酸性天然凝胶电泳法研究HIV进入抑制剂ADS-J1的作用机制

目的ADS-J1是通过虚拟筛选从20000个化合物中获得的靶向HIVgp41的小分子HIV进入抑制剂。该研究探讨ADS-J1与gp41的结合位点和作用机制。方法采用酸性天然聚丙烯酰胺凝胶电泳技术(AN-PAGE),研究ADS-J1与衍生于gp41不同功能区的多肽的结合。结果此前采用的天然聚丙烯酰胺凝胶电泳(N-PAGE)等方法,由于不能显示衍生于gp41的N-端多肽,未能确定ADS-J1的作用位点。该研究建立的AN-PAGE技术,能直接显示N-端多肽的条带,证实ADS-J1能与gp41的N-端螺旋重复序列(NHR)复合螺旋核中的深穴结合,从而抑制gp41六螺旋束结构的形成,而且深穴中第574位的赖氨酸残基(K574)与ADS-J1的抑制作用密切相关。结论ADS-J1通过与gp41 NHR靶穴中的K574结合,抑制gp41六螺旋束结构的形成,从而抑制HIV进入靶细胞。此外,该研究建立的AN-PAGE技术,为研究靶向Ⅰ型包膜病毒的病毒进入抑制剂的作用机制提供了一个简便有效的实验方法。

聚丙烯酰胺凝胶上SDH的活染

精心选择了电泳系统及活染条件,得到较清晰的活染结果.从活染胶板上发现玉米叶SDH 存在两种形式,而根部只有一种形式.可能在叶及根部都存在的那种SDH

苏云金杆菌00-50-5发酵上清液对南方根结线虫杀虫活性研究

室内条件下,分别测定了苏云金杆菌Bt 00-50-5菌株液体和固体发酵物对南方根结线虫的毒力效果。结果显示,牛肉膏蛋白胨液体发酵法在72h所得上清液的毒性最高,南方根结线虫死亡率达到99.0%,而固体麸皮发酵物对线虫的最高毒性为发酵8h,南方根结线虫死亡率为89.0%。液体发酵上清液经葡聚糖凝胶G-75柱层析分离,柱下物在280nm处的吸收值呈现出4个峰I、II、III和IV,其值0.601,1.475,1.641和0.392,其中峰II、III、IV处收集的蛋白对南方根结线虫有毒杀作用,分子量最小的IV蛋白杀线虫活性最高。上清液天然聚丙烯酰胺凝胶电泳分离杀虫蛋白结果显示6条清晰蛋白带,其中37kDa蛋白含量最多。

改良Blue Native PAGE方法的建立及对注射用A型肉毒毒素活性药用成分天然结构的分析

建立具有较高分辨率的温和的Blue native PAGE方法,用于分析国产注射用A型肉毒毒素(商品名为衡力■)复合物活性药用成分(Pharmaceutical active ingredient,API)天然结构。通过改进样品处理方法解决蛋白样品分解的问题。由7种电极缓冲液构成8个组合,从中筛选出最优组合并改进染色方法,电泳结果的分辨率明显提高。以基于改良Blue native PAGE进行二维SDS-PAGE,以基于二维电泳的Western blotting对各组分定性分析,以改良对Blue Native PAGE对A型肉毒毒素API天然结构相对分子质量进行测定。改良Blue Native PAGE方法能够分析注射用A型肉毒毒素API天然结构,明确了注射用A型肉毒毒素API天然结构的存在形态及组成,注射用A型肉毒毒素API相对分子质量为(918±18. 38) k。