维生素E聚乙二醇琥珀酸酯乳化α-生育酚琥珀酸酯纳米乳的制备及体外抗肿瘤细胞活性评价

目的探索以维生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS)做乳化剂,制备α-生育酚琥珀酸酯纳米乳(T-NE),对纳米乳进行处方优化、制备方法以及制剂学性质考察,并且评价其体外抗肿瘤细胞活性。方法自2022年1―4月,先后通过水滴定法绘制伪三元相图,根据纳米乳区域确定最优处方,再采用乳化蒸发法制备,并对其进行了理化性质评价,包括类型确定、形态学考察、粒径大小和分布、Zeta电位、载药量和稳定性,并通过细胞活力实验(MTT)进行体外抗肿瘤细胞活性评价。结果T-NE的最优处方为α-生育酚琥珀酸酯(α-TOS)、维生素E、TPGS、聚乙二醇400质量比1∶1∶2∶1;所制得T-NE为O/W型,外观呈类球形且无粘连;载药量为(20.15±1.91)g/L,粒径为(258.8±3.48)nm,多分散指数(PDI)为0.136±0.03,Zeta电位值为(-27.0±0.46)mV;4℃和25℃条件下放置稳定性良好,且适宜室温长期贮存;与游离的α-TOS药物溶液相比,T-NE对人乳腺癌细胞系(MCF-7)及人卵巢癌细胞系(A2780)细胞具有更强的抑制作用,IC50值分别为16.68μmol/L和7.50μmol/L,且空白纳米乳基本无毒性作用。结论该实验制备的T-NE外观均一呈类球形,粒径较小且分布均匀,载药量高稳定性好,同时表现出比游离α-TOS更为优异的抗肿瘤细胞活性作用,具有良好的开发前景。

包被siRNA的叶酸改性聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯纳米材料的制备及其表征

目的构建可以稳定负载并有效释放siRNA的叶酸改性聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯(FA-TPGS)纳米材料并观测其对小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞毒性和剪切型X-框结合蛋白1(XBP1s)表达水平的影响。方法将FA-TPGS与罗丹明B(RhB)标记的XBP1 siRNA按照5∶1比例混合均匀得到包被XBP1 siRNA的纳米复合物(FT@XBP1)。通过透射电镜、动态光散射、紫外可见光谱和荧光光谱分析对FT@XBP1表征,同时计算XBP1 siRNA从FT@XBP1纳米载体中释放的药量。应用扫描电镜(SEM)、CCK-8以及流式细胞术检测FT@XBP1的细胞毒性,并应用Western blot法检测FT@XBP1对小鼠巨噬细胞RAW264.7中XBP1s的抑制作用。结果FA-TPGS与siRNA具有良好的结合作用,其中FT@XBP1的平均粒径为(200±20)nm。相对释放结果提示,酸性环境(pH 5.0)有利于siRNA从FT@XBP1中释放。CCK-8和凋亡实验均显示,FT@XBP1对RAW264.7细胞的增殖和凋亡影响较小,且FT@XBP1处理可显著抑制RAW264.7中XBP1s蛋白的表达(P<0.001)。结论叶酸修饰的TPGS纳米载体可有效包载XBP1 siRNA,抑制巨噬细胞XBP1s表达且细胞相容性良好。

三乙胺催化合成维生素E琥珀酸单酯的研究

以三乙胺为催化剂、维生素E(VE)和琥珀酸酐为原料合成维生素E琥珀酸单酯。采用正交设计法进行工艺优化,并用HPLC法对产物进行分析,优化的反应条件为:丙酮为溶剂,n(VE):n(琥珀酸酐)=1:1．5,催化剂用量0．2 mL,反应时间为8 h,温度为50℃,酯化率可达88．34％,产物纯度>96％。

天然维生素E琥珀酸酯的制备

维生素E琥珀酸酯有比维生素E更强的化学稳定性,同时其还有抗癌功效,是水溶性维生素E———TPGS的基本原料。介绍了用天然维生素E酯化制备维生素E琥珀酸酯的方法,选用三乙胺作为催化剂制备维生素E琥珀酸酯。通过实验优化后得到优化的工艺条件为(原料50 g):反应时间为4.0 h、琥珀酸酐用量为原料维生素E的150%(W/W)、催化剂用量为5.0 mL、反应温度为55℃。在优化的工艺条件下,维生素E酯化率为93.91%。

蛋白激酶R样内质网激酶参与维生素E琥珀酸酯激活人胃癌细胞内质网应激和自噬的调控

目的:研究蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)在维生素E琥珀酸酯(VES)激活人胃癌细胞发生内质网应激(ERS)与自噬中的影响。方法:体外培养人胃癌细胞系MKN28和MKN45,通过CCK-8法绘制细胞生长曲线,根据生长曲线确定用药剂量。不同剂量的VES处理细胞24 h后,qRT-PCR检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和beclin-1的mRNA表达,Western blot检测GRP78、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、beclin-1及PERK的蛋白表达。用2μmol/L GSK2606414(GSK)抑制PERK,设置对照组、GSK组、VES组和VES+GSK组,Western blot检测PERK、GRP78、LC3和beclin-1的蛋白表达。结果:CCK-8实验结果显示,VES对两种人胃癌细胞系的活力均有显著抑制作用(P<0.01)。qRT-PCR结果显示,两种细胞中beclin-1和GRP78的mRNA表达均随着VES剂量的增加而不断升高(均P<0.05)。Western blot结果显示,与对照组相比,VES均可以显著上调两种细胞中GRP78、PERK、LC3和be⁃clin-1的表达(均P<0.05);抑制PERK后,两种细胞中p-PERK/PERK的比值显著下降(P<0.01),相较VES组,VES+GSK组GPR78、LC3和beclin-1的蛋白表达均显著降低(均P<0.05)。结论:VES激活人胃癌细胞发生ERS和自噬的同时上调PERK的表达,而PERK参与了VES对ERS和自噬的调节。

天然维生素E琥珀酸酯的HPLC测定

建立了HPLC法测定天然维生素E琥珀酸酯的含量。采用C18柱,甲醇-冰醋酸(500∶3.2)为流动相,检测波长为284nm。在0.18～3mg/ml范围内线性关系良好,平均回收率98.4%～101.4%,RSD小于1%。

维生素E琥珀酸酯联合西妥昔单抗或5-氟尿嘧啶对二甲肼诱导的结肠癌大鼠的作用及机制研究

目的:研究维生素E琥珀酸酯(VES)联合西妥昔单抗或5-氟尿嘧啶(5-FU)对二甲肼诱导的结肠癌大鼠的作用及机制。方法:将SD大鼠随机分为6组:正常组、模型组、西妥昔单抗组、5-FU组、西妥昔单抗+VES组、5-FU+VES组。除正常组外,其他各组均通过在大鼠的颈背部皮下注射二甲肼建立结肠癌模型。各组大鼠分别给予相应的药物,正常组与模型组同时给予等量生理盐水。连续4周后,显微镜下观察大鼠结肠组织中异变腺窝病灶(ACF)数量。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定大鼠血清中血管内皮生长因子(VEGF)含量,Western blotting法检测结肠癌组织中凋亡蛋白bid、bax表达及抗凋亡蛋白bcl-2的表达。结果:与正常组比较,模型组结肠组织中ACF数量明显增加,血清VEGF含量升高,同时bid、bax蛋白表达下调,bcl-2蛋白表达上调(均P<0.05);与模型组比较,各给药组ACF数量减少,bcl-2蛋白表达和血清VEGF水平降低,bid和bax蛋白表达水平升高(均P<0.05);与西妥昔单抗组或5-FU组比较,西妥昔单抗+VES组和5-FU+VES组ACF数量减少,bcl-2蛋白表达和血清VEGF水平降低,bid和bax蛋白表达水平升高(均P<0.05),且西妥昔单抗+VES组对上述指标的改善作用较5-FU+VES组更为显著(均P<0.05)。结论:VES可明显提高西妥昔单抗或5-FU对二甲肼诱导的结肠癌大鼠的治疗作用,明显降低大鼠血清VEGF含量,并通过上调bid和bax蛋白表达,下调bcl-2蛋白表达促进肿瘤细胞凋亡,且VES联合西妥昔单抗的效果更好。

维生素E琥珀酸酯抑制人胃癌细胞生长的研究

采用体外细胞培养的方法 ,观察维生素 E琥珀酸酯 (VES)对人胃癌细胞 (SGC- 790 1)生长的影响 ,并利用 MTT法比较 VES和α-生育酚对胃癌细胞生长的作用效果。结果表明 :VES(5、10和 2 0μg/ m l)对胃癌细胞生长有明显抑制作用 ,而 α-生育酚在同样剂量对肿瘤细胞生长无抑制作用。这提示 VES具有不同于维生素 E的抗癌机理。

界面活化的溶胶凝胶包埋Candida rugosa脂肪酶催化合成维生素E琥珀酸酯

采用界面活化的溶胶凝胶包埋Candida rugosa脂肪酶(CRL)催化合成了维生素E琥珀酸酯. 考察了影响溶胶凝胶包埋固定化CRL的因素, 获得的最佳固定化条件为: 丙基三甲氧基硅烷/正硅酸四乙酯摩尔比为1/1, 水与硅烷前体摩尔比为15, 酶的添加量为0.5mg/ml, PEG400的添加量为12μl/ml溶胶. 溶胶凝胶包埋的CRL在50℃, 18h后其活性仍然保持了70.58%, 是游离酶的2.6倍,且稳定性得到了明显的改善. 基于CRL的界面特性, 采用五种表面活性剂对其进行界面活化. 结果表明, 采用橄榄油活化的溶胶凝胶包埋的CRL合成维生素E琥珀酸酯的酯化活力最高, 相比原酶和未界面活化的溶胶凝胶包埋酶分别提高了6.7和1.43倍.

维生素E及其琥珀酸酯和琥珀酸钙在保健食品中的应用

介绍了天然维生素E琥珀酸酯和维生素E琥珀酸钙 (天然 /合成 )的理化性质、在保健食品中的应用优点以及它们独特的抗癌保健功能。维生素E琥珀酸酯和琥珀酸钙在欧美日等发达国家已得到广泛的应用 ,几乎所有的片剂和胶囊剂营养补充剂中使用的维生素E均为维生素E琥珀酸酯和琥珀酸钙 ,而在国内则是空白 ,因而在新一代保健食品中具有十分广阔的应用前景。

维生素E琥珀酸酯的酶促合成及优化

在有机溶剂中以维生素E和琥珀酸酐为底物在脂肪酶的催化下合成了维生素E琥珀酸酯。首先对酶促反应的脂肪酶、反应介质和反应温度进行了考察,在所选的几种脂肪酶中,假丝酵母脂肪酶(Candidasp.)的催化活性最好;叔丁醇和DMSO组成的混合溶剂(体积比为2∶3)为最合适的反应介质;30℃为适宜的反应温度。并采用Box-Behnken实验设计和响应面因子分析法对底物摩尔比等其他反应条件进行了优化。维生素E琥珀酸酯最优反应条件为:维生素E浓度0.26mmol.ml-1,维生素E和琥珀酸酐摩尔比1∶5,在5ml叔丁醇和DMSO混合溶剂(体积比为2∶3)中,30℃下在0.02gCandidasp.脂肪酶的催化下反应71h,维生素E琥珀酸酯产率达到98.71%。

维生素E琥珀酸酯诱导MDA-MB-435乳腺癌细胞的凋亡

目的:检测维生素E琥珀酸酯(vitaminEsuccinate,VES)对MDAMB435乳腺癌细胞增殖抑制和凋亡诱导作用并分析凋亡诱导分子Fas表达的变化。方法:以VES刺激人乳腺癌细胞MDAMB435(雌激素受体阴性)12、24和48h,VES浓度为5、10和20μg/mL,以MTT法测定对细胞增殖的抑制作用,以流式细胞仪分析细胞周期和细胞表面Fas表达,TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡指数变化,Westernblot法检测VES作用后Fas蛋白水平变化。结果:VES对MDAMB435乳腺癌细胞增殖具有显著的抑制作用并表现为时间和剂量依赖关系。流式细胞仪分析细胞凋亡,MDAMB435细胞的自然凋亡率为1.5%,5、10和20μg/mLVES分别作用48h后凋亡率升高至13.1%、20.2%和46.5%。TUNEL法检测VES作用后乳腺癌细胞凋亡指数由1.1±0.4升高至10.8±1.0、30.4±2.7和51.4±4.7,细胞Fas蛋白水平分别升高1.3、1.9和4.3倍,细胞表面Fas平均荧光强度由46.29升高至59.66、84.54和103.41。结论:VES对MDAMB435乳腺癌细胞具有显著的增殖抑制作用,并诱导细胞的凋亡,其机制与细胞表面Fas表达上调有关。

维生素E琥珀酸酯的合成及抗癌活性研究

利用维生素E及琥珀酸酐在催化剂的作用下合成了维生素E琥珀酸酯。在此基础上 ,以人胃癌细胞SGC - 790 1为实验模型 ,利用MTT法观测了维生素E琥珀酸酯对其细胞生长的影响 ,并对其进行了细胞凋亡形态学观察。利用WesternBlot法检测了与调亡有关的c -Jun蛋白表达情况。研究发现 ,维生素E琥珀酸酯合成品对SGC - 790 1细胞生长具有明显的抑制作用 ,并可通过促进c -Jun蛋白表达诱导SGC - 790

Bcl-2家族蛋白在维生素E琥珀酸酯诱导人胃癌细胞凋亡中的作用

目的:研究Bcl-2家族蛋白在维生素E琥珀酸酯(RRR-α-tocopheryl succinate,α-TOS;vitamin E succinate,VES)诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡线粒体途径中的作用。方法:采用噻唑蓝(MTT)法测定VES对SGC-7901细胞的半数抑制浓度(IC50值);吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)染色观察细胞凋亡;Mito Tracker Red CMXRos染色观察线粒体膜电位(ΔΨm)的改变;Western Blot法检测不同剂量VES对人胃癌SGC-7901细胞Bid、Bax、Bcl-2蛋白表达和细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)蛋白表达与定位的影响。结果:VES对SGC-7901细胞的IC50值为101.45μg/ml;VES可引起SGC-7901细胞发生凋亡和线粒体膜电位下降;并引起Cyt C蛋白在细胞内重新定位、Bid蛋白剪切活化、Bax蛋白表达增加和Bcl-2蛋白表达减少。结论:VES可抑制SGC-7901细胞的生长,并通过线粒体途径诱导凋亡,其机制可能是通过剪切活化Bid蛋白、上调Bax/Bcl-2相对水平来实现的。

聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯应用进展

目的对聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯(TPGS)的理化性质、在药物制剂与临床治疗中的应用进行综述。方法依据近期国外公开发表的文献与专利,对TPGS的研究应用及理化性质与安全性,进行分类、归纳和整理。结果TPGS在制剂研究中可作为增溶剂、吸收促进剂、乳化剂、增塑剂以及脂溶性药物传递系统的载体;在临床上可治疗维生素E缺乏症,改善维生素E缺乏患者体内维生素E水平。结论TPGS作为一种安全有效的药用辅料与维生素E补充剂,在药学领域应用前景广阔,将会得到广泛应用。

维生素E琥珀酸酯通过氧化应激诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究

目的:研究维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate,VES)是否可通过氧化应激来诱导胃癌细胞凋亡及其可能机制。方法:分别用5、10和20μg/ml的VES处理胃癌SGC-7901细胞24h,同时设阴性对照组和甘露醇(活性氧抑制剂)预处理组。通过流式细胞技术、共聚焦技术和Western blot方法,检测了VES诱导SGC-7901细胞线粒体氧化损伤及细胞凋亡的情况,用相应的检测试剂盒检测细胞内活性氧和Ca2+含量变化情况。结果:不同浓度的VES对SGC-7901细胞均有诱导凋亡的作用。表现为随VES浓度的增加,SGC-7901细胞凋亡数量呈现增加的趋势,且SGC_7901细胞内活性氧含量及钙离子水平呈现增加的趋势,而线粒体膜电位逐渐下降。活性氧抑制剂甘露醇(1mmol/L)对VES诱导的胃癌细胞凋亡,和细胞内活性氧、钙浓度的增高及膜电位的降低均有显著抑制作用(P<0.05)。随VES浓度的增加,SGC_7901细胞内Bax蛋白的表达呈现上升的趋势,而Bcl-2蛋白的表达呈现下降趋势。甘露醇可显著降低胃癌SGC-7901细胞Bax蛋白的表达水平,同时增加Bcl-2蛋白的表达(P<0.05)。结论:VES可显著促进胃癌细胞凋亡,并且随着VES剂量的增加,VES诱导胃癌细胞凋亡的作用越强。细胞内活性氧含量增加、细胞内钙超载所导致的线粒体氧化损伤作用可能是VES诱导细胞凋亡的机制之一。

ERK1/2在维生素E琥珀酸酯诱导人胃癌细胞凋亡中的作用

为探讨ERK1 2丝裂素活化蛋白激酶 (MAPK)信号转导途径在维生素E琥珀酸酯 (VES)所诱导的人胃癌SGC 790 1细胞凋亡过程中的作用 ,采用DAPI染色法观察VES诱导细胞凋亡的情况 ,采用WesternBlot法分析VES不同剂量和不同作用时间对ERK1 2磷酸化状态的影响。结果表明 ,VES明显诱导SGC 790 1细胞凋亡 ,2 0 μg mlVES作用 2 4h和 48h后凋亡率分别为 14 .2 %和 89.6%。 5、10、2 0 μg mlVES作用 2 4h时明显降低p ERK蛋白的表达 ;而 2 0 μg mlVES作用于细胞时 ,ERK1 2可瞬时被激活 ,2h时表达下降 ,而后又升高 ,12h达峰值。提示ERK1 2途径可能参与了VES诱导的SGC 790 1细胞凋亡 。

维生素E琥珀酸酯诱导胃癌细胞凋亡

目的 探讨维生素E琥珀酸酯 (VES)诱导人胃癌SGC - 790 1细胞凋亡执行阶段的机制。方法 分别将对照组 0 1 %无水乙醇和 5 ,1 0 ,2 0 μg/mlVES加入培养液中 ,2 4h后通过荧光染色观察细胞核形态和线粒体跨膜电位(ΔΨm)改变 ,并用Western蛋白印记检测凋亡诱导因子在线粒体和细胞质中的重新分布。结果 VES可明显诱导人胃癌SGC - 790 1细胞凋亡 ,2 0 μg/mlVES可使细胞凋亡率达到 49 7% ,伴有ΔΨm 的明显降低 ,并有凋亡诱导因子自线粒体中的释放。结论 VES可能是通过使线粒体通透性改变 ,降低ΔΨm,并释放线粒体中的凋亡诱导因子 ,诱导SGC - 790

维生素E琥珀酸酯联合5-氟尿嘧啶抗人肝癌细胞增殖作用的研究

目的观察维生素E琥珀酸酯(VES)联合5-氟尿嘧啶(5-FU)抗人肝癌细胞SMMC-7721的增殖作用。方法体外培养的SMMC-7721细胞以VES联合5-FU分别作用24和48h,MTT法测定细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪分析细胞周期、凋亡率以及Fas的表达。结果MTT检测显示,VES6μg/mL作用细胞24h后抑制率为(2.78±0.05)%,随药物浓度的增加和作用时间的延长,抑制率显著增加(P<0.01);相同条件下,VES与5-FU合用较两药单用抑制作用显著增加(P<0.01)。流式细胞仪分析显示,SMMC-7721细胞自然凋亡率为(0.86±0.20)%,VES24μg/mL,5-FU30μg/mL及两者合用作用细胞24h后凋亡率分别为(30.08±2.32)%,(18.23±1.58)%和(63.68±2.88)%(P<0.01),细胞表面Fas表达增加。结论VES联合5-FU通过阻滞细胞周期于G0/G1期、促进细胞表面Fas的表达协同抑制肝癌细胞增殖。