胰岛干细胞转分化胰岛样细胞与天然胰岛功能的比较

目的：目前在胰腺干细胞体外转分化为胰岛样细胞的转化效率，转分化胰岛样细胞的成熟度，能否代替天然胰岛的功能等问题上存在争议。实验将分离纯化、扩增的大鼠胰腺导管上皮细胞，并诱导分化为胰岛样细胞团，与天然胰岛功能进行比较。方法：实验于200407／2005-04在暨南大学第二临床医学院暨深圳市人民医院临床医学研究中心实验室完成。实验选用SD大鼠10只．采用差异性贴壁、低血清培养等方法纯化大鼠胰腺导管上皮细胞，以免疫组织化学方法鉴定后，在含exendin-4、角质细胞生长因子、尼克酰胺等细胞因子和葡萄糖的培养基中，将其转分化为胰岛样细胞团，以DTZ染色和胰岛素免疫荧光染色鉴定。分离纯化SD大鼠天然胰岛，对胰岛样细胞团与天然胰岛进行葡萄糖刺激试验，检测培养液上清液中胰岛素和C肽的水平。结果：①免疫组织化学染色显示从大鼠胰腺导管上皮细胞分离纯化的细胞呈CK-19染色阳性，PDX-1染包阴性，表明为胰腺干细胞。诱导4周后，细胞逐渐汇聚成胰岛样细胞团．免疫荧光染色为阳性，证明有胰岛素分泌。②葡萄糖刺激实验显示，在低糖和高糖刺激下，胰岛样细胞团胰岛素的分泌量约为天然胰岛的1／30和1／35，C肽分泌量为天然胰岛的1／32和1／26．结论：目前胰腺干细胞体外转分化为胰岛样细胞的成熟度与天然胰岛仍然存在较大差别，其在功能仅为天然胰岛的1／30—1／35。

大鼠胰腺导管上皮细胞及转分化胰岛样细胞免疫学特性研究

目的:通过对大鼠胰腺导管上皮细胞、转分化的胰岛样细胞与天然胰岛细胞进行免疫原性比较,了解胰腺导管上皮细胞及转分化胰岛样细胞的免疫学特性。方法:大鼠胰腺导管上皮细胞,转分化胰岛样细胞和天然胰岛在体外与淋巴细胞共培养,检测淋巴细胞MHCⅠ、MHCⅡ抗原决定簇,IFN-γ和IL-2、IL-4水平。将三组细胞分别植入到大鼠糖尿病模型皮下,流式细胞技术检测外周血MHCⅠ、MHCⅡ表达、ELISA检测IL-2、IL-4水平和机体对其反应的病理学变化。结果:三组细胞与淋巴细胞共培养,MHCⅠ的表达未见明显差异(P<0.05),MHCⅡ的表达胰岛样细胞(29.5%±3.1%)和天然胰岛细胞(32.6%±3.6%)较胰腺导管上皮细胞(10.8%±0.9%)明显升高(P<0.05)。淋巴细胞分泌IL-2水平和Elispot检测分泌IFN-γ的细胞数,胰腺导管上皮细胞较胰岛样细胞和天然胰岛细胞组显著性降低(P<0.01)。植入糖尿病大鼠模型的外周血IL-2水平和淋巴细胞MHCⅡ表达均随着植入时间逐渐升高,胰岛样细胞和天然胰岛细胞组较胰腺导管上皮细胞组升高明显,IL-4水平在三组细胞无明显差异。病理结果显示胰腺导管上皮细胞组淋巴细胞浸润较胰岛样细胞和天然胰岛细胞组为轻。结论:胰腺导管上皮细胞具有低免疫原性,转分化的胰岛样细胞免疫原性近似天然胰岛。