反相高效液相色谱法测定草莓天竺葵素-3-O-葡萄糖苷的含量

为了测定草莓中天竺葵素-3-O-葡萄糖苷的含量,建立了一种反相高效液相色谱法。采用Waters Symmetry C18色谱柱（5μm,4.6 mm×150 mm）,流动相A为10%甲酸,流动相B为乙腈。线性梯度洗脱设计为：0～13 min,乙腈为0～20%,20 min,乙腈为40%,25 min,乙腈为0。检测波长为520 nm,进样量为每针20μL,柱温25℃,流速为1 mL·min^-1。结果表明,天竺葵素-3-O-葡萄糖苷在浓度为0.25～20μg·mL^-1范围内有良好的线性关系,线性回归方程为y=71 859x＋13 792,相关系数为0.9993,回收率为98.29%～102.69%,相对偏差3.03。本测定方法简便、准确、快速、稳定,适合于测定草莓及其他蔬菜水果中天竺葵素-3-O葡萄糖苷的含量。

从布渣叶中制备异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷的研究

目的从布渣叶中分离制备高纯度异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷。方法采用大孔吸附树脂富集布渣叶总黄酮,用Sephadex LH-20凝胶柱从布渣叶总黄酮中分离化合物单体,并采用IR、MS和1H-NMR、13C-NMR对其进行结构鉴定,利用TLC和HPLC对其纯度进行测定。结果从布渣叶中分离出异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷,其质量分数大于98.0%。结论该方法简便有效,可以从布渣叶中制备异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷对照品。

海金子中柽柳素-3-O-芸香糖苷和芦丁的分离及含量测定

目的研究海金子70%乙醇提取物的化学成分;建立HPLC测定海金子中柽柳素-3-O-芸香糖苷、芦丁的含量。方法采用硅胶柱色谱进行分离纯化,利用波谱技术、色谱技术进行结构鉴定。采用Agela Technologies PromosilC18（200 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为甲醇-0.4%磷酸水溶液（34∶66）,流速为1.0 mL/min,检测波长为254 nm,柱温为40℃对不同采集时间、不同部位的海金子中的柽柳素-3-O-芸香糖苷、芦丁进行含量测定。结果分离鉴定了2个黄酮苷类化合物,分别为柽柳素-3-O-芸香糖苷和芦丁。柽柳素-3-O-芸香糖苷在0.254-1.145μg范围、芦丁在0.341-1.533μg范围与其峰面积呈良好的线性关系;平均回收率：柽柳素-3-O-芸香糖苷为100.08%,RSD为1.09%（n=6）,芦丁为99.89%,RSD为1.41%（n=6）。结论两种化合物首次从该植物中分离得到。所建立的HPLC简便、准确、重现性好,结果准确可靠,可用于海金沙中柽柳素-3-O-芸香糖苷和芦丁的测定。

骆驼刺中异鼠李素-3-O-β-D芸香糖苷对照品的制备研究

目的建立骆驼刺中异鼠李素-3-O-β-D芸香糖苷对照品的制备分离方法。方法取骆驼刺药材醇提浸膏的正丁醇萃取部分，用硅胶柱色谱分离，依次用氯仿-甲醇（90：10～70：30）、氯仿-甲醇-水（70：30：10～60：40：10）梯度洗脱，收集异鼠李素-3-O-β-D芸香糖苷富集流份，继续采用凝胶柱色谱及制备HPLC进行分离纯化，通过NMR、MS等波谱方法鉴定化合物结构，经TLC、HPLC等技术进行质量分数检测。结果从骆驼刺中制备分离的异鼠李素-3-O-β-D芸香糖苷对照品，质量分数〉99％。结论本法得到的异鼠李素-3-O-β-D芸香糖苷对照品符合中药化学对照品的相关技术要求，为骆驼刺药材和的骆驼刺成方制剂的质量控制及药效物质基础研究提供化学对照品。

桑叶中山奈酚-3-O-芸香糖苷水热酸控质子化作用

KR(山奈酚-3-O-芸香糖苷)具有药理高附加值。采用水热酸控醇提法提制桑叶中KR,优化获得KR浸提适宜参数,构建动力学模型,探究KR的传质溶浸过程。结果表明:投加柠檬酸质量浓度0.050 g/L,桑叶与45%的乙醇溶液质量体积比为1∶20 g/mL,80℃水热反应釜中处理40 min,2.00 g桑叶可溶浸KR 16.09 mg/g,是自动中药煲水热浸提KR(0.41 mg/g)的40倍;SEM(扫描电镜)显示水热酸控反应后桑叶表面孔隙明显增多增大,FT-IR(傅里叶变换红外光谱)表明水热酸控反应有利于桑叶C-O、C-H等键水裂解,KR溶浸满足一级动力学模型,溶出速率为-3.45 min-1,为桑叶高值化开发提供理论依据。

矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(C3G)通过靶向TOPK抑制结直肠癌细胞的增殖

目的研究矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(C3G)对结直肠癌增殖的影响及机制。方法采用体外结合及体外激酶实验检测C3G与T细胞淋巴因子活化杀伤细胞来源的蛋白激酶(TOPK)的结合能力及对其活性的影响;采用软琼脂试验检测C3G对结肠癌细胞克隆形成能力的影响;采用MTS法测定C3G的细胞毒性;采用大肠杆菌BL21表达GST-组蛋白H3融合蛋白;采用慢病毒感染的方法,检测C3G对沉默TOPK的结肠癌细胞克隆形成能力的影响;Western blot法检测HCT116细胞中C3G对TOPK下游分子组蛋白H3的磷酸化的水平;建立结肠癌患者癌组织异种移植小鼠模型,免疫组织化学染色法检测组蛋白H3的磷酸化水平。结果C3G在体外直接与TOPK结合并抑制TOPK活性;C3G以浓度依赖的方式抑制结肠癌细胞的增殖及克隆形成;沉默TOPK降低结肠癌细胞对C3G的敏感性;C3G以时间和浓度依赖的方式抑制TOPK下游分子组蛋白H3的磷酸化水平;另外,C3G抑制患者来源的结肠癌组织异种移植瘤小鼠体内肿瘤的生长。结论C3G通过靶向TOPK抑制结直肠癌的生长。

山萘酚-3-O-芸香糖苷磷脂复合物的制备与理化性质研究

目的:山萘酚-3-O-芸香糖苷磷脂复合物的制备和理化性质考察。方法:制备山萘酚-3-O-芸香糖苷的磷脂复合物,测定其与山萘酚-3-O-芸香糖苷的溶解度,并对两者的水油分配系数进行分析。结果:与山萘酚-3-O-芸香糖苷相比,磷脂复合物不仅在正辛醇中溶解性有明显改善,在水中溶解度也有所升高;在不同pH的水-正辛醇系统中,复合物的表观油-水分配系数与山萘酚-3-O-芸香糖苷相比有一定的差异。结论:山萘酚-3-O-芸香糖苷磷脂复合物可明显改善山萘酚-3-O-芸香糖苷在水及正辛醇中的溶解性能。

HPLC法测定枫蓼肠胃康片中山奈酚-3-O-芸香糖苷的含量

目的采用高效液相色谱法测定枫蓼肠胃康片中山奈酚-3-O-芸香糖苷的含量。方法采用岛津LC-20AD高效液相色谱仪,以乙腈-0.4%甲酸（16∶84）为流动相,流速1.0m L·min-1,检测波长346nm,柱温：35℃。结果山奈酚-3-O-芸香糖苷线性范围为6.92~69.2μg·m L-1（r=0.9997）,平均回收率（n=6）为98.69%.结论本法可测定枫蓼肠胃康片中山奈酚-3-O-芸香糖苷的含量,可用于该产品的质量控制。

山柰酚-3-O-芸香糖苷对血管平滑肌细胞增殖、迁移及TGFBR1信号通路活化的影响

目的:探索山柰酚-3-O-芸香糖苷(KR)对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖、迁移及转化生长因子β受体1(TGFBR1)信号通路活化的影响。方法:将KR(10、20和40μmol/L)孵育大鼠VSMC细胞系A7R5 24 h,或将40μmol/L KR孵育A7 R5细胞24、48和72 h后,MTT法检测细胞活力,Ed U染色检测细胞增殖情况,Transwell小室实验检测细胞迁移能力的变化,Western blot检测细胞迁移相关蛋白基质金属蛋白酶2(MMP2)及基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达;分子对接技术探索KR与TGFBR1之间的相互关系,Western blot检测TGFBR1及其下游的Smad2和Smad3的激活情况。结果 :KR剂量和时间依赖性地降低细胞活力,剂量依赖性地减少Ed U染色阳性细胞数量,降低迁移细胞数量,减少迁移相关蛋白MMP2和MMP9的表达(P<0.05)。KR与TGFBR1发生分子对接的结合力为-9.804 kcal/mol,与TGBFR1的SER-280、ARG-215、ASP-290和LYS-335氨基酸残基形成氢键连接。KR剂量依赖性地降低TGFBR1及其下游Smad2和Smad3的激活(P<0.05)。结论:KR能抑制VSMC的增殖和迁移,其机制可能与抑制TGFBR1信号通路相关。

LC-MS/MS法测定血浆中山奈酚-3-O-芸香糖苷浓度及其在大鼠药动学研究中的应用

目的：建立能够灵敏、特异、准确、可靠地测定血浆中山奈酚-3-O-芸香糖苷浓度的分析方法。方法：优化山奈酚-3-O-芸香糖苷（kaempferol-3-O-rutinoside，NFR）的离子化及其断裂方式，确定相关液相色谱条件，选择能有效地从血浆样品中提取NFR的样品前处理方法；开展方法学考察，以验证新建分析方法的准确性、精密度等，在此基础上将该方法用于分析大鼠静脉注射NFR后所得的实际血浆样品，以验证新建分析方法的适用性。结果：ESI（＋）为NFR提供最佳的离子化条件，采用SRM工作模式，用m／z595→287来检测NFR。同时，以左旋千金藤啶碱（1-Stepholidine）为内标物化合物（IS），其SRM检测采用m／z328→178。NFR及IS的色谱保留时间（tR）分别为2．3和2．2min。用乙酸乙酯（EtOAc）提取经HCl酸化的大鼠血浆样品，NFR和IS的回收率分别为58．5％～70．1％和72．5％。NFR和IS在整个分析过程中稳定。在0．192～600ng·ml^-1的浓度范围内，对NFR与IS的峰面积比值和NFR的血药浓度进行线性回归，其回归曲线线性良好（r=0．9999，n=6×5）。批内准确性为92％～107％，其精密度为1．0％～5．7％；批间准确性为94％～99％，其精密度为1．5％～8．4％。本方法的LLOQ为0．192ng·ml^-1。大鼠静脉给药单剂量NFR（30 mg·kg^-1）后，NFR的消除半衰期（T1/2）为1．27 h、体内平均滞留时间（MRT）为0．32 h，NFR在大鼠体内的清除率（CL）为2．73 L·h·kg^-1、稳态分布体积（VSS）为0．92 L·kg^-1。结论：应用LC-MS／MS技术建立的测定血浆中山奈酚-3-O-芸香糖苷浓度的新方法灵敏可靠，这项研究工作为全面开展NFR注射液的临床前药代动力学研究打下了重要的分析方法学基础。

桑椹矢车菊素-3-芸香糖苷抵抗链脲佐菌素诱导胰岛β细胞凋亡的作用

矢车菊素-3-芸香糖苷(C3R)是桑椹花青素的主要成分,研究从成熟桑椹中提取C3R对链脲佐菌素(STZ)诱导人源性胰岛β细胞凋亡的抑制作用及可能的调控机制。采用MTT法及流式细胞计数检测发现:桑椹C3R对正常胰岛β细胞株INS-1具有极显著的促增殖作用(P<0.01);50μg/m L桑椹C3R液处理STZ诱导凋亡模型胰岛β细胞株INS-1 48 h后,其早期凋亡、晚期凋亡和坏死的细胞数量极显著下降(P<0.01)。以经桑椹C3R液处理的STZ诱导凋亡模型胰岛β细胞的c DNA为模板,通过qRT-PCR检测细胞中的几个凋亡相关蛋白基因的转录水平变化,其中抗凋亡蛋白基因Bcl-x L的mRNA转录水平极显著上调(P<0.01),促凋亡蛋白基因Bad、Bax及Caspase 8、Caspase 6基因的mRNA转录水平极显著下调(P<0.01)。研究结果表明,桑椹C3R对STZ诱导的胰岛β细胞凋亡具有明显的抵抗作用,由此也证实了桑椹花青素的药用开发价值。

LC-MS/MS测定风味发酵乳中的矢车菊素-3-葡萄糖苷和矢车菊素-3-芸香糖苷

目的:建立了风味发酵乳中矢车菊素-3-葡萄糖苷(Cyanidin-3-glucoside,C3G)和矢车菊素-3-芸香糖苷(Cyanidin-3-rutinoside,C3R)的液相色谱串联质谱检测方法(Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry,LC-MS/MS)。方法:样品经三氯乙酸去除蛋白后,再用冷冻离心和正己烷去除脂肪。待测组分经Poly-Sery MCX固相萃取柱净化,采用多反应监测(MRM)模式进行检测,外标法定量。结果:目标化合物在一定范围内(3.12μg/L~100μg/L)线性关系良好,相关系数(R^(2))均大于0.995。样品中上述两种待测组分的定量限(LOQ)和检出限(LOD)均分别为5.00μg/kg、2.50μg/kg。不同加标浓度样品5.00μg/kg(LOQ)、10.0μg/kg(2×LOQ)、 50.0μg/kg(10×LOQ),C3G的加标回收率为103%~115%,相对标准偏差(RSDs)为4.17%~5.88%;C3R的加标回收率为105%~119%,相对标准偏差(RSDs)为5.32%~6.07%。8份市售发酵乳中均未检出这两种化合物。结论:该方法确认参数均能满足相关的技术规范的要求,为风味发酵乳中C3G和C3R的定性定量测定提供了技术支撑。

紫丁香花中山奈酚-3-O-芸香糖苷的提取工艺优化及含量动态变化规律

〔目的〕优化紫丁香花中山奈酚⁃3⁃O⁃芸香糖苷(KR)的提取工艺,探讨其含量的动态变化规律。〔方法〕以KR为指标,用高效液相色谱法测定紫丁香花中KR的含量,在单因素试验基础上,采用正交试验法确定KR的最佳提取工艺。〔结果〕固液比为1∶180,粉碎目数为70目,超声时间为50 min,离心转速为4000 r/min是紫丁香中KR最优提取条件。固液比和粉碎目数两因素对KR的提取量影响最大;在紫丁香开花的中期KR含量最高(8.58 mg/g),KR的含量整体呈现出先增加后降低的趋势。〔结论〕优化的提取工艺方法简单、可靠,稳定性好,可为后期KR的高效开发利用提供参考。

复配条件对矢车菊素-3-O-葡萄糖苷与β-胡萝卜素复合模拟体系物化稳定性的影响

为探讨富含花色苷及类胡萝卜素的复合果蔬汁中花色苷及类胡萝卜素的降解机制,选择自然界中分布最广、含量最多的花色苷及类胡萝卜素——矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(C3G)及β-胡萝卜素为对象,构建模拟体系,研究金属离子、pH值、糖种类及含量对C3G和β-胡萝卜素稳定性的影响。结果表明,C3G和β-胡萝卜素热降解均符合一级反应动力学,且两者的降解反应均为吸热非自发反应。C3G和β-胡萝卜素经复合后,C3G的稳定性无显著变化,而β-胡萝卜素稳定性降低。此外,不同糖种类及浓度对复合模拟体系中的C3G和β-胡萝卜素热降解的影响不同。糖类对C3G的促降解作用依次为果糖>蔗糖>葡萄糖,且随糖浓度的增大,花色苷稳定性逐渐增加。而3种糖类对β-胡萝卜素的作用不显著,且随糖浓度的增大,β-胡萝卜素稳定性逐渐下降。研究结果为富含花色苷及类胡萝卜素的复合果蔬汁的研发提供了理论依据。

矢车菊素-3-O-葡萄糖苷对H_2O_2诱导细胞氧化损伤的保护作用

目的:研究矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(C3G)对人胚肾HEK-293细胞氧化损伤的保护作用。方法:通过检测细胞活力、活性氧(ROS)水平和丙二醛(MDA)水平考察C3G对氧化损伤细胞的影响,并采用Western blot法和q RTPCR检测Nrf2和Keap1的蛋白表达量和m RNA表达量变化。结果表明:C3G预处理氧化应激细胞后,细胞活力显著高于H_2O_2损伤组(p <0.05),并呈浓度依赖性提高; H_2O_2损伤组的DCF荧光强于对照组,ROS相对含量增加到近2倍,1.25、5、20μmol/L C3G预处理后细胞荧光强度逐渐减弱,ROS相对量呈浓度依赖性降低; C3G预处理后细胞MDA水平呈浓度依赖性降低; 1.25、5、20μmol/L C3G处理后,Nrf2的m RNA表达和蛋白表达量均呈浓度依赖性上调,Keap1蛋白表达量显著低于H_2O_2损伤组(p <0.05),5和20μmol/L C3G对Keap1的m RNA下调作用明显。结论:矢车菊素-3-O-葡萄糖苷对HEK-293细胞有保护作用,可降低细胞ROS和MDA水平,其作用机制可能是通过激活Nrf2/Keap1信号通路以抵抗H_2O_2导致的细胞氧化损伤。

HPLC同时测定鹿衔草提取物中香草酸、金丝桃苷、槲皮素-3-O-呋喃阿拉伯糖苷、槲皮素和梅笠草素的含量

目的:建立HPLC同时测定鹿衔草提取物中香草酸、金丝桃苷、槲皮素-3-O-呋喃阿拉伯糖苷、槲皮素和梅笠草素的含量。方法:色谱柱:Zorbax SB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)柱,流动相:乙腈-0.1%醋酸水,梯度洗脱;柱温:35℃,流速:1.0 ml·min^-1,检测波长:255 nm。结果:香草酸、金丝桃苷、槲皮素-3-O-呋喃阿拉伯糖苷、槲皮素和梅笠草素分别在3.71~148.40μg·ml^-1(r=0.999 9)、5.92~236.70μg·ml^-1(r=0.999 8)、3.36~134.25μg·ml^-1(r=0.999 8)、3.94~157.80μg·ml^-1(r=0.999 9)和3.10~124.15μg·ml^-1(r=0.999 8)范围内线性关系良好,平均回收率分别为99.01%、98.80%、98.48%、98.71%和98.62%,RSD分别为0.95%、1.15%、1.36%、0.94%和1.02%(n=6)。结论:该方法快捷简便、准确性及重复性均良好,可用于鹿衔草提取物及相关制剂质量的评价和控制。

HPLC法测定牛耳枫中山奈酚-3-O-芸香糖苷的含量

目的:采用高效液相色谱法测定牛耳枫中山奈酚-3-O-芸香糖苷的含量。方法:采用岛津LC-20AD高效液相色谱仪,以乙腈-0.4%甲酸(16:84)为流动相,流速1.0ml·min^(-1),检测波长346nm,柱温:35℃,检测牛耳枫中山奈酚-3-O-芸香糖苷含量。结果:山奈酚-3-O-芸香糖苷线性范围为6.92~69.2μg·ml^(-1)(r=0.9997),平均回收率(n=6)为98.69%。结论:HPLC法测定牛耳枫中山奈酚-3-O-芸香糖苷的含量准确性高,可用于牛耳枫的质量标准控制。

HPLC同时测定鸭跖草提取物中咖啡酸、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷和异荭草素的含量

采用高效液相色谱法同时测定鸭跖草提取物中咖啡酸、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷和异荭草素的含量。色谱条件为:色谱柱为Phenomenex C18(250 mm×4.6 mm,5μm)柱,以甲醇(A)-体积分数0.1%甲酸水(B)梯度洗脱:0~17 min,22%A^42%A;17~28 min,42%A^56%A;28~40 min,56%A^90%A,检测波长为350 nm,流速为1 m L/min,柱温为35℃。咖啡酸、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷和异荭草素分别在2.16~86.4 mg/L、6.445~257.8 mg/L和3.293~131.7 mg/L范围内线性关系良好,平均回收率分别为98.36%,99.42%和98.00%。该方法准确、可靠、重复性好,可用于鸭跖草提取物的质量评价与控制。

不同产地不同采收时间枫香树叶中异槲皮苷和山奈酚-3-O-芸香糖苷含量的比较

目的:比较不同产地、不同采收期枫香树叶中异槲皮苷和山奈酚-3-O-芸香糖苷的含量。方法:采收相同产地下不同采收期和相同采收期下不同产地的枫香树叶,称重、晒干,并用HPLC法测定异槲皮苷和山奈酚-3-O-芸香糖苷的含量。结果:24批枫香树叶,同一采收期中江西余江、江西鹰潭、江西弋阳三个产地的枫香树叶异槲皮苷和山奈酚-3-O-芸香糖苷的总含量均较高;同一产地的8个采收期中,以5,6,7月份采收的枫香树叶异槲皮苷和山奈酚-3-O-芸香糖苷的总含量较高,12月份采收的异槲皮苷和山奈酚-3-O-芸香糖苷的总含量最低。结论:不同产地、不同采收期枫香树叶中异槲皮苷和山奈酚-3-O-芸香糖苷的含量存在明显差异,应注意生长环境和采收季节对枫香树叶药材质量的影响。

HPLC法测定金钱草中紫云英苷、山柰酚-3-O-芸香糖苷、槲皮素、山柰酚和异鼠李素

目的建立HPLC-UV法测定金钱草中紫云英苷、山柰酚-3-O-芸香糖苷、槲皮素、山柰酚和异鼠李素。方法采用Eclipse XDB-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,3.5μm),流动相为甲醇–0.4%磷酸水,梯度洗脱,检测波长360 nm,体积流量0.5 mL/min,柱温30℃,进样量10μL。结果紫云英苷、山柰酚-3-O-芸香糖苷、槲皮素、山柰酚、异鼠李素分别在22.10~176.80、21.14~169.12、17.40~174.00、51.12~408.96、23.30~186.40μg/mL呈现良好线性关系(R^(2)>0.9991);平均加样回收率分别为99.50%、100.39%、99.93%、105.58%、98.96%,RSD值分别为1.07%、1.44%、0.57%、0.24%、0.65%(n=6)。结论方法的重复性好,操作简单,结果准确,可以用来控制金钱草药材及其制剂的质量。