瓷磨损颗粒组、高分子聚乙烯磨损颗粒组均可见大量巨噬细胞浸润和增殖,术后第7天时囊壁组织细胞计数结果高分子聚乙烯磨损颗粒组明显高于氧化铝陶瓷磨损颗粒组、模型对照组[(7875±402),(5134±256),(2104±176)个/mm2;P<0.05,P<0.01]。②凋亡细胞TUNEL原位检测结果:氧化铝陶瓷磨损颗粒组、高分子聚乙烯磨损颗粒组均存在TUNEL染色阳性细胞,细胞核着染成棕褐色或棕色,模型对照组未见明显组织细胞反应。③半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达情况:每高倍视野阳性细胞率氧化铝陶瓷磨损颗粒组、高分子聚乙烯磨损颗粒组显著高于模型对照组,与凋亡指数均呈显著正相关(r=0.752);高分子聚乙烯磨损颗粒组术后第7天时最多,达(28.57±5.62)%。结论:高分子聚乙烯和氧化铝陶瓷磨损颗粒均能诱导细胞凋亡,并且高分子聚乙烯磨损颗粒诱导细胞凋亡程度高于氧化铝陶瓷磨损颗粒。细胞凋亡参与了假体无菌性松动的病理过程,且与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的激活有关。