从人源大容量天然抗体库中筛选到抗禽流感病毒H5N1单链抗体

目的从人源大容量天然抗体库中筛选到抗禽流感病毒H5N1单链抗体。方法运用噬菌体表面呈现技术,用纯化的H5N1禽流感血凝素蛋白HA(A/Anhui/1/2005)对人源大容量天然抗体库进行富集筛选,对获得的阳性克隆进行序列分析,并将其克隆入携带人源Fc段的表达载体,实现scFv-Fc融合抗体的分泌型表达。用ELISA、IFA对所获人源单抗的功能特性进行鉴定。结果经过3轮富集筛选,共获得了82株特异性结合H5N1禽流感病毒HA的人源scFv单链抗体,分别属于5个不同的抗体序列,ELISA、IFA表明从抗体库筛选获得的5株人源单抗与禽流感病毒H5N1及其HA具有较好的特异性,而与甲1型和甲3型人流感病毒无交叉反应。结论从人源大容量天然抗体库中利用高通量的筛选策略在短时间内获得抗禽流感病毒H5N1人源单抗,对于禽流感的紧急预防和治疗具有重要意义。

抗白念珠菌天然抗体的检测与分析

目的检测正常机体内是否存在抗白念珠菌天然抗体。方法取饲养于无菌条件下的C57BL/6小鼠和SCID小鼠外周血,ELISA和流式细胞术检测血清中抗白念珠菌IgM和IgG抗体的水平。结果ELISA结果显示,与SCID小鼠相比,C57BL/6小鼠血清中存在一定滴度的抗白念珠菌IgM,但没有抗白念珠菌IgG;经白念珠菌预先吸附后,正常血清IgM与白念珠菌的结合明显减弱。流式细胞术分析显示,C57BL/6小鼠血清与白念珠菌的反应明显增强。结论正常机体内天然存在与白念珠菌结合的以IgM型为主的天然抗体。

人抗体Fab段天然抗体库的建立

目的:提取健康人外周血淋巴细胞的mRNA,利用反转录PCR方法,建立一个大容量的人抗体Fab段的天然抗体库。方法:收集健康者外周血,提取淋巴细胞,以淋巴细胞mRNA为模板,扩增人抗体Fab段,连入载体pComb3内,利用电转化的方法,构建噬菌体抗体库。结果:最终建立了重链库为1.73×107,轻链库为8.52×104的天然抗体库,并利用酶切鉴定计算出实际库容为重链库1.21×107,轻链库4.26×104,所以理论上所建天然噬菌体抗体库总的库容量可以达到5.15×1011。结论:成功构建了一个大容量的完全人源化的天然抗体库。

异种胸腺修饰对大鼠抗豚鼠天然抗体产生的影响

为观察异种胸腺修饰对大鼠抗豚鼠天然抗体产生的影响 ,将供体豚鼠和受体SD大鼠随机分成对照组 (a组 )、全身照射组 (b组 )、照射 +胸腺注射组 (c组 ) ,a组大鼠腹腔内注射经处理的豚鼠脾淋巴细胞 (5× 10 6个 ) ,7d后流式细胞仪法检测抗豚鼠IgM及IgG类天然抗体水平的变化 ,b、c组在腹腔注射异种抗原前 17d接受全身照射 ,c组大鼠另在全身照射后 3d接受胸腺内豚鼠脾淋巴细胞注射。结果表明 :a组和b组中 ,腹腔注射后两类天然抗体的水平均明显上升 (P <0 0 1) ,c组中 ,腹腔注射后IgM类的水平亦明显上升 (P <0 0 1) ,而IgG类上升受抑。提示异种胸腺修饰能抑制IgG类天然抗体的生成 ,但对IgM类天然抗体的产生无明显影响。

胆固醇天然抗体的检测与分析

目的检测不同年龄正常人血清IgM抗体以及单克隆天然抗体2H8、3B4、4G2对胆固醇的结合。方法应用间接ELISA法检测新生儿(脐带血)、幼儿、成年人及老年人血清IgM对胆固醇的反应性及其滴度,ELISA和流式细胞仪分析单克隆天然抗体对胆固醇的结合。结果脐带血中即存在与胆固醇反应的IgM抗体,但其滴度明显低于其它3个年龄组,而其他3组的抗体滴度无明显差异;单抗3B4与胆固醇发生较强的反应。结论正常人血清中天然存在着与胆固醇发生反应的IgM型自身抗体,天然来源的单克隆抗体3B4可以与胆固醇结合,从而为进一步研究天然抗体在脂质代谢中的作用奠定了基础。

肾移植术后天然抗体对受者预后影响的相关性研究

目的探讨肾移植术后天然抗体(natural antibodies,Nabs)对移植肾长期存活与排斥反应的影响。方法回顾性分析44例发生抗体介导排斥反应肾移植受者的病例资料,用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测Nabs,根据Nabs的产生情况将受者分成Nabs+组(10例)和Nabs-组(34例),分别记录受者移植术后移植物存活情况,并同时观察发生排斥反应时各组肾功能和移植肾病理表现的差异。结果Nabs+组移植术后移植物存活率明显低于Nabs-组,差异有统计学意义(P=0.044)。移植后Nabs也与肾活检标本中移植物损伤的组织学征象的平均Banff评分增加相关。Nabs+组与Nab-组相比,肾小球滤过率估计值(estimated glomerular filtration rate,eGFR)有所下降,但差异无显著性(P>0.05)。结论Nabs与移植肾损伤及肾功能衰竭相关,从而提示Nabs可能参与了排斥反应的免疫机制。

单克隆天然抗体3B4抑制白念珠菌芽管形成的机制初探

目的观察单克隆天然抗体3B4对白念珠菌芽管形成的影响,并进一步分析其结合于白念珠菌的部位及成分,探讨其发挥作用的机理。方法将纯化的单克隆抗体3B4与白念珠菌共孵育,计数形成芽管的数量。采用间接免疫荧光方法和流式细胞仪分析抗体3B4与白念珠菌结合的部位;将白念珠菌用蛋白酶K、氢氧化钠等分别处理后,观察3B4对其的结合情况,初步确定其结合成分。结果相对于同型对照,抗体3B4作用组白念珠菌芽管生成率显著下降并有统计学差异。流式细胞仪和间接免疫荧光检测均发现3B4可以与白念珠菌的芽管相结合,而与酵母相的结合很弱;蛋白酶K、氢氧化钠等处理后,3B4对芽管相和酵母相白念珠菌均不发生结合,提示抗体3B4结合的成分是主要表达于菌丝相的一种糖蛋白。结论单克隆天然抗体3B4可能通过与主要表达在芽管上的一种糖蛋白结合而抑制其芽管形成。

笼养恒河猴血清天然抗体IgM的检测

采用流式细胞术连续监测 8只幼年猴自出生后 1月～ 5月天然抗体的演变 ,并检测 9只成年猴天然抗体IgM水平。幼年猴 1月龄前天然抗体IgM阳性细胞比例较低 (9 9%± 6 3% ) ,到 3月龄时可达成年猴的 4 0 % ,5月龄时接近成年水平。 9只成年猴天然抗体IgM阳性细胞比例变化幅度很大 ,从 94 9%到 2 6 3% (均数 77 3%± 2 1 5 % )。提示 3月龄前幼年猴可用作避免超急性排斥反应的受体模型。不管是成年猴还是幼年猴 ,被选择为实验受体进行移植研究时 ,应事先对其体内的天然抗体水平进行检测 ,以确保实验的可比性。

大容量人天然抗体库的构建、鉴定及初步应用

从未经主动免疫的健康志愿者的外周血淋巴细胞中提取总RNA,用RT-PCR扩增人抗体重链(VH)和轻链(VL)可变区基因,得到了6种VH家族基因,11种VL家族基因,这些抗体基因家族覆盖了人抗体基因多样性的95%以上。采用改进的SOEPCR法将VH基因和VL基因连接成人单链抗体(scFv)基因,并克隆到噬菌粒载体pCANTAB5E中,将连接产物电转化大肠杆菌TG1,经辅助噬菌体M13KO7超感染,构建了库容为5.58×109的噬菌体单链抗体库。采用BstNI酶切法证明,构建的噬菌体单链抗体库具有良好的多样性。以TNF-α为靶,从该抗体库中筛选到了抗TNF-α抗体,这说明该抗体库可用于人源抗体的筛选。

异种器官移植领域中“天然抗体”的研究现状

异种器官移植目前需要解决的问题仍然是超急排斥反应。受者体内预存的天然抗体在超排反应中起关键作用。本文对天然抗体的概念、形成过程、种类。

人抗猪胰岛细胞天然抗体同种型的分析

为检测人抗猪胰岛细胞天然抗体的同种型 ,采取 18份胰岛素依赖型糖尿病 (IDDM)患者血清及 2 0份正常人血清分别与杂种猪胰腺组织的冰冻切片孵化后 ,再用免疫荧光标记的羊抗人 Ig G、Ig M单克隆抗体染色。 8份 IDDM血清和 8份正常人血清中含有直接针对猪胰岛细胞的 Ig G型抗体 ;4份 IDDM血清和 6份正常人血清中含有 Ig M型抗猪胰岛细胞抗体。结果表明 :人抗猪胰岛细胞天然抗体的同种型是 Ig G和 Ig

四种天然抗体在不同年龄性别正常人体的分布

目的:探讨抗卵核抗体、抗卵清抗体、抗牛血清抗体和抗伤寒多糖抗体在不同年龄性别人群中的分布特点及与年龄性别的关系。方法随机挑选体检正常人,ELISA检测四种抗体水平。结果抗卵核抗体(P<0.01)和抗伤寒多糖抗体(P<0.05)在不同年龄组差异有统计学意义,且在老年组中该抗体对数单位含量偏低;其余两种抗体(P>0.05)在不同年龄组差异无统计学意义。这四种抗体在不同性别组差异均无统计学意义(P>0.05)。结论抗卵核抗体和抗伤寒多糖抗体受年龄影响,其它两种抗体未发现这种现象。四种抗体均不受性别因素影响。

洗提低亲合力非特异性天然抗体后降低供血者中HIV1/2抗体EIA反应假阳性率

背景 用EIA检测供血者血清中特异性针对HIV抗原的抗体对于保证输血安全是十分重要的。有少数但又很重要的一些供血者血清(0.1-0.3％)EIA检测为假阳性,这些供血者必须永远被拒绝献血,因而导致操作和公众关系上一系列问题。

豚鼠肾灌注模型及其吸收大鼠天然抗体的实验研究

豚鼠肾灌注模型及其吸收大鼠天然抗体的实验研究［邹良建等．中华器官移植杂志，１９９７；１８（４）∶２１０］本实验建立了豚鼠肾灌注模型，观察了３２例豚鼠肾灌注后ＳＤ大鼠天然抗体的动态变化。结果３２例豚鼠肾灌注手术均获成功，ＳＤ大鼠体内天然抗体于灌注后１５...

人群中苏云金杆菌187、1897菌株天然抗体的检测

用“对流免疫电泳法”检测２１７例人群血清中苏云金杆菌１８７、１８９７菌株的天然抗体，阳性率为１８７：１．４％、１８９７：０．９％，其中１２例经常接触这两种微生物的实验室工作人员的血清都为阴性，表明它们对人体均无大的影响．

汗水含天然抗体可杀菌防癌

人们汗水里面含有一种天然抗体,叫做"皮西丁"蛋白(Dermicidin),可杀死大肠杆菌、葡萄球菌、鹅口疮酵母菌等有害细菌.