适合转录组测序的葡萄叶片总RNA试剂盒提取法的改进

RNA试剂盒法是获取植物高质量RNA样品的常用技术,针对3种常见RNA提取试剂盒在红地球葡萄叶样品RNA提取效果进行评估和优化,以期找到适合红地球葡萄叶片RNA表达谱测序需求的高质量RNA提取策略。试验依据3种试剂盒推荐时间和条件进行RNA提取,并对时间等条件进行优化,比对了优化前后RNA质量。结果显示,试剂盒经优化后的方法提取的RNA收率高,完整性好,OD260/OD280在1.8-2.2之间,OD260/OD230大于2,28S与18S条带清晰完整,RNA-Seq测序质量及基因覆盖度符合要求。在红地球葡萄叶片上的RNA提取结果表明,延长提取试剂与样品的接触时间操作可以显著提高RNA提取质量(纯度/完整性)。

改良的一步热酚法及Trizol试剂盒提取组织中RNA的比较

目的 :比较改良的一步热酚法及Trizol试剂盒提取组织中RNA的差别。方法 :应用两种方法分别提取 2 0例兔肝脏的总RNA ,对所提RNA的产率、纯度及完整性进行鉴定。结果 :对比两种方法所提的RNA的产率、纯度及完整性 ,均无显著性差异 ,且RT_PCR产生均扩增出了 β_actin的目的条带。 结论 :采用改良一步热酚法较之Trizol试剂盒更具有简便经济的特点 。

RNA的提取及3种RNA提取试剂盒的比较

概述了RNA的提取以及一些注意事项,并对实验室常用的3种RNA提取试剂盒进行了比较。

烟草RNA提取方法的优化及冰盒储存时间的探讨

烟草作为一个模式植物在分子生物学研究中发挥着重要的作用，其总RNA的提取是后续分子生物学研究的前提和关键之一。针对过柱型的RNA提取试剂盒在有效的清除烟草中糖类、蛋白质及次生代谢物的同时，影响了RNA产量和浓度，以及远距离携带液氮取材困难的问题，设置不同提取方法和冰盒不同储运时间处理，对天根RNA simple总RNA提取试剂盒进行了优化，并对冰盒贮存烟叶时间与RNA提取质量的关系进行了探讨。结果表明：优化试剂盒法获得了高浓度高质量的烟草总RNA。经琼脂糖电泳检测，利用该方法提取的烟草总RNA，条带清晰、无拖尾现象，28S与18S 的比例约为2∶1。紫外吸收值的测定表明，所提取的烟草总RNA的A 260/A 280的值在1．8～1．9，浓度显著高于原方法；而冰盒能在5 h内保证所取样品RNA 的完整性，适宜于短途运输储存。

两种从多种组织提取总RNA的方法比较

本研究通过Trizol法和DNA清除/RNA吸附试剂盒法从小鼠的心、肝、脾、肺、肾和肠等组织中提取总RNA,有针对性地分析比较RNA的得率、质量以及提取效率。结果显示,Trizol法提取的各种组织的RNA得率略高于试剂盒法,其中Trizol法提取的脾脏组织的得率更高(2.76ng/g),试剂盒法提取的脾脏组织的得率为2.59ng/g;Trizol法提取的各种组织中A260/A280值在1.95~2.01之间,表明其总RNA纯度均较高,试剂盒法提取的各种组织中A260/A280值在2.04~2.13之间,提示其总RNA可能有轻微的降解;试剂盒法提取RNA的时间仅为Trizol法的1/7。以上结果表明,Trizol法和试剂盒法均能有效提取组织总RNA,但存在优势差异。其中,Trizol法获得RNA的得率更高,质量更好;试剂盒法提取RNA的效率更高且更加安全。

草珊瑚叶片总RNA提取方法及效果的比较研究

采用CTAB法、CTAB-LiCl法、CTAB-Trizol法、Trizol法、天根RNA提取试剂盒及百泰克RNA提取试剂盒提取草珊瑚（Sarcandraglabra）叶片总RNA，并通过微量紫外分光光度计、电泳检测等对提取的结果进行了分析比较。结果表明：CTAB-LiCl法和天根RNA提取试剂盒比较适合提取草珊瑚叶片的总RNA。这两种方法提取的总RNA的完整性和纯度较高，无明显的蛋白质及其他杂质污染，OD260/OD280的值在1.9～2.1，OD260/OD230在2.0～2.4。获得质量高、完整性好、纯度高的总RNA，为后续构建cDNA文库以及相关基因的克隆提供了试验基础。

葡萄总RNA提取方法的研究

针对葡萄组织中多酚、多糖类物质含量较高的特点,比较了改进SDS/酚法、异硫氰酸胍法和市售总RNA提取试剂盒等不同的提取方法,3种改进方法均能从葡萄幼嫩叶片中提取到总RNA。其中改进的SDS/酚法能有效抑制酚类物质和多糖对总RNA提取的影响,能够从成熟的叶片和完熟果实的果皮中获得质量高、完整性好的总RNA,28SrRNA亮度约为18SrRNA的2倍,A260/A280介于1.8～2.0之间,A260/A230大于2.0,且总RNA产率高,其中幼叶总RNA产率为261.20μg/g,成熟叶产率为191.40μg/g,完熟果皮产率为31.50μg/g,完全适于进行DDRT-PCR、Northernbolt和cDNA文库构建等研究。且该方法具有快速、简单、有效的特点。

非洲菊花瓣总RNA提取方法的改进

利用异硫氰酸胍一步法和植物总RNA提取试剂盒 (RNeasyPlantMiniKit)提取非洲菊 (Gerberahy brida)花瓣中总RNA时存在多糖的干扰。实验中利用异硫氰酸胍一步法提取总RNA ,在RNA沉淀后 ,再次加入适量变性液 ,冻融 2次 ,再加热至 45℃使RNA完全溶解 ;试剂盒提取时 ,适当延长各提取步骤的离心时间 ,并增加DEPCH2 O溶解RNA的时间。通过以上操作方法的改进可排除多糖的干扰 ,得到高质量的总RNA。为进一步利用Northern杂交技术研究非洲菊中花色素苷基因的表达 ,进行花色改良提供了方便、有效的实验手段。

烟草不同组织总RNA的提取方法初探

【研究目的】寻找烟草各个组织总RNA最佳的提取方法。【方法】以烟草K326的根、茎、叶、蕾、花和种子为材料,分别采用试剂盒法、Trizol法和CTAB法提取烟草6个组织总RNA进行对比。【结果】烟草不同组织总RNA提取方法有所不同,试剂盒法和Trizol法只能提取出根、茎、叶、蕾和花的总RNA,而不能提取种子总RNA;CTAB法能提取出6个组织的RNA。3种方法提取的RNA质量好,均能满足RT-PCR以及后续实验的要求。【结论】试剂盒法较Trizol法和CTAB法简单、快捷,适合于烟草除种子以外其余组织总RNA快速提取,CTAB法适合烟草所有组织总RNA提取。

三种方法提取不同品种梨叶片总RNA

为筛选出提取梨叶片总RNA的最佳方法,以梨极矮化突变体和苹果梨为材料,采用柱式植物RNAout试剂盒、SDS法和改良CTAB法提取其叶片总RNA并比较提取效果。结果表明,改良CTAB法能有效抑制酚类物质和多糖对总RNA提取的影响,获得纯度高、完整性好的总RNA,其28 S rRNA条带亮度高于18 S rRNA,所提取的RNA适合下一步的研究使用。

四种副溶血弧菌总RNA提取方法的比较

副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是一种革兰氏阴性嗜盐菌。提取高质量的RNA是研究副溶血弧毒力基因表达与其致病性和环境适应性的基础。本研究分别用SDS法、Trizol法,PureLinkTM RNA Mini Kit和Uniq-10柱式Trizol总RNA抽提试剂盒提取六株副溶血弧菌的总RNA,用普通琼脂糖凝胶电泳和核酸测定仪检测RNA的质量,并用RT-PCR法对四种提取方法进行比较。研究结果表明,Trizol法和Pure-LinkTM RNA Mini Kit简单快捷,提取的总RNA完整性好,纯度高,可用于后续实验的分子生物学研究;而Trizol法更适用于普通实验室细菌RNA的提取。

枣花蕾总RNA提取方法的比较

为了探究枣花蕾总RNA提取的最优方法,以沾化冬枣的花蕾为材料,利用改良CTAB法、Trizol法和2种RNA提取试剂盒(PureLinkTMRNA小提试剂盒和北京奥莱博生物技术有限公司提供的植物RNA提取试剂盒)分别提取花蕾的总RNA,并对RNA浓度和电泳图谱进行比较分析,利用奥莱博生物技术有限公司提供的植物RNA提取试剂盒法可提取到纯度较高,完整性好的总RNA,并可用于Northern杂交、cDNA文库构建和半定量RT-PCR等分子生物学试验。

不同植物组织RNA提取方法的比较分析

不同的植物组织都有较优化RNA提取方法。本文针对蜡质的红掌叶片、含糖较多的百合花瓣、含色素较多的万寿菊花瓣,使用改良CTAB法、Trizol法、快速RNA提取试剂盒法提取RNA,比较提取效果,以确定适合几种植物组织的最优RNA提取方法。结果表明:改良CTAB法提取的红掌叶片总RNA,Trizol法提取的百合花瓣总RNA和万寿菊总RNA,28SRNA和18SRNA条带都较清晰,且28SRNA亮度较18SRNA明亮,效果较好,部分RNA提取试验中5SRNA也较明亮,说明提取的总RNA有部分降解,但总RNA质量符合后续试验要求。RT-PCR检验符合上述结论。

脂肪组织RNA提取方法的改进

本试验以猪脂肪组织为材料,应用TRIzol、V-gene、H.Q.&.Q三种总RNA提取试剂盒分别提取脂肪组织RNA,发现直接按照试剂盒说明书操作提取的RNA效果不理想。通过反复试验,分别改进了提取过程中的部分操作步骤,结果表明:三种试剂盒操作方法改进后与改进前相比,提取RNA的纯度和得率表现为差异极显著(P<0.01);三种试剂盒操作方法改进后提取RNA的纯度差异不显著(P>0.05),但在得率方面,Trizol比其它两种高,表现为差异极显著(P<0.01)。三种试剂盒操作方法改进后提取的RNA经RT-PCR扩增猪-βactin基因,电泳结果显示,扩增条带清晰、特异,说明提取的RNA完全符合后续的分子生物学实验要求。

三色堇花瓣总RNA3种提取方法的比较

分别采用TransZol plant法、改良Trizol法和改良CTAB法提取三色堇花瓣的总RNA,并用琼脂糖凝胶电泳和紫外光谱对其提取效果进行检测。结果表明,TransZol plant法提取的总RNA浓度低,且杂质较多;改良Trizol法和改良CTAB法提取的总RNA纯度较高。3种总RNA提取方法中,以改良Trizol法提取的总RNA浓度和纯度最高,D260 nm/D280 nm在1.83～2.03之间。以改良Trizol法提取的总RNA反转录合成的cDNA为模板,能扩增出预期长度的基因片段,说明改良Trizol法提取的总RNA质量高,可用于后续的分子生物学试验。

茶梅花瓣总RNA提取方法的比较和分析

总RNA的纯度和完整性对植物分子生物学实验至关重要,为了探索更适合茶梅花瓣总RNA的提取方法,本研究分别利用CTAB多级沉淀法、改良的异硫氰酸胍法、改良的热硼酸法、Trizol法和EASY spin植物RNA提取试剂盒法等5种方法提取茶梅花瓣总RNA,并进行了对比分析。结果发现EASY spin植物RNA提取试剂盒法是最为简单、快速、高效的方法,该方法得到的RNA条带在琼脂糖凝胶上有清晰的28S、18S和5S 3条带,且超微量分光光度计测量的A_(260/280)、A_(260/230)均在允许范围内,表明该方法得到的RNA完整、质量高。CTAB多级沉淀法得到的RNA质量次之。本研究为今后有效开展茶梅分子生物学研究提供技术便利,并为其他花卉植物RNA的提取提供必要的参考。

一种简易快速高效提取麻疯树营养器官中RNA的方法

以麻疯树根、茎、叶为材料,用4种方法提取麻疯树中总RNA。琼脂糖凝胶电泳和紫外光谱分析结果表明,改良的张年辉法提取的RNA比张年辉法提取的完整性更好,时间更短,条件更粗放;试剂盒A提取的RNA多数降解;试剂盒B几乎不能提取其RNA。RT-PCR分析表明,以改良的张年辉法提取的根、茎、叶中RNA作模板也可成功地进行RT-PCR扩增。据此,我们认为用简易、快速、高效的改良张年辉法提取麻疯树根、茎、叶中RNA为最佳选择。

草莓果实总RNA提取方法的比较

为建立草莓果实总RNA的提取方法,针对草莓成熟果实中富含多糖、多酚和色素等次级代谢物质,总RNA提取难度大的特点,比较改良的EASYspin植物RNA提取试剂盒法和改良的CTAB法提取草莓果实中总RNA的质量。通过琼脂糖凝胶电泳和核酸蛋白测定仪(Nano Drop 2000)检测2种方法提取总RNA的浓度、纯度及完整性等。改良的EASYspin植物RNA提取试剂盒法和改良的CTAB法都能够完成草莓果实总RNA的提取,电泳检测在28S和18S处呈2条清晰的条带,OD260/OD280值和OD260/OD230值均在2.0左右;改良的EASYspin植物RNA提取试剂盒法成本较高,且提取总RNA质量劣于改良的CTAB法,但是EASYspin植物RNA提取试剂盒法操作简便,安全可靠,节省时间。通过RT-PCR验证,2种方法所获得的草莓果实总RNA质量较好,可达到分子生物学试验对RNA质量的要求。

核桃内果皮RNA提取方法研究

以核桃果壳硬化期的内果皮为试材,针对核桃内果皮木质化程度高且富含多酚多糖的特点,比较CTAB法Ⅰ、CTAB法Ⅱ和试剂盒3种方法提取核桃内果皮RNA的效果。结果表明:3种方法提取的RNA均可见3条带。CTAB法Ⅰ提取的RNA略微拖带,OD_(260)/OD_(280)为1.540,RNA产率为75.9μg/g,RNA完整性差,质量低;CTAB法Ⅱ的RNA图谱较完整,但亮度较弱,OD_(260)/OD_(280)为1.801,产率为86.1μg/g,但RNA提取过程耗时太长;试剂盒法提取的RNAOD_(260)/OD_(280)为2.055,RNA产率96.4μg/g,RNA图谱清晰、稳定、明亮,证明得到的RNA多糖及酚类等去除较彻底,纯度、完整性和产率均较高。因此,应用复杂植物总RNA提取试剂的试剂盒法可获得高质量与高产率的核桃内果皮总RNA,完全满足后续分子生物学研究。

罗布麻总RNA提取方法比较研究

以Trizol法、改进SDS法及RNA plant plus Reagent试剂盒法提取罗布麻的总RNA,并通过紫外分光光度法和凝胶电泳检测对其提取效果进行比较分析,以筛选出罗布麻总RNA最佳提取方法。结果表明:Trizol法无法有效获得罗布麻总RNA,有较为显著的降解现象;改进SDS法提取的罗布麻RNA总量较少、浓度低,且试验重复性差;RNA plant plus Reagent试剂盒法提取的RNA质量好,纯度高,完整性强,可直接作为后续相关分子生物学试验材料。