天然衍生脱细胞牛心包复合BMP-2转染的BMSCs引导骨组织再生的体外实验研究

目的:研究天然衍生脱细胞牛心包复合BMP-2转染BMSCs引导骨组织再生的可行性和有效性。方法:天然衍生脱细胞牛心包体外复合BMP-2转染BMSCs,SEM评估细胞生长与增殖,MTT法检测牛心包对转染细胞的毒性,ELISA检测BMP-2含量,结晶紫染色法测定BMSCs细胞粘附能力,ALP活性实验检测转染BMSCs成骨性能。结果:SEM发现天然衍生脱细胞牛心包复合BMP-2基因转染的BMSCs后,细胞生长并增殖良好;各组细胞的存活率没有显著性差异;天然衍生脱细胞牛心包增强了BMP-2转染BMSCs的细胞粘附能力和成骨细胞转化能力。结论:天然衍生脱细胞牛心包复合BMP-2基因转染BMSCs后,具有良好的生物和细胞相容性,有望成为一种优良的天然GBR膜材料。

牛心包脱细胞支架的制备研究

组织工程支架材料是构建组织工程器官或组织的重要基础,天然脱细胞基质由于具有其优良特性而成为理想的支架材料。本研究采用胰酶去污剂法、冻融去污剂24 h法、冻融去污剂48 h法、冻融核酸酶法和去污剂核酸酶法等5种方法对牛心包组织进行脱细胞处理。通过HE染色、扫描电镜观察、含水量检测、力学检测、DNA含量检测和细胞毒性试验,判断不同脱细胞方法的脱细胞效果及其对牛心包基质的影响,从而筛选出对牛心包进行脱细胞的最佳方法。结果显示冻融后去污剂24 h法可以完全脱除牛心包的细胞成分,同时细胞外基质和力学特性保持完好,细胞毒性低,且经济实惠,是制备牛心包脱细胞支架的较好方法。

脱细胞牛心包构建引导骨再生膜的初步研究

目的制备具有良好生物相容性和适宜降解吸收时间的引导骨组织再生(guidedboneregeneration,GBR)膜材料。方法采用0.25%Trypsin+0.5%TritonX-100酶联脱细胞法对新鲜牛心包进行脱细胞处理,将脱细胞牛心包(A组)、甘油保存脱细胞牛心包(B组)、碳化二亚胺[1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimidehy-drochloride,EDAC]交联脱细胞牛心包(C组)、甘油保存EDAC交联脱细胞牛心包(D组)4种膜材料分别植入38只SD大鼠背部皮下,不植入材料为E组。于2、4、8和16周分别处死大鼠7、12、12和7只,观察周围组织反应及材料的降解吸收情况。结果4种材料植入动物体内均有不同程度的炎性反应和纤维囊膜形成。术后4周,A组和C组的炎性反应轻微,纤维包膜变薄。A组膜材料吸收替代时间为8周左右,C组吸收替代时间为16周左右;16周时B组和D组材料仍有纤维包膜。结论EDAC交联脱细胞牛心包具有良好的生物相容性和理想的降解性能,在动物体内能顺利被自体组织替代。

京尼平交联的脱细胞牛心包生物支架材料的实验研究

目的:初步探讨新型生物交联剂京尼平对脱细胞牛心包基质作为支架材料的影响及意义,为心肌组织工程心脏补片的构建提供较理想的生物支架材料。方法:实验分为三组,A组(25块)为新鲜未脱牛心包组织,B组(25块)为脱细胞牛心包组织,C组(25块)为京尼平交联的脱细胞牛心包组织。采用光学显微镜、扫描电镜观察脱细胞效果和胶原纤维、弹力纤维改变;以组织厚度、热皱缩温度和抗拉力测试观察基质的物理性能变化。结果:光学显微镜、扫描电镜观察显示去污剂-酶消化法去细胞百分率达98.63%,能够有效脱除细胞,完整保留牛心包组织的胶原纤维和弹力纤维;组织厚度测试结果为,A组(3.8±1.0)mm,B组(3.8±1.2)mm,C组(4.0±1.0)mm;组织热皱缩温度测定结果为,A组(78.50±0.50)℃,B组(67.90±0.60)℃,C组(85.90±0.40)℃;组织抗拉力测试结果显示,经交联剂京尼平处理后C组最大载荷、最大应力、弹性模量、最大应变均高于A组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:经过新型生物交联剂京尼平交联的脱细胞牛心包最大载荷增加显著,可以弥补脱细胞牛心包力学性能的减少,作为较理想的心肌组织工程支架材料。

牛心包脱细胞处理后免疫原性的研究

牛心包用0.5%胰蛋白酶处理3 h,探讨其作为组织工程心脏瓣膜支架材料的可行性。大鼠被分成新鲜牛心包组、脱细胞处理牛心包组、空白对照组三组,分别测定其血清中产生的特异性抗牛心包抗体IgG的OD值,结果发现IgG含量在术后7 d三组间比较无统计学意义(P>0.05),其余各时点间比较差异有显著性(P<0.05),在相应时点新鲜牛心包产生的IgG值比脱细胞处理的牛心包高,且新鲜牛心包产生的IgG值在术后2月达峰值,而脱细胞处理牛心包产生的IgG在术后1月达峰值。组织学观察发现脱细胞处理后牛心包完全清除了细胞成分,纤维网架结构轻度松散,但基本保持完整。结果表明,这种脱细胞方法能完全清除牛心包上的细胞成分,降低免疫原性。

脱细胞牛心包补片在结膜囊成形术中的临床应用

目的探讨脱细胞牛心包组织补片在结膜囊成形术中的临床效果。方法选取2010年6月至2015年5月我院收治的32例（32眼）义眼台植入术后结膜囊狭窄患者,应用脱细胞牛心包进行结膜囊成形术。所有患者局部浸润麻醉后分离去除结膜瘢痕组织,使用脱细胞牛心包组织补片修补结膜缺损区形成结膜囊,放入眼模加压包扎1周。随访观察6~12个月,平均10个月。结果 32例（32眼）均获得良好效果。术后1周植片可见上皮生长,术后1个月植片色泽红润,术后3个月植片呈正常结膜色泽外观,无感染、坏死或排斥反应等发生。配戴义眼片后患眼外形良好。结论采用脱细胞牛心包生物补片进行结膜囊成形术取材方便,手术安全,疗效可靠。

以脱细胞牛心包膜为支架材料构建组织工程化表皮的初步研究

目的:探讨脱细胞牛心包膜(ABP)作为组织工程化表皮支架材料的可行性。方法:体外分离培养SD大鼠皮肤KC,将KC以1×106个/cm2接种于ABP上,用光镜、扫描电镜观察细胞在ABP上的粘附、增殖情况。结果:KC在ABP上种植5 d后,光镜观察可见KC在ABP上单层生长。扫描电镜观察见KC粘附于ABP表面,呈大小不等的集落。结论:ABP可作为组织工程化表皮的支架材料。

灭菌处理牛心包制备脱细胞支架的内皮化

背景:组织工程学研究常用的动物组织不可避免地存在各种微生物附着,而无菌是组织工程材料临床应用的一项基本要求。目的:观察体积分数75%乙醇灭菌对牛心包性能及生物相容性的影响。方法:将牛心包组织分别用无菌PBS(对照组)、含1%抗生素(青霉素/链霉素/两性霉素B溶液)的PBS、氯己定及体积分数75%乙醇进行灭菌处理。采用LB固体培养基评价4种方法的杀菌效果;采用VB染色评估4组处理对牛心包组织结构的影响;通过CCK-8实验测定4种处理抽提液的细胞毒性。将体积分数75%乙醇灭菌处理的牛心包制作为脱细胞支架,与人脐静脉内皮细胞共培养,观察细胞的黏附与内皮化效果。结果与结论:①体积分数75%乙醇和氯己定处理24 h的牛心包满足完全灭菌的要求,1%抗生素处理组和对照组可见明显菌落形成;②VB染色显示,体积分数75%乙醇、氯己定和1%抗生素处理的牛心包胶原纤维呈波浪状排列整齐,结构紧凑,弹性纤维含量较少但结构清晰;③体积分数75%乙醇灭菌处理的牛心包不影响L929细胞的增殖活性,培养1-3 d内的细胞存活率均在100%以上;氯己定灭菌处理的牛心包有很强的细胞毒性,导致细胞死亡;④人脐静脉内皮细胞可在脱细胞支架表面正常生长与黏附;在20 d的种植期内,第8-12天脱细胞支架表面黏附的细胞最多;⑤结果说明,体积分数75%乙醇能够有效消灭附着在牛心包上的所有微生物,不会影响牛心包的组织学完整性与生物相容性。

脱细胞牛心包膜材料与胶原膜引导骨再生的对照研究

目的 比较碳化二亚胺[1-ethyl-3（3-diaminopropyol）-carbodiimide，EDAC]交联脱细胞牛心包（acellular bovine pericardium，ABP）与胶原膜引导骨再生的作用和膜材料植入动物体内的转归。方法 健康雄性成年新西兰白兔24只，体重2．6～3．5kg，平均3．1kg。制备兔双侧下颌体7mm×7mm×5mm骨缺损模型，一侧骨缺损覆盖EDAC交联ABP（EDAC交联ABP组），另一侧覆盖胶原膜（胶原膜组）。术后4、8、16及24周各处死6只动物行大体、组织学观察及图像分析检测新生骨面积百分比及膜材料吸收替代百分比。结果 大体观察：术后4、8周EDAC交联ABP组膜材料完整，与缺损区正常骨粘连紧密；胶原膜组膜材料形态消失，骨缺损区轮廓欠清晰。术后16、24周EDAC交联ABP组骨缺损区创面平坦；而胶原膜组凹凸不平。组织学观察：术后4、8周EDAC交联ABP组胶原纤维排列规则，缺损区中央大量新生骨小梁；胶原膜组胶原纤维断裂，缺损区见大量新生骨小梁。术后16、24周，EDAc交联ABP组骨缺损区形成完整的骨桥，而胶原膜组骨缺损内局部长入纤维结缔组织。术后4、8周，两组新生骨面积百分比相近，16周EDAC交联ABP组为81．99％±3．92％，胶原膜组为76．35％±4．29％，组间差异有统计学意义（P〈0．05）。术后4、8、16及24周，EDAC交联ABP组膜材料平均吸收替代百分比分别为16．57％、27．94％、65．61％和85．72％；胶原膜组4周降解超过50％，8周已完全降解吸收。结论 EDAC交联脱细胞牛心包膜材料引导成骨的效率优于胶原膜。

PC交联脱细胞牛心包膜的力学性能、稳定性和血液相容性

测定了原花青素(PC)交联的脱细胞牛心包膜(dbpECM)的力学性能、稳定性和血液相容性.实验结果显示,2.5 mg/mL原花青素交联能将拉伸强度从29.1 MPa提高到51.3 MPa,并保持弹性模量基本不变,而抗胶原酶降解能力与戊二醛相当;PC-dbpECM浸泡于D-Hanks溶液中,仅过量未交联原花青素在一周内释放,而交联的PC在PC-dbpECM中保持稳定.1 mg/mLPC即可基本抑制体外钙化.PC或GA交联的dbpECM都有较好的血液相容性,但PC交联明显优于GA.2.5 mg/mL PC交联的dbpECM血小板的粘附率(7.8%)显著低于未交联组(26.1%)和GA交联组(36.6%),表明PC-dbpECM具有较好的抗血栓形成能力.结果表明PC-dbpECM具有良好的力学性能,稳定性和血液相容性,有可能成为制备人工心脏瓣膜的优良材料.

以牛心包为来源的天然衍生引导骨组织再生膜制备方法的实验研究

目的:探索天然牛心包脱细胞和交联处理的理想方法。方法:用胰酶去垢剂法(I)、胰酶核酸酶法(II)、胰酶去垢剂+核酸酶联合法(III)、冻融去污剂法(IV)、冻融核酸酶法(V)、冻融去污剂+核酸酶联合法(VI)进行脱细胞和交联处理,采用光镜和SEM、细胞毒性实验、机械性能测定、细胞趋化性实验评估处理效果,筛选出理想的脱细胞和交联方法。结果:冻融去污剂+核酸酶联合法是理想的脱细胞方法。京尼平交联法是理想的交联方法。结论:冻融去污剂+核酸酶联合法制备的脱细胞牛心包再采用京尼平交联法可制备出理想的GBR膜材料。

脱细胞牛心包补片移植修复义眼台暴露的临床疗效分析

目的：探讨脱细胞牛心包补片移植修复义眼台暴露的临床效果。方法：对12例羟基磷灰石义眼台植入术后发生暴露的患者进行修复。将脱细胞牛心包补片覆盖于表面，修复缺损区，术后随访观察6～24月。结果：术后未出现结膜裂开及义眼台暴露，义眼活动良好。结论：脱细胞牛心包补片移植是修复义眼台暴露的有效方法。避免了应用异体组织修补排异反应的发生，对治疗该并发症具有一定的临床意义。

脱细胞牛心包补片修复义眼台暴露的临床应用

目的：探讨脱细胞牛心包补片修复义眼台暴露的临床效果。方法：对23例羟基磷灰石义眼台置入术后发生义眼台暴露的患者进行义眼台修复，将脱细胞牛心包补片覆盖于表面，修补缺损区，术后随诊观察6～24月。结果：脱细胞牛心包补片修复术后未再出现结膜裂开及义眼台暴露，义眼活动良好。结论：脱细胞牛心包补片移植是修复义眼台暴露的有效方法。

脱细胞牛心包补片在眼球萎缩整形中的应用

目的:探讨脱细胞牛心包补片在眼球萎缩整形中的临床效果。方法:轻中度眼球萎缩34例(34眼),术中将萎缩眼球的角膜上皮层和角膜缘上皮组织彻底清除,将直径20mm补片覆盖于角巩膜,上方球结膜与眼球筋膜同时向下滑行,覆盖整个补片并固定于下方角膜缘,与下方眼球筋膜及结膜缝合。术后1个月定做义眼片佩戴,随访6~24个月,观察其效果。结果:34例轻中度眼球萎缩患者,术后结膜筋膜均覆盖良好,无角膜暴露,佩戴义眼片后无明显异物感及刺激症状,双侧睑裂对称,外观改善良好。结论:轻中度眼球萎缩采用脱细胞牛心包补片治疗,术后角膜不易暴露,佩戴个性化义眼片后无明显异物感及刺激症状。

茶多酚处理脱细胞牛心包组织支架作为人工食管修补材料的可行性

背景:脱细胞组织支架已被应用于心脏、血管、皮肤、肺部和泌尿科等领域,并逐渐成为食管组织工程的良好候选者。目的:探讨茶多酚处理脱细胞牛心包组织支架作为人工食管材料的可行性。方法:制备脱细胞牛心包组织支架,分别经PBS、戊二醛、茶多酚进行交联处理。将16只SD大鼠随机分4组,A组将经PBS处理的脱细胞牛心包组织支架缝合至食管缺损处,B组将经戊二醛处理的脱细胞牛心包组织支架缝合至食管缺损处,C组将经茶多酚处理的脱细胞牛心包组织支架缝合至食管缺损处,D组暴露食管后关腹,每组4只。术后4周,观察大鼠体质量变化、吻合口情况,修复部位苏木精-伊红染色及肌动蛋白α抗体免疫组化染色。结果与结论:①大体观察可见,A组食管缺损部位肉芽增生,狭窄不明显,部分食管补片材料脱落;B组术后出现吻合口漏1只,食管缺损部位肉芽组织增生明显,大块补片组织突出于食管腔内;C组食管缺损部位肉芽组织增生,缺损部位被人工食管支撑,无明显狭窄;②A、B、C组大鼠术后4周的体质量与D组比较差异无显著性意义(P>0.05);③苏木精-伊红染色显示,A组食管缺损部位肉芽增生,大量炎性细胞浸润,新生食管黏膜部分覆盖补片组织;B组食管缺损部位肉芽组织增生明显,伴有大量炎性细胞浸润,补片周边可见炎性细胞浸润,食管黏膜未覆盖补片组织;C组食管缺损部位肉芽组织增生,炎性细胞浸润较轻,人工食管补片内可见大量新生细胞,原补片组织结构不清,食管黏膜完全覆盖缺损组织;④免疫组化染色显示,A、B组未见肌动蛋白α阳性染色细胞,C组可见蓝染的细胞核,原补片结构疏松,可见肌动蛋白α特异性染色的新生血管组织;⑤结果表明,茶多酚处理脱细胞牛心包组织支架可作为人工食管修复材料。

牛心包衍生膜材料的制备及理化性能检测

目的:筛选脱牛心包衍生膜材料的制备方法,观察其组织结构和力学性能,探讨作为支架材料的可能性。 方法:分别采用0.1mol/LNaCl+0.5%TritonX-100、0.1mol/LNaCl+0.25%Trypsin、0.25%Trypsin+0.5% TritonX-100、0.1mol/LNaCl+0.25%Trypsin+0.5%TritonX-100对新鲜牛心包进行脱细胞处理,脱细胞牛心 包经过碳化二亚胺(EDAC)交联。观察脱细胞牛心包基质材料的组织结构、测定其理化性质。结果:经0.25% Trypsin+0.5%TritonX-100酶联脱细胞处理获得的脱细胞牛心包内无细胞成分,其双层结构及理化性能保存良 好。结论:0.25%Trypsin+0.5%TritonX-100酶联脱细胞法能有效地脱去牛心包内的细胞成分,获得的脱细胞 牛心包的组织结构和理化性能符合生物支架材料的要求。

牛心包纤维支架细胞重建组织工程体外实验研究(英文)

目的构建利于宿主细胞重建的组织工程生物瓣材料.方法Ⅰ组新鲜牛心包片经(Courtuman法脱细胞后用戊二醛(GA)固定;Ⅱ组脱细胞及固定方法同Ⅰ组,随后用2,3丁二醇改性.肌成纤维细胞(MFC)和内皮细胞(EC)分别取自猪颈动脉,分别培养,分层种植.通过台盼蓝染色、光镜、扫描电镜(SEM)、透射电镜(TEM)观察细胞生长效果.结果Courtuman法基本脱去了牛心包细胞成分,使其成为富含空隙的纤维支架.Ⅰ组试片无细胞生长,Ⅱ组细胞处于增殖状态,第17天Ⅱ组组试片内部有MFC生长;第27天,Ⅱ组试片一侧有2～3层细胞生长,外层EC完整融合,部分EC拉长成梭形,内层MFC已迁移入纤维支架内.结论生物材料牛心包脱细胞、鞣制、改性处理后形成的牛心包纤维支架利于细胞生长.分别提取、分别培养、分层种植MFC和EC是一种实用的再细胞化组织工程技术,可在体外实现牛心包纤维支架的完全内皮化及部分间质细胞化.

牛心包衍生材料引导骨再生的实验研究

目的:评价碳化二亚胺(EDAC)交联处理的脱细胞牛心包的引导成骨作用。方法:在新西兰白兔双侧下颌体各制备7 mm×7 mm大小的骨缺损,一侧骨缺损覆盖EDAC交联脱细胞牛心包,另一侧不覆膜作为对照。术后4周、8周、12周、16周行X线、DXA测量骨密度及组织学观察骨缺损修复情况。结果:术后各组新西兰白兔伤口愈合良好;各期EDAC交联脱细胞牛心包组骨缺损区的BMD均高于同期对照组,有统计学意义(P<0.05);DAC交联脱细胞牛心包组骨缺损修复速度快于对照组。结论:EDAC交联脱细胞牛心包有良好的引导骨组织再生作用。

牛心包衍生材料引导成骨效应的X射线和骨密度评估

目的:应用X射线和骨密度值评价碳化二亚胺交联处理的脱细胞牛心包的引导成骨作用。方法:实验于2004-09/2005-01在中南大学湘雅二医院中心实验室及湘雅二医院动物部完成。健康雄性成年新西兰白兔20只,在新西兰白兔双侧下颌体各制备7mm×7mm大小的骨缺损,一侧骨缺损上方紧贴骨面覆盖碳化二亚胺交联脱细胞牛心包,作为实验组;另一侧不作处理,作为对照组。每组又分4,8,12,16周4个时间点,每个时间点为5只。术后4,8,12,16周行X射线观察和双能X射线吸收仪测量骨密度,评价骨缺损修复情况。结果:纳入新西兰兔20只,均进入结果分析。①术后骨缺损区大体观察:术后12,16周时实验组骨缺损区创面平坦;对照组骨缺损区凸凹不平,中央有结缔组织长入,16周时仍有直径2mm以上的缺损,呈纤维性愈合。②两组兔术后骨缺损区X射线观察:自8周起,实验组骨缺损区密度均高于对照组。③兔骨密度变化:术后4,8,12,16周实验组骨密度均高于对照组,差异均有显著性意义[分别为(0.337±0.035),(0.304±0.027)g/cm2;(0.373±0.022),(0.354±0.025)g/cm2;(0.365±0.032),(0.341±0.031)g/cm2;(0.347±0.023),(0.311±0.028)g/cm2,P<0.05]。结论:X射线和骨密度评估结果均显示碳化二亚胺交联脱细胞牛心包有良好的引导骨组织再生作用。

生物交联剂京尼平交联牛心包生物支架材料的性能

脱细胞牛心包膜因其具有优良特性而成为组织工程生物瓣膜中理想的支架材料。采用冻融+表面活性剂法对牛心包组织进行脱细胞处理后,用戊二醛或京尼平对其进行表面修饰固定。通过HE染色及扫描电镜观察脱细胞效果,并对交联组织进行厚度检测、含水量和接触角测试、力学检测、交联指数和差示扫描量热(DSC)测定、体外降解、溶血试验以及细胞毒性试验,判断两种交联方法对脱细胞牛心包基质的影响,从而选择出交联脱细胞组织的最好方法。结果显示,冻融+表面活性剂法脱除细胞彻底,戊二醛或京尼平交联后组织厚度明显增加分别约20%、25%,亲水性良好,力学特性稳定,交联指数都高达90%,且28 d降解率分别为5%和3%,交联后组织稳定性高。但京尼平组溶血率(0.37%)远小于戊二醛组溶血率(13.77%),且细胞毒性很低。作为瓣膜组织工程支架材料,京尼平交联脱细胞牛心包膜比戊二醛交联效果具有更好生物相容性,交联效果好,是较好的交联方法。