慢性阻塞性肺病肠道和肺炎性2型固有淋巴样细胞(iILC2)及相关细胞因子含量分析

目的 探讨慢阻塞性肺病(COPD)肠道炎性2型固有淋巴细胞(iILC2)与肺部ILC2及其相关炎症反应的关系。方法采用熏烟法建立COPD小鼠模型,将小鼠随机分为正常组和COPD组。采用HE染色检测小鼠肺、肠组织的病变情况,流式细胞术检测天然ILC2细胞(nILC2)和iILC2细胞数量。使用Wright-Giemsa染色检测正常组和COPD组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中免疫细胞数量,ELISA检测BALF中白细胞介素13(IL-13)和IL-4的含量。结果 COPD小鼠肺、肠组织上皮细胞增生,部分萎缩或缺失,伴随炎细胞浸润,病理评分增加,BALF中中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞显著增加。COPD小鼠肺组织iILC2数量、肠组织nILC2和iILC2数量显著增加,BALF中IL-13和IL-4含量显著升高。结论 COPD肺部iILC2及其相关细胞因子的增加可能与肠道iILC2细胞相关。

2型固有淋巴细胞(ILC2)在过敏性呼吸道疾病中的作用研究进展

2型固有淋巴细胞(ILC2)作为2型辅助T(Th2)细胞的“镜像细胞”,其总细胞数量虽远不如机体内的CD4^(+)Th2细胞数量庞大,但活化后的ILC2具有比CD4^(+)Th2细胞更强大的生物学活性,能迅速增强Th2细胞炎性反应,在呼吸道过敏性疾病的发病机制中有着重要作用。激活ILC2的相关递质包括炎性细胞因子:白细胞介素33(IL-33)、IL-25、胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)、IL-4、IL-9;脂质递质(前列腺素、白三烯)、其他激活递质:诱导性共刺激分子(ICOS)、补体C3a、神经肽受体、血管活性肠肽及降钙素基因相关肽等,活化的ILC2产生大量的IL-4、IL-5、IL-9、IL-13及双调蛋白等炎性递质,诱发气道高反应、黏液分泌和气道重塑等呼吸道过敏反应。因此,通过靶向上游及下游信号抑制ILC2活化可能是治疗呼吸道过敏性疾病尤其是类固醇依赖性哮喘的潜在途径。我们总结了ILC2的免疫生物学、过敏性炎症反应中ILC2的启动、ILC2与呼吸道过敏性疾病的关系、靶向ILC2的生物制剂的研究进展。

CGRP抑制变应性鼻炎患者外周血2型固有淋巴细胞(ILC2)增殖、活化和细胞因子分泌

目的 探究降钙素基因相关肽(CGRP)对变应性鼻炎(AR)患者外周血中2型固有淋巴细胞(ILC2)的调控作用。方法 提取正常健康人、 AR患者外周血单个核细胞(PBMC),分别给予CGRP、白细胞介素33(IL-33)、 CGRP联合IL-33刺激3 d,以空白刺激为对照。采用流式细胞术检测4组ILC2的比例。分选ILC2后分别给予CGRP、 IL-33、 CGRP联合IL-33刺激3 d,以空白刺激为对照,采用流式细胞术检测ILC2中IL-5、 IL-13阳性细胞百分比,ELISA检测ILC2上清液IL-5、 IL-13水平。结果 AR患者外周血中ILC2百分比明显高于对照组。将PBMC培养后,经IL-33单一刺激,IL-5+ILC2、 IL-13+ILC2水平明显上升。加入IL-33联合CGRP刺激后,PBMC中IL-5+ILC2、 IL-13+ILC2水平明显降低;经CGRP单一刺激后PBMC中IL-5+ILC2、 IL-13+ILC2进一步降低。将ILC2分选后进行培养,经IL-33单一刺激,IL-5+ILC2、 IL-13+ILC2水平明显上升,加入IL-33联合CGRP刺激后,IL-5+ILC2、 IL-13+ILC2水平明显降低,经CGRP单一刺激,IL-5+ILC2、 IL-13+ILC2水平进一步降低。经IL-33联合CGRP共同刺激相较于经IL-33单一刺激,IL-5、 IL-13水平明显降低,经CGRP单一刺激,IL-5、 IL-13水平进一步降低。结论CGRP可以抑制AR中外周血ILC2的增殖、活化,在AR中发挥抗炎作用。

优势菌种活细胞对天然水体中Pb^(2+)和Cd^(2+)的吸附

通过对天然水环境———伊通河中优势菌种活细胞吸附Pb2 + 、Cd2 + 的研究发现 :pH对Pb2 + 、Cd2 + 吸附的影响是不同的 ,对Pb2 + 的吸附量在 pH =5 .0～ 7.0时变化不大 ,对Cd2 + 的吸附量在 pH =6 .0～ 8.0时变化不大 ;温度对活细胞吸附Pb2 + 、Cd2 + 影响明显不同 ;活细胞对Pb2 + 、Cd2 + 的吸附量随着细菌密度的增加而增大 ,随着渗透压的增大而降低 .图 5表 1参

糖尿病肾病患者Ⅱ型固有淋巴细胞(ILC2)活性增强参与代谢综合征多组分聚集状态形成

目的探讨终末期2型糖尿病肾病(DN)患者Ⅱ型固有淋巴细胞(ILC2)活性及其与代谢综合征(MS)多组分聚集状态的关系。方法募集维持性血透治疗超过3个月病情稳定的DN患者30例、单纯2型糖尿病(T2D)患者30例和健康对照30例。Ficoll-泛影葡胺密度离心法分离外周血单个核细胞(PBMC),实时荧光定量PCR检测ILC2相关的视黄酸受体相关孤核受体α(RORα)、白细胞介素17受体B(IL17RB)、IL-33受体T1/ST2、IL-5、IL-13的mRNA水平;流式细胞术检测PBMC中ILC2的百分比;ELISA检测血浆IL-5、IL-13水平;计算3组受试对象MS发生率、组分个数;Pearson法分析各组分与ILC2相关因子的相关性。结果单纯T2D和DN患者的腰围、空腹血糖、收缩压、舒张压、甘油三酯及MS组分数均升高,MS发生率分别为46.67%和86.67%。DN患者ILC2的比例增加,ILC2相关转录因子RORα及膜受体T1/ST2的mRNA表达水平均升高,且与IL-5和IL-13的表达水平呈正相关。此外,DN患者PBMC的IL-13 mRNA水平与收缩压、血浆总胆固醇、低密度脂蛋白-胆固醇水平呈正相关,ILC2膜受体T1/ST2与低密度脂蛋白-胆固醇水平也呈正相关。结论维持性血透治疗的DN患者比单纯T2D患者存在更明显的MS多组分聚集现象,ILC2活性增强可能通过对血压及脂质代谢的影响参与糖尿病肾病患者MS状态的形成。

银屑病患者红细胞天然免疫与免疫球蛋白、补体及可溶性IL-2R的相关性研究

目的 : 探讨银屑病患者红细胞天然免疫与细胞及体液免疫功能的状况及其相互关系。方法 :应用流式细胞仪检测银屑病患者新鲜红细胞表面CD35分子的表达水平 ,并同时采用速率散射比浊法对血清中IgG、IgA、IgM及C3、C4 含量进行测定 ,采用双抗体夹心法测定血清可溶性白细胞介素 - 2受体(sIL 2R)水平。结果 : 银屑病患者红细胞CD35定量和IgA、C3及C4 含量均较正常人明显增高 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1,P <0 .0 0 1,P <0 .0 1) ,红细胞CD35定量与IgA呈高度显著正相关 (γ =0 .6 6 8,P <0 .0 0 1) ,与sIL 2R呈显著正相关 (γ =0 .395 ,P <0 .0 5 ) ,与C4 呈显著正相关 (γ =0 .4 0 3,P <0 .0 5 )。结论 : 银屑病发病与免疫异常有关 ,红细胞天然免疫与细胞及体液免疫相互联系共同参与了银屑病的过程 。

猪生殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型共感染对猪外周血天然免疫细胞含量的影响

将猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)单感染和共感染的6周龄仔猪,于感染前和感染后第3、7和10 d,采用血常规法、SWC3a单色流式细胞术以及CD3/CD4/CD8三色流式细胞术分析了感染猪外周血中白细胞、粒细胞、单核细胞、NK细胞、γδT细胞的含量。结果,感染后第3 d和第7 d,PRRSV感染组、PCV2感染组以及PRRSV+PCV2共感染组猪的白细胞、单核细胞、粒细胞、NK细胞、γδT细胞总数显著下降,并且共感染组比单感染组下降更加严重。结果表明,PRRSV+PCV2共感染对仔猪外周血天然免疫细胞的影响具有协同效应,意味着在感染早期可导致更加严重的先天免疫抑制。

Caco-2细胞模型在天然药物吸收研究中的应用

目的Caco-2细胞模型为经典的口服药物体外吸收模型。此文介绍了Caco-2细胞模型的来源与特点,综述了Caco-2细胞模型在天然药物吸收研究中的应用现状,并对Caco-2细胞模型在天然药物研究中的应用前景进行了探讨。

鼻咽癌病人放射治疗前后天然杀伤细胞活性、白细胞介素-2水平改变的研究

目的 探讨鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)病人放射治疗前后天然杀伤细胞(NK细胞)活性、白细胞介素-2(IL-2)水平的变化和肿瘤复发转移的关系。方法 选择139例首诊的NPC病人为NPC组,45例健康成人为对照组,两组间性别及年龄无显著差异。NPC病人根据肿瘤有无复发转移又分为两组,均予以60Co γ射线外照射DT68～80 Gy,分别检测放疗前和放疗后(36个月内)及对照组的NK细胞活性及IL-2水平,观察肿瘤复发转移的情况。结果 鼻咽癌病人放疗前、后0～30个月内NK细胞活性及IL-2水平动态观察均明显低于正常对照组(P<0.05),至放疗30个月后NK细胞活性及IL-2水平恢复近正常水平。肿瘤复发转移者其NK细胞活性及IL-2水平明显低于无复发转移者(P<0.05)。30个月内肿瘤复发转移率为85.7％(60/,70)。结论 NPC病人免疫功能状况与肿瘤复发转移关系密切。动态观察和评价NK细胞活性及IL-2水平对判断NPC是否复发和转移有一定的指导意义。

哮喘患儿红细胞CD35定量与淋巴细胞天然免疫活性及CD2表达的相关性探讨

支气管哮喘是各种内外因素作用引发呼吸道过敏反应而导致的以支气管可逆性痉挛为特征的支气管慢性炎症疾病。近年来，免疫学机制参与哮喘的发生发展已得到广泛共识。本研究对哮喘患儿的红细胞天然免疫分子CD35与淋巴细胞天然免疫花环率及T淋巴细胞CD2进行测定，以探讨红细胞天然免疫与淋巴细胞天然免疫及获得性免疫间的相互关系及其在小儿哮喘发病机制中的作用。

银屑病患者红细胞CD35定量与淋巴细胞天然免疫活性及CD2表达的相关性研究

目的:探讨银屑病患者红细胞天然免疫分子CD35数量变化与淋巴细胞天然免疫活性及T淋巴细胞CD2分子数量变化的相互关系。方法:采用流式细胞仪荧光免疫法测定红细胞CD35、T淋巴细胞CD2分子数量的变化,用淋巴细胞黏附补体调理过的S180癌细胞株的方法测定淋巴细胞的天然免疫活性。结果:银屑病患者红细胞CD35和淋巴细胞天然免疫花环率均较正常人明显增高(P<0.05,P<0.001),且两者呈显著正相关(γ=0.514,P<0.001);红细胞CD35与T淋巴细胞CD2数量变化呈明显正相关(n=21,γ=0.395,P<0.05)。结论:银屑病患者红细胞CD35表达、淋巴细胞天然免疫活性亢进,而天然免疫功能的变化必然影响获得性免疫反应的进行模式。

瘦素介导2型固有淋巴细胞(ILC2)活化促进肥胖成人变应性鼻炎的发病

目的观察瘦素(leptin)对肥胖成人变应性鼻炎(AR)患者中2型固有淋巴细胞(ILC2)活化的作用并探讨其在发病机制中的作用及意义。方法选取70例AR患者纳入研究,根据体质量指数(BMI)分为肥胖AR组和非肥胖AR组,匹配同时期年龄、性别无差异的健康对照组30例。流式细胞术检测各组外周血单个核细胞(PBMC)中ILC2的比率,实时定量PCR检测瘦素mRNA表达,ELISA检测血清瘦素含量。分析瘦素与ILC2的相关性,再观察重组瘦素干预前后AR组PBMC中ILC2比率及相关免疫指标的变化。结果与健康对照组相比,AR组的瘦素及ILC2的表达均显著增高,且肥胖AR组的水平显著高于非肥胖AR组;在肥胖AR组的瘦素与ILC2的表达呈显著正相关;重组瘦素干预后,肥胖AR组的ILC2水平显著升高。结论肥胖成人AR的发病与其高表达的瘦素相关,瘦素介导下的ILC2活化促进其发病。

新型葡萄糖-2,5-二酮哌嗪衍生物的设计、合成与细胞毒活性

从海洋天然产物中挖掘高细胞毒活性化合物成为近年来抗肿瘤药物研究工作的一项重要内容。本研究以2,5-二酮哌嗪海洋天然产物Piperafizine B为修饰骨架,在其哌嗪环6位的苄叉邻位引入位阻较大的四乙酰基葡萄糖或葡萄糖基团,共合成了14个2,5-二酮哌嗪衍生物(1a-i,2a-f)。溶解性实验结果初步表明,相较于PiperafizineB,衍生物的脂溶性(1.5~27.9mg·mL^(-1),溶剂为二甲亚砜(dimethylsulfoxide,DMSO))与水溶性(0.1~0.9mg·mL^(-1),溶剂为磷酸缓冲液,pH7.4)均明显改善。衍生物的细胞毒活性评价结果表明,部分四乙酰基萄糖衍生物的细胞毒活性较好,半抑制率浓度值(IC50)为1.0~9.1μmol·L^(-1),并对Huh-7细胞的生长抑制活性具有一定的选择性(3.3~4.5μmol·L^(-1))。化合物1c的细胞毒活性最好,对癌细胞株K562、A549及Huh-7的IC_(50)值分别为1.0、3.6与3.3μmol·L^(-1)。而将乙酰基水解后的葡萄糖衍生物无明显细胞毒活性(IC50>10μmol·L^(-1))。

三种天然植物水溶物对H_(2)O_(2)损伤草鱼原代肝细胞的保护作用

为了探讨单一天然植物水溶物和复合植物水溶物对H_(2)O_(2)损伤草鱼原代肝细胞的修复作用,以诃子(terminalia chebularetz,TCR)、天然植物复合物1(RAT)、天然植物复合物2(JLT)水溶物冻干粉为试验材料,维生素C(VC)作为对照,以草鱼(Ctenopharyngodon idellus)离体培养的原代肝细胞为试验对象,利用H_(2)O_(2)建立损伤模型后分别添加含有0.1 mg/mL的TCR、RAT和JLT的细胞培养液培养24 h后检测细胞状态。结果表明:RAT、TCR和VC组与H_(2)O_(2)组相比细胞活力显著提高(P<0.05)。与H_(2)O_(2)组相比,RAT、TCR和VC组过氧化氢酶(CAT)活性均极显著上升(P<0.01),天然植物水溶物组和VC组谷胱甘肽(GSH)含量极显著升高(P<0.01),丙二醛(MDA)含量显著下降(P<0.05),超氧化物歧化酶(SOD)活性极显著下降(P<0.01),RAT组和JLT组细胞凋亡率显著降低(P<0.05),天然植物水溶物组和VC组活性氧(ROS)水平均极显著降低(P<0.01),天然植物水溶物组线粒体膜电位(MMP)均有不同程度的升高。电镜结果显示H_(2)O_(2)组细胞线粒体肿胀、嵴消失,天然植物水溶物组细胞嵴消失情况减缓,自噬小体和自噬溶酶体数量略有增加。Western Blot结果显示,与H_(2)O_(2)组相比,天然植物水溶物组Bax蛋白的表达量均有显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01),凋亡蛋白活性被抑制。转录组结果显示,天然植物水溶物能减缓细胞损伤是多个通路共同作用的结果。综上所述,天然植物水溶物对草鱼原代肝细胞的氧化应激损伤具有缓解作用,减少细胞损伤程度,对肝细胞的保护与损伤修复作用具有一定效果。

日本血吸虫多肽SJMHE1通过抑制哮喘小鼠肺组织中Th2细胞和ILC2反应减轻小鼠气道炎症

目的探索日本血吸虫多肽SJMHE1(VPGGGTALLRCIPVLDTLSTKNED)对卵清蛋白诱导的哮喘小鼠2型辅助T(Th2)细胞、2型固有淋巴细胞(ILC2)反应的干预作用和机制。方法将6~8周龄雄性BALB/c小鼠随机分成PBS组、卵清蛋白(OVA)组、OVA-PBS组和OVA-SJMHE1组。用OVA诱导小鼠支气管哮喘模型,HE染色观察小鼠肺组织病理改变,ELISA检测小鼠血清中OVA特异性IgE水平,用血细胞计数板计数肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞总数,流式细胞术检测小鼠BALF中的Th2细胞和ILC2,用实时荧光定量PCR检测肺组织中的白细胞介素4(IL-4)、IL-5、IL-13、IL-35和GATA结合蛋白3(GATA3)mRNA的表达水平。结果与PBS组相比,OVA组和OVA-PBS组小鼠肺组织炎性细胞浸润明显,气道黏液分泌明显增多,OVA组小鼠血清中的IgE水平升高,肺组织中的IL-4、IL-5、IL-13、GATA3 mRNA的表达水平均显著升高,IL-35 mRNA的表达水平显著下降。与OVA组和OVA-PBS组相比,OVA-SJMHE1组血清特异性IgE水平无显著变化,但是肺IL-4、IL-5、IL-13、GATA3 mRNA的表达水平均显著下降,IL-35 mRNA的表达水平无显著改变;而且,BALF中Th2细胞和ILC2比例明显减少。结论SJMHE1可通过抑制哮喘小鼠肺部Th2细胞和ILC2反应,减轻哮喘小鼠的气道炎症。

Ⅱ型固有淋巴样细胞(ILC2)通过分泌IL-13减缓类风湿性关节炎患者的发病进程

目的研究Ⅱ型固有淋巴样细胞(ILC2)在类风湿性关节炎(RA)中的变化及可能的机制。方法收集RA患者进行28个关节疾病活动度评分(DAS28),并收集外周血标本。全自动血沉器检测血沉(ESR)、免疫透射浊度法检测C反应蛋白(CRP)。免疫比浊法检测类风湿因子(RF)、化学发光法检测抗环瓜氨酸肽抗体(ACCP)。流式细胞术检测RA患者ILC2比例,Spearman相关分析方法分析ILC2与上述疾病相关指标的相关性。将RA患者分为低疾病活动度(DAS28<3.2)和高疾病活动度(DAS28≥3.2)两组,流式细胞术检测白细胞介素13(IL-13)在RA患者ILC2的表达,并比较IL-13不同疾病活动度RA患者表达的差异。结果与健康人相比,RA患者外周血ILC2比例显著升高,ILC2绝对数增加,且与ESR、CRP、DAS28呈负相关。高疾病活动度RA患者ILC2分泌的IL-13显著低于低疾病活动度患者。结论ILC2通过分泌IL-13抑制RA患者疾病活动。

天然衍生脱细胞牛心包复合BMP-2转染的BMSCs引导骨组织再生的体外实验研究

目的:研究天然衍生脱细胞牛心包复合BMP-2转染BMSCs引导骨组织再生的可行性和有效性。方法:天然衍生脱细胞牛心包体外复合BMP-2转染BMSCs,SEM评估细胞生长与增殖,MTT法检测牛心包对转染细胞的毒性,ELISA检测BMP-2含量,结晶紫染色法测定BMSCs细胞粘附能力,ALP活性实验检测转染BMSCs成骨性能。结果:SEM发现天然衍生脱细胞牛心包复合BMP-2基因转染的BMSCs后,细胞生长并增殖良好;各组细胞的存活率没有显著性差异;天然衍生脱细胞牛心包增强了BMP-2转染BMSCs的细胞粘附能力和成骨细胞转化能力。结论:天然衍生脱细胞牛心包复合BMP-2基因转染BMSCs后,具有良好的生物和细胞相容性,有望成为一种优良的天然GBR膜材料。

新生小鼠肺脏2型固有淋巴细胞(ILC2)的分离与培养

目的探讨并建立新生小鼠肺脏2型固有淋巴细胞(ILC2)分离和培养方法。方法采用免疫磁珠富集结合流式细胞分选法分离ILC2,流式细胞术鉴定ILC2纯度;倒置显微镜观察细胞生长状态;ELISA检测白细胞介素5(IL-5)、IL-13表达水平;CCK-8法检测ILC2的细胞活力。结果经分离的ILC2细胞纯度可达到95%以上,ILC2呈圆形或椭圆形,悬浮于细胞培养液中。给予IL-2、IL-7联合IL-33刺激后,ILC2产生的IL-5、IL-13含量明显增加且所得的ILC2具有明显的增殖能力。结论建立了一种快速、高效的分离和培养新生小鼠肺脏ILC2的方法。

清热润燥口服液对哮喘小鼠ILC2s上下游细胞因子的影响

目的通过清热润燥口服液干预卵清蛋白(OVA)致敏的哮喘小鼠,观察其对哮喘小鼠Ⅱ型固有淋巴细胞(ILC2s)数量及其上下游细胞因子的影响。方法将BALB/c小鼠(雌性)分为空白对照组、模型对照组、阳性对照组(地塞米松组,1 mg/(kg·d))、清热润燥口服液低、高(4.32、8.64 g/(kg·d))剂量组,共40只。使用OVA为致敏剂诱导哮喘小鼠模型,HE染色观察小鼠肺组织的病理改变;酶联免疫吸附(ELISA)测定检测小鼠肺泡灌洗液(BALF)中ILC2s上下游细胞因子Eotaxin、IL-25、IL-33、TSLP、IL-4、IL-5及IL-6含量;免疫组化法检测肺组织ILC2s上下游细胞因子IL-33和IL-5的表达;流式细胞术和免疫双荧光染色检测肺组织中ILC2s的数量及生成。结果与空白对照组比较,模型对照组小鼠出现肺组织炎性细胞浸润和支气管壁增厚的病理变化,BALF中ILC2s上下游细胞因子Eotaxin、IL-25、IL-33、TSLP、IL-4、IL-5及IL-6的含量升高(P<0.01),肺组织中ILC2s上下游细胞因子IL-33及IL-5的表达升高(P<0.01)、ILC2s的数量及生成增多(P<0.01)。与模型对照组比较,清热润燥口服液低高剂量明显改善哮喘小鼠肺组织病理损伤,降低BALF中ILC2s上下游细胞因子表达(P<0.01)、下调肺组织中ILC2s上下游细胞因子IL-33及IL-5的表达(P<0.05,P<0.01)和减少ILC2s的数量及生成(P<0.01)。结论清热润燥口服液可以降低OVA诱导的哮喘小鼠ILC2s的数量及其上下游细胞因子和下调肺组织中IL-33及IL-5的表达,进而起到防治哮喘的作用。