苦味酸-天狼星红染色观测脱细胞真皮基质胶原亚型的变化

目的:研究脱细胞真皮基质异体移植后不同时期胶原亚型的变化。方法:移植脱细胞真皮基质于大鼠背部皮肌下,分别于术后1、2、3、4、8、16、24周切取标本,切片常规HE染色,并行苦味酸-天狼星红染色分析Ⅰ/Ⅲ型胶原比例。结果:HE染色,2周,成纤维细胞(FB)增多,新生胶原增加;4周,见不到典型的FB;8周,胶原纤维排列平行。苦味酸-天狼星红染色,偏振光显微镜下见脱细胞真皮基质胶原支架具有明显的层次感。0点、1、2、3、4、8、16、24周Ⅰ/Ⅲ型胶原比例分别为2.88±0.15、2.81±0.27、2.22±0.28、1.96±0.17、1.85±0.23、2.02±0.22、2.43±0.27、2.73±0.25(F=16.84)。2、3、4和8周数值与0点相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:苦味酸-天狼星红染色可观测脱细胞真皮基质胶原亚型动态变化;脱细胞真皮基质胶原亚型不同时期呈现规律性升降。

天狼星红染色法结合图像分析在放射性肺纤维化研究中的应用

应用天狼星红染色切片进行偏振光显微镜观察，可明确地区分Ⅰ、Ⅲ型胶原并显示两型胶原在肺组织中的分布及其变化规律，配合图像分析法，可以测定不同剂量照射后三个月各组肺内Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维的比值变化；将这一方法与肺组织羟脯氨酸含量测定相比较，表明二者在显示肺纤维化程度和变化趋势上具有相同的结果。

天狼星红苦味酸染色法和MASSON染色法在显示大鼠肾脏胶原纤维的比较应用

目的比较天狼星红苦味酸染色法和MASSON三色染色法用于大鼠肾脏标本胶原纤维染色的效果。方法建立大鼠单侧输尿管梗阻肾间质纤维化模型,取梗阻侧肾脏标本,行天狼星红染色和MASSON三色染色,图像分析软件测定肾间质胶原面积。结果天狼星红染色和MASSON三色染色都能显示出胶原纤维,两种方法测定胶原面积无显著差异。天狼星红染色标本在偏光显微镜观察能分辨胶原类型。结论天狼星红苦味酸染色法比MASSON三色染色法操作步骤简单,是显示胶原的优良方法。

双氢青蒿素对实验性小鼠肝纤维化的抑制作用

目的探讨双氢青蒿素对胆总管结扎引起的小鼠肝纤维化的抑制作用及其作用机制。方法 50只C57BL-6小鼠随机分为假手术组(n=10)、模型组(n=20)和治疗组(n=20)。模型组:采用胆总管结扎的方法建立小鼠肝纤维化模型;治疗组:在胆总管结扎术后第3周开始以20μg/g的双氢青蒿素灌胃,1次/d,共12次。假手术组:只是分离出胆总管,置线不结扎并缝合腹腔后第3周开始以等剂量的DMSO 0.9%氯化钠溶液灌胃,1次/d,共12次。3组的肝组织切片经HE和天狼猩红染色法观察其组织学病理变化;Western blot方法检测Ⅰ型胶原和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)蛋白的表达水平。结果经HE和天狼星红染色法结果证实小鼠肝纤维化动物模型的成功建立。模型组小鼠肝内出现灶状坏死,汇管区纤维组织和胆总管明显增生,肝组织中Ⅰ型胶原蛋白和α-SMA含量增加,与假手术组相比其差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组经过双氢青蒿素治疗后,小鼠肝内纤维组织增生降低,肝组织中Ⅰ型胶原蛋白和α-SMA含量降低,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论双氢青蒿素具有抗肝组织纤维化作用,提示可作为一种新型抗肝组织纤维化药物。

骨折愈合过程中胶原纤维类型分布的动态变化

目的 :寻找一种简便、快捷、灵敏的观察骨折愈合过程中胶原类型、分布动态变化的方法。方法 :在健康中国绵羊左跖骨中段制造一个 1cm长的骨缺损。分别在术后 1、 3、 6个月取材 ,苦味酸天狼星红染色 ,偏振光显微镜观察。结果 :术后 1个月 ,骨折局部Ⅲ型胶原纤维占大多数 ;术后 3个月 ,骨折处Ⅰ型胶原纤维明显增加 ,但排列尚未有序 ;术后 6个月 ,Ⅰ型胶原纤维增粗、增多 ,呈斜行螺旋状交叉排列。结论 :苦味酸天狼星红偏振光不仅能区分Ⅰ、Ⅲ型胶原的类型还能清晰地显示Ⅰ、Ⅲ型胶原的形态、分布和比例关系 ,具有操作简单、省时、花费少 ,而且特异性强、灵敏度高。

骨延长区组织愈合过程中胶原变化的偏光显微镜观察

目的观察骨延长区骨组织修复过程中胶原变化特点及规律。方法健康新西兰白兔27只,制成左胫骨中段骨延长模型,于术后第5天以1.5mm/d延长,共延长14d。于延长结束时,延长结束后7、14、21、30、40、50、60和70d分批处死动物,取材(n=3)。石蜡包埋切片,饱和苦味酸天狼星红染色,偏光显微镜观察新骨组织的胶原变化。结果延长区胶原变化主要有以下特点:1在延长结束时及延长结束后的早期纤维组织中,除型胶原外,还含有大量型胶原;2在软骨组织中有、和型胶原;3假性生长板中存在、和型胶原;4骨延长区新骨再生与修复的后期型胶原占绝对优势。结论骨延长区的骨组织修复是在牵张应力下进行的,其胶原变化显示出与骨折愈合不同的特点;饱和苦味酸天狼星红染色后,在偏光显微镜下可清晰地区分、和型胶原,为研究骨组织修复过程中胶原变化的分型提供了新的方法。

Ⅰ型、Ⅲ型胶原在老年传输功能障碍性结肠便秘患者检测中的临床意义

目的Ⅰ型、Ⅲ型胶原在老年传输功能障碍性结肠便秘患者检测中的临床意义。方法选择2014年1月至2016年12月手术切除结肠的老年传输功能障碍性便秘30例为观察组。选择同期行结肠手术治疗,非便秘性老年患者30例为对照组。观察2组结肠组织HE染色,2组黏Ⅰ型、Ⅲ型胶原免疫组织化学和天狼星红染色观察表达情况进行比较。结果对照组未见明显的炎性反应,未发现黏膜下层和肌间神经丛病变的发生。观察组可见黏膜层明显的慢性炎性反应,见大量的嗜酸性粒细胞浸润,主要集中在固有膜中,黏膜下肌层明显增厚,胶原纤维化;肌层胶原纤维明显增生,肌间神经丛细胞空泡变性和减少。免疫组织化学结果显示观察组Ⅰ型、Ⅲ型胶原表达的IOD值明显高于对照组,差异有统计学意义(P <0. 01)。苦味酸天狼星红染色结果显示观察组的Ⅰ型胶原纤维明显较对照组明显降低(P <0. 01),而Ⅲ型胶原表达面积百分比明显高于对照组(P <0. 01)。结论老年传输功能障碍性结肠便秘患者结肠壁I型、Ⅲ型胶原出现明显增多,其中以Ⅲ型胶原增加更为明显,对该疾病的诊断和治疗提供重要的参考。

人、猪、大鼠来源网状层真皮组织学及材料学表征的比较

背景:课题组以往研究证实,猪边腹部网状层真皮质地柔软,伸展性也较其他部位好,适合作为异种脱细胞真皮的制作材料,但将其与人网状层真皮和大鼠网状层真皮进行组织形态学和材料学表征的系统对比未见相关报道。目的:研究猪边腹部、大鼠背部与人网状层真皮在组织学、生物力学、分子结构和热稳定性等方面的差异。方法:取人、猪边腹部、Wistar大鼠背部网状层真皮标本并大体观察,石蜡切片后行苏木精-伊红染色、苦味酸-天狼星红染色,显微照相后用图像分析软件测量分析;样本真空干燥并复水后用电子拉伸机测量其力学性能并计算杨氏模量;真空干燥后的样品研碎后用傅里叶红外光谱仪及同步热分析仪分析测量。结果与结论:猪边腹部网状层真皮胶原纤维束直径与人网状层真皮无差异,大鼠背部胶原纤维束较人网状层真皮细(P<0.01);猪边腹部网状层真皮间隙率较人网状层真皮低(P<0.01),大鼠网状层真皮间隙率与人网状层真皮相似(P=0.17)。猪网状层真皮胶原纤维排列紧密杂乱,Ⅰ型胶原蛋白含量及Ⅰ型、Ⅲ胶原蛋白比值高于人网状层真皮(P<0.05),Ⅲ胶原蛋白含量低于人网状层真皮(P<0.05);大鼠网状层真皮Ⅰ型和Ⅲ胶原蛋白含量及其比值与人网状层真皮相近(P>0.05)。3种网状层真皮杨氏模量差异无显著性意义。大鼠网状层真皮胶原蛋白分子有较多的氢键参与,人较少,猪介于两者之间;大鼠网状层真皮热稳定性较好,人和猪次之。

陈皮酵素可体内抑制小鼠的肝纤维化

目的研究陈皮酵素在体内抗肝纤维化的作用。方法119只雄性C57BL/6小鼠随机分为4组:模型组(n=49)、实验组(n=56)、对照组(n=7)和陈皮酵素组(n=7)。模型组灌胃40%CCl4橄榄油溶液(3×0.1 mL/周);实验组灌胃40%CCl4橄榄油溶液(3×0.1 mL/周)和陈皮酵素(0.26 mL/d);对照组和陈皮酵素组分别给予橄榄油(3×0.1 mL/周)和陈皮酵素(0.26 mL/d),共8周。采用腹腔注射CCl4的方法来构建小鼠肝纤维化模型,模型组和实验组每周处死7只小鼠,对照组和陈皮酵素组小鼠第8周处死,收集肝脏标本和血清。用HE染色和天狼星红染色观察各组小鼠肝组织病理改变,测定血清甘氨酸、丙氨酸氨基转移酶、谷氨酰胺转氨酶、碱性磷酸酶水平。结果HE和天狼星染色结果显示,只灌胃CCl4的模型组,肝纤维化程度逐渐加深,表现为汇管区明显的脂肪变性、坏死和炎性细胞浸润。但给予陈皮酵素的实验组炎症程度较模型组减轻,表现为空泡化和炎症细胞浸润减少,胶原沉积减少且实验组Ishak评分显著低于模型组(P<0.05)。与模型组相比,实验组血清肝功能指标甘氨酸、丙氨酸氨基转移酶、谷氨酰胺转氨酶、碱性磷酸酶水平显著降低(P<0.05)。结论陈皮酵素有肝保护作用,可以显著减轻肝纤维化程度。