天珠散对缺血性脑卒中大鼠神经功能缺损及Wnt3a、MAP-2表达的影响

目的研究天珠散对缺血性脑卒中大鼠神经功能损伤的保护作用机制。方法选取90只雄性SD大鼠,随机取10只作为假手术组,其余大鼠参照Longa线栓法制备大脑中动脉栓塞脑缺血再灌注模型。将造模成功后的大鼠随机分为模型组、尼莫地平组及天珠散低、中、高剂量组,每组16只。造模12 h后,尼莫地平组给予尼莫地平20 mg/kg灌胃,天珠散低、中、高剂量组分别给予天珠散300 mg/kg、600 mg/kg、1200 mg/kg灌胃,假手术组和模型组给予蒸馏水灌胃,均1次/d,连续10 d。分别于灌胃第1天、第3天、第5天、第7天、第10天对各组大鼠进行Longa评分及转棒实验(记录转棒停留时间);末次灌胃结束后2 h,MRI扫描成像和TTC染色测定大鼠脑梗死体积,HE染色观察脑组织病理形态,Western blot法检测脑组织中Wnt3a、微管相关蛋白2(MAP-2)蛋白表达情况。结果与假手术组比较,模型组大鼠出现明显神经功能缺损和梗死灶,转棒停留时间明显缩短(P<0.05),脑组织中Wnt3a蛋白相对表达量明显升高(P<0.05),脑组织中MAP-2蛋白相对表达量明显降低(P<0.05);缺血侧海马CA1区锥体细胞排列稀疏紊乱,神经元肿胀或萎缩脱失,空泡样改变。与模型组比较,各给药组大鼠Longa评分、脑梗死体积比、脑组织中Wnt3a蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05),转棒停留时间均明显延长(P均<0.05),脑组织中MAP-2蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05);缺血侧脑组织病理损伤有所减轻,神经细胞排列规则,空泡样变和坏死数相对减少,其中尼莫地平组和天珠散高剂量组改善更明显。结论天珠散可能通过调控Wnt信号通路关键效应分子Wnt3a及MAP-2蛋白的表达,促进神经细胞增殖分化和突触重塑,发挥对脑缺血的神经保护作用。

天珠散对D-半乳糖拟痴呆小鼠的治疗作用

目的探讨天珠散对D-半乳糖拟痴呆小鼠的治疗作用。方法小鼠颈背部皮下注射D-半乳糖56 d制备拟痴呆模型,造模14 d后预防给予天珠散42 d,采用物体识别检测小鼠的认知能力,生化法检测脑组织超氧化物歧化酶(SOD)水平、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平、丙二醛(MDA)等含量。结果天珠散450、900、1800mg/kg可不同程度改善模型小鼠的认知能力,增强脑组织中SOD、GSH-Px的活力。结论天珠散能提高D-半乳糖拟痴呆小鼠的认知功能,改善脑组织自由基代谢状态。

土家药天珠散防治血管性痴呆的有效成分与作用机制研究

目的明确土家族经验方天珠散的入血成分及其抗血管性痴呆的可能作用机制.方法采用双侧颈总动脉永久结扎复制慢性低灌注型血管性痴呆大鼠模型,常规饲养60d后灌胃给予天珠散0.1g·kg^-1,给药体积2mL·（100g）^-1,连续3d,制备含药血清;采用UPLC检测天珠散入血成分并推测其结构;使用Dis-coveryStudio35软件进行反向找靶,并将获得的潜在靶标基因在线提交DAVID数据库进行基因富集分析.结果共推断获得天珠散5个入血成分,鉴定其中4个成分为ParishinB、ParishinC、Parishin、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-（1→2）-β-D-葡萄糖苷;经反向找靶,获得Fitvalue≥0.6的药效团模型861个,从KEGG、BIOCARTA获得pathway9条.结论对于少数民族传统经验方,在药效验证的前提下,综合采用血清药物化学、计算机辅助药物设计、系统生物学等技术,将有益于民族效验方物质基础、作用机制的快速发现.

基于传统知识调查和网络药理学的土家药天珠散增药组方抗脑卒中效益评价研究

目的 构建土家族方剂天珠散增药组方并探讨其抗脑卒中的效益性。方法 围绕疾病脑卒中,首先通过区域性问卷调查方法确定候选增药范围,然后利用网络药理学方法对候选药物与疾病靶点进行分析,确定最佳新组方,再依据土家族的“主帮客信”配伍理论,对新方展开合理性评析,最后利用分子对接方法,对新方治疗脑卒中的机制进行初步探究。结果 土家医推荐与天珠散配伍抗脑卒中的药物中,八角枫、三角风、头晕草排名靠前;对比各候选药物预测靶点与疾病靶点网络拓扑参数,确定了天珠散加头晕草为新方最佳配伍,其中天麻为主药,延龄草为帮药,头晕草可兼为帮、客、信药;新方可通过参与一氧化氮生物合成过程调控、磷酸化的正调控、对含氧化合物的反应、神经元投射维持等生物过程,对脑卒中疾病症状进行干预;分子对接结果显示,该组方成分26-chloro-26-deoxycryptogenin、β-ecdysterone、ecdysterone、gastrodin、4-hydroxycinnamic acid分别与蛋白APP、IL-6、MTOR、JAK2、TLR4具有良好的结合活性。结论 天珠散配伍头晕草具有合理性与效益性,其或可增加原方天珠散抗脑卒中效果。

土家药天珠散防治血管性痴呆的有效成分与作用机制研究

采用双侧颈总动脉永久结扎复制慢性低灌注型血管性痴呆大鼠模型,常规饲养60 d后灌胃给予天珠散0.1 g·kg-1,给药体积0.02 m L·g-1,连续3 d,制备含药血清;采用UPLC检测天珠散入血成分并推测其结构;使用Discovery Studio3.5软件进行反向找靶,并将获得的潜在靶标基因在线提交DAVID数据库进行基因富集分析。该文共推断获得天珠散5个入血成分,鉴定其中4个成分为parishin B,parishin C,parishin,偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-葡萄糖苷;经反向找靶,获得Fit value≥0.6的药效团模型861个,从KEGG,BIOCARTA获得经文献验证的信号通路Cytokine-cytokine receptor interaction,Apoptosis等9条,提示天珠散改善血管性痴呆的药理作用与机制可能与上述入血成分及相关信号通路有关。对于少数民族传统经验方,在药效验证的前提下,综合采用血清药物化学、计算机辅助药物设计、系统生物学等技术,将有益于民族效验方物质基础、作用机制的快速发现。

土家药天珠散对脑缺血所致大鼠学习记忆障碍的改善作用

目的研究天珠散对脑缺血所致的血管性痴呆(VD)大鼠学习记忆相关指标的影响。方法双侧颈总动脉永久性结扎复制脑缺血所致学习记忆障碍大鼠模型,天珠散连续ig给药63 d,以Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力,脑海马组织HE染色和Nissl染色观察病理变化,免疫组织化学法检测大鼠海马微管相关蛋白-2(MAP-2)、突触素-1(SYN-1)表达。结果 Morris水迷宫实验,从第2天开始,模型组大鼠逃避潜伏期明显长于假手术组(P<0.05、0.01),尼莫地平组和天珠散给药组大鼠逃避潜伏期较模型组不同程度缩短(P<0.05、0.01)。HE染色显示模型组大鼠脑海马CA1、CA3区神经细胞出现变形、坏死,尼莫地平、天珠散能减轻神经细胞损伤。Nissl染色显示,天珠散能增加海马CA1、CA3区尼氏体含量。尼莫地平能显著提高大鼠脑海马MAP-2表达,天珠散有增加MAP-2表达的趋势。SYN-1在不同区域表达结果不同,CA1、齿状回区模型组增加,CA3区下降,天珠散具有增加CA3区SYN-1表达趋势。结论天珠散能通过减轻脑组织神经细胞的损伤、促进神经递质的合成,调节MAP-2、SYN-1表达,改善慢性低灌注型VD大鼠的学习记忆能力。

基于系统药理学的天珠散抗血管性痴呆机制研究

目的:明确天珠散介导的大鼠基因表达差异,阐释其抗血管性痴呆(VD)机制。方法:文章利用全基因组芯片检测技术确定差异表达基因,在数据库中查找差异基因表达的蛋白,通过中药语法系统推理规则,建立差异基因表达蛋白与VD相关靶点的生物网络,并推断两者间的相互作用关系。结果:通过给药组与模型组比较,得到差异表达基因229条,其中上调基因(>2)219条,下调基因(<0.5)10条。通过对生物网络的分析得到天珠散抗VD的3条作用途径。结论:天珠散通过介导大鼠基因表达产生差异并通过影响差异基因表达蛋白下游的生物网络发挥抗VD的作用。

天珠散改善D-半乳糖致拟痴呆小鼠学习记忆能力的作用研究

目的探讨天珠散对D-半乳糖拟痴呆小鼠学习记忆能力的影响及神经细胞保护作用。方法小鼠颈背部皮下注射D-半乳糖56天制备拟痴呆模型,造模14天后预防给予天珠散42 d,八臂迷宫检测小鼠学习记忆能力变化,HE和Nissl染色观察小鼠脑组织的海马结构与神经细胞状态。结果天珠散(TZS)450,900,1800mg/kg可降低拟痴呆小鼠参考记忆错误(RME)、工作记忆错误(WME)水平(P<0.05);减轻脑老化引起的海马组织CA1区神经元变性和尼氏小体丢失。结论天珠散能改善D-半乳糖致拟痴呆小鼠的学习记忆能力,对海马组织神经细胞有保护作用。