天花粉对2型糖尿病大鼠糖脂代谢和胰腺组织的影响

目的:探讨中药天花粉对高脂膳食和链脲佐菌素联合诱导的2型糖尿病大鼠的治疗作用及其可能的作用机制。方法:从60只雌雄各半的SD大鼠中随机抽取10只作为正常组,使用普通饲料喂养,剩余的50只大鼠使用高脂饲料喂养。4周后,腹腔注射链脲佐菌素(50 mg/kg),分别于注射后48 h、72 h测定大鼠空腹血糖,将连续2次空腹血糖≥16.7 mmol/L的大鼠确定为实验性糖尿病大鼠模型,根据血糖值将糖尿病大鼠随机分为模型组、二甲双胍组(0.3 mg/kg)、天花粉低剂量组(1.12 g/kg)、天花粉中剂量组(1.68 g/kg)和天花粉高剂量组(2.25 g/kg),每组10只。每天固定时间统一灌胃,持续4周,每周固定时间观察大鼠的一般症状,并测定其摄食量、摄水量、体质量和尿量。给药4周后,所有大鼠提前禁食不禁水12 h,尾静脉采血0.05 mL,测定大鼠空腹血糖,腹主动脉采血后处死大鼠并检测以下指标:各组大鼠的胰腺组织苏木精-伊红切片的病理改变,血清标本中的低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、总胆固醇、三酰甘油、丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶等指标的含量。以免疫组化法检测胰腺组织中葡萄糖转运蛋白4的表达。结果:天花粉各给药组大鼠的空腹血糖浓度明显比模型组低(P<0.01或P<0.05);苏木精-伊红染色结果表明,天花粉能够在一定程度上抑制各组2型糖尿病大鼠胰腺组织的病理学改变;天花粉能够显著提升糖尿病大鼠血清中高密度脂蛋白胆固醇的含量,并降低三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平(P<0.05);天花粉给药组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶表达量明显降低(P<0.05);天花粉能上调糖尿病大鼠胰腺组织中葡萄糖转运蛋白4的水平(P<0.05)。结论:天花粉能够改善2型糖尿病大鼠的糖脂代谢,保护胰腺及重要脏器,其作用机制可能与其激活机体的葡萄糖转运蛋白4通路有关。

天花粉蛋白衍生物的研究进展

天花粉蛋白是从栝楼块根中提取出的一种单链核糖体灭活蛋白,临床上用于异位妊娠、葡萄胎等疾病的治疗,但天花粉蛋白具有免疫原性、细胞穿透不足等缺点,妨碍天花粉蛋白进一步的科技转化和临床应用。因此,运用各种方法修饰或改造天花粉蛋白具有重要的研究意义。近年来对天花粉蛋白进行了突变重组、蛋白融合、聚乙二醇化、纳米颗粒封装等修饰改造,不同程度地降低天花粉蛋白的不良反应,延长半衰期、提升肿瘤内的渗透性和靶向性,可在保持甚至提高天花粉蛋白生物效应的同时降低其副作用,随着融合蛋白结合纳米递送技术的发展和完善,天花粉蛋白在抗肿瘤、器官移植等领域有着巨大的应用潜力。本文对各种修饰改造手段及作用机制进行综述,以期为天花粉蛋白的临床应用提供依据。

天花粉蛋白对宫颈癌HeLa细胞顺铂化疗增敏作用

目的观察天花粉(TCS)联合顺铂对宫颈癌HeLa细胞的化学治疗(化疗)增敏作用,并探讨其作用机制。方法细胞计数检测试剂盒(CCK8)法检测TCS、顺铂单独或联合用药对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响;CompuSyn软件分析TCS联合顺铂的联合用药指数(CI值);细胞划痕实验与Transwell法检测药物对细胞迁移的影响;流式细胞术检测药物对细胞凋亡的影响;蛋白印迹法检测药物对HeLa细胞凋亡相关蛋白表达水平的影响。结果TCS与顺铂均能抑制宫颈癌HeLa细胞增殖,TCS+顺铂抑制作用更强,TCS对顺铂增敏指数为3.04;不同浓度TCS联合顺铂作用HeLa细胞48 h后,CI值均<1,且具有浓度依赖性(P<0.05);细胞划痕实验与Transwell法实验中,TCS+顺铂较TCS或顺铂单独给药能更明显抑制HeLa细胞迁移(P<0.05);流式细胞术中,与TCS或顺铂单独给药相比,TCS+顺铂可增加HeLa细胞凋亡比例(P<0.05);蛋白印迹实验中,与TCS或顺铂相比,TCS+顺铂可上调促凋亡蛋白Bax、c-PARP表达,下调凋亡抑制蛋白Bcl-2表达(P<0.05)。结论TCS+顺铂对抑制宫颈癌HeLa细胞生长具有协同效应,TCS对顺铂化疗有增敏作用,其机制可能与TCS联用后促进HeLa细胞凋亡及抑制细胞迁移有关。

天花粉蛋白诱导胃癌细胞MKN-45凋亡的研究

目的 :研究天花粉蛋白（ trichosanthin,TCS）对胃癌细胞的作用，探讨其治疗胃癌的可能作用机制。方法 :采用生长曲线、集落形成实验、 MTT法、电镜、 TUNEL染色和流式细胞仪等技术，研究 TCS对胃癌细胞 MKN－ 45的增殖抑制和诱导凋亡作用。结果： TCS能够明显抑制胃癌细胞 MKN－ 45的生长和集落形成， 1μ g/ml和 0.1μ g/ml TCS作用 MKN－ 45后，细胞集落形成率分别为 (6.63± 1.31)％和 (14.68± 1.27)％，明显低于对照组的 (23.67± 2.76)％

天花粉蛋白在组织培养上抗病毒作用的研究

采用病变抑制法和^(125)I放射免疫法在3种细胞培养系统上测定了天花粉蛋白对7种病毒的抑制作用。结果表明,天花粉蛋白浓度在10μg/ml以下时,对细胞无明显的毒性作用,在0.001～10μg/ml时对乙型脑炎、柯萨奇B 2、麻疹、腺病毒3型、单纯疱疹病毒Ⅰ型、水泡性口炎病毒及乙型肝炎病毒等均有明显的抑制作用,并且这种抑制作用随天花粉蛋白的浓度增大而提高。浓度在0.01μ/ml时可以抑制由100TCID50病毒引起细胞病变的50％。本文提示,天花粉可能是继干扰素之后另一种具有广谱抗病毒作用的蛋白。

FTIR光谱法研究天花粉蛋白的热去折叠过程

本文利用FTIR光谱技术和计算机辅助解析技术 (二阶导数、去卷积和曲线拟合 )研究了天花粉蛋白的热诱导去折叠过程。结果表明 :在 2 5～ 85℃温度范围内 ,天花粉蛋白的热去折叠是一个不可逆的分子间聚集的过程 ;二级结构随温度的变化暗示了折叠中间体的存在。

天花粉蛋白基因在水稻中转化及抗虫研究

利用基因枪转化法将天花粉蛋白基因导入水稻。经PCR、Southern和North ern杂交分析证明外源基因已整合到水稻基因组中并有转录。抗虫试验表明 ,与对照比较转基因水稻明显地增强了对螟虫、稻飞虱的抗性。

量子点标记天花粉蛋白的研究

将半导体量子点应用于标记天花粉蛋白 ,研究了量子点标记天花粉蛋白的吸收光谱、荧光光谱和酶活性变化 .与游离的 QDs相比 ,QDs-TCS的吸收光谱在 4 0 0～ 60 0 nm范围内不发生明显变化 ;QDs-TCS的发射光谱发生蓝移 ,但发射半宽不变 ;标记上 QDs后 TCS的酶活性没有发生改变 .利用双光子激发扫描荧光显微镜和激光共聚焦显微镜同时观察 QDs-TCS在人绒癌细胞内的分布发现 ,QDs-TCS能够跨膜进入细胞 ,并在细胞核周围呈聚集分布 .

天花粉蛋白基因的克隆及序列分析

本文应用ＤＮＡ多聚酶链式反应（ＰＣＲ）技术，从栝楼基因组ＤＮＡ中扩增并克隆了天花粉蛋白（ＴＣＳ）基因。核酸序列分析结果表明，克隆片段包括ＴＣＳ的前原蛋白的编码序列和５＇一侧翼区段。其编码序列与已发表的不同来源的３种ＴＣＳ基因的核苷酸序列的同源性分别为９９．２０％，９８．７４％和９８．６４％。推导出的氨基酸序列与已发表的４种ＴＣＳ的氨基酸序列的同源性分别为９８．６２％、９８．６２％、９７．４１％和９８．３８％。另外还发现，我们克隆的ＴＣＳ基因的５＇一侧翼区段比已发表的ＴＣＳ基因的相应区段多一个类似于ＴＡＴＡ盒的序列。我们进一步构建了该基因的一系列突变体，为深入研究ＴＣＳ基因结构、表达和调节机制以及ＴＣＳ的结构和功能关系奠定了重要的基础。

用天花粉蛋白基因转化小麦获得转基因植株

取普通小麦品种京411未成熟胚诱导愈伤组织，10天左右，对820个胚性愈伤组织用含有35S启动子的天花粉蛋白（trichosanthin, TCS）基因轰击。2周后，将这些被轰击的愈伤组织转到含潮霉素50mg/L的筛选培养基上，经分化和生根，获得了33棵再生植株，经接饲毒蚜虫抗病性鉴定和PCR、Southern杂交分析，从中筛选出4株含有编码TCS的转基因小麦植株。转化频率为0.49%。

天花粉蛋白对胃癌多药耐药细胞的细胞毒和诱导凋亡作用

目的 研究天花粉蛋白(TCS)对胃癌多药耐药细胞细胞毒和诱导凋亡作用,探讨其治疗胃癌多药耐药的可能性。 方法 采用生长曲线、MTT、电镜、TUNEL染色和流式细胞仪等技术,研究TCS对胃癌多药耐药细胞SGC-7901/VCR和MKN-45/VCR的增殖抑制和诱导凋亡作用。 结果 TCS明显抑制胃癌多药耐药细胞SGC-7901/VCR和MKN-45/VCR的生长,其作用与对其本细胞的抑制作用相近。TCS对SGC-7901/VCR和MKN-45/VCR细胞有较强的细胞毒作用,TCS对SGC-7901和SGC-7901/VCR的IC50分别为28.6μg/mL和35.3μg/mL;对MKN-45和MKN-45/VCR的IC50分别为和10.67μg/mL和14.61μg/mL。TCS作用于MKN-45细胞后,光镜和电镜下能见到典型的细胞凋亡形态学特征:细胞核染色质致密浓缩,染色质断裂、凋亡小体形成等。TUNEL检测显示耐药细胞凋亡指数为2.8％～11.5％,流式细胞仪DNA直方图上出现典型的亚二倍体“凋亡峰”,耐药细胞凋亡率在4.73％～21.5％,细胞凋亡与TCS作用时间和浓度相关。 结论 TCS对胃癌多药耐药细胞有较强的细胞毒和诱导凋亡作用,具有治疗胃癌多药耐药的潜在价值。

蛋白免疫检测技术在天花粉真伪鉴别中的初步研究

目的建立天花粉蛋白的免疫检测方法,用于鉴别天花粉药材。方法用天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)的对照品免疫家免,制备多抗,然后用免疫亲和柱纯化抗TCS抗体,建立竞争ELISA方法,检测天花粉真伪品中天花粉蛋白含量,同时以蛋白免疫印迹技术证实了竞争ELISA方法检测天花粉蛋白含量的特异性。结果不同产地的正品天花粉新鲜品、饮片和标本天花粉蛋白的含量与各伪品中天花粉蛋白含量差别非常显著。结论利用此方法可以鉴定天花粉的真伪。

天花粉蛋白诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的分子机制研究

目的利用基因芯片技术研究天花粉蛋白对人宫颈癌HeLa细胞基因表达谱的影响,以深入探讨其作用的分子机制。方法提取药物处理前后HeLa细胞总RNA并逆转录成cDNA,在获得的cDNA上分别标记CY3和CY5两种荧光物质,然后与BiostarH-Ⅰ表达谱芯片杂交,扫描后对获得的数据用GenePixPro3·0软件分析。结果两组间存在差异性表达基因78条,其中与细胞凋亡密切相关的NOP56、TN-FSF10、CASP9、DFFB等62条基因表达上调,与细胞黏附及细胞间相互作用相关的COL9A3、MGST3、LGALS3BP等16条基因表达下调。结论天花粉蛋白可以引起HeLa细胞中多个基因的表达改变,基因芯片技术进一步揭示了其诱导HeLa细胞凋亡的作用机制。

原核表达的天花粉蛋白和另外两种蛋白具有体外抗真菌活性

将天花粉蛋白、烟草几丁质酶和烟草β１，３葡聚糖酶的结构基因分别克隆到原核表达系统中进行表达，对三种基因的原核表达产物的粗提取物分别进行体外抗菌活性检测，发现三种蛋白质均有抗真菌活性。三种蛋白中任意两种蛋白的组合，其抗真菌活性显著高于单一组分的抗真菌活性。三种蛋白共同作用时。

中药天花粉蛋白对黑色素瘤细胞凋亡及细胞周期的影响

目的：探讨中药天花粉蛋白纯化组分对黑色素瘤细胞增殖的抑制作用。方法：用流式细胞仪测定提纯的中药天花粉蛋白有效组分对小鼠黑色素瘤细胞体外培养过程中细胞ＤＮＡ合成、细胞周期及细胞凋亡的影响。结果：天花粉蛋白纯化组分可引起小鼠黑色素瘤细胞Ｇ_０／Ｇ_１期细胞增加，Ｓ期细胞减少，呈现 Ｇ_０／Ｇ_１期阻滞现象。并有诱导细胞凋亡作用，而且 Ｇ_０／Ｇ_１期阻滞与细胞凋亡高度相关（ｒ＝０．８７０５）。结论：天花粉蛋白纯化组分可通过抑制黑色素瘤细胞Ｓ期ＤＮＡ合成、抑制瘤细胞分裂增殖以及诱导瘤细胞凋亡来达到抑瘤作用。

基于植株性别差异的天花粉多糖、蛋白质含量比较

目的:比较雌雄株栝楼根中多糖、蛋白质含量差异,为天花粉主要来源于雄株栝楼的根提供理论依据。方法:水提醇沉法提取可溶性多糖,硫酸蒽酮比色法检测多糖含量;丙酮分级沉淀法提取天花粉蛋白,考马斯亮蓝染色紫外比色法检测蛋白含量。结果:雌、雄株栝楼根中多糖含量分别为2.628%、3.237%;雌、雄株天花粉蛋白含量分别为0.193%、0.280%,雄株天花粉多糖、天花粉蛋白含量均高于雌株。结论:以多糖和蛋白质含量为指标,雄株根入药优于雌株。

天花粉蛋白质与苦瓜子蛋白质改变DNA构型的活性I.DNA解旋与链结

为研究中药有效成分天花粉蛋白质（ＴＣＳ）与苦瓜子蛋白质（ ＭＭＣ）的生物学活性，以 细胞遗传物质ＤＮＡ为底物，经分子生物学技术分析，发现超盘旋双链ＤＮＡ发生解旋和链结，单链 ＤＮＡ发生断链，在合适条件下，已解旋和断链的分子还可重新盘绕，再成超盘旋，极微量的蛋白质 即表现出很强的作用。这一活性与１型ＤＮＡ拓扑异构酶相同。

天花粉蛋白对宫颈癌HeLa细胞凋亡及bax、bcl-2基因表达的影响

目的研究天花粉蛋白对人宫颈癌HeLa细胞的诱导凋亡作用并探讨其对凋亡相关基因bax和bcl-2表达的影响。方法不同浓度天花粉蛋白分别处理HeLa细胞24～72h后,MTT法检测细胞的生长活性,显微镜观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞周期,Western Blot检测凋亡相关蛋白bax,bcl-2的表达。结果显微镜下观察到细胞圆缩,染色体凝聚等凋亡细胞的形态学改变,流式细胞仪直方图上亦出现特征性的亚二倍体峰,随着天花粉蛋白浓度的增加,bax基因的表达增加而bcl-2的表达减少。结论天花粉蛋白对HeLa细胞的生长具有抑制作用,可诱导宫颈癌HeLa细胞发生凋亡,bcl-2蛋白的减少与bax蛋白表达增多可能是HeLa细胞凋亡的机制之一。

天花粉蛋白基因转化番茄的研究

核糖体失活蛋白（ｒｉｂｏｓｏｍｅｉｎａｃｔｉｖａｔｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ，ＲＩＰ）是一类作用于核糖体，抑制蛋白质合成的蛋白毒素，它具有广谱抗植物病毒和动物病毒的活性，在异种植物中的抗性效应尤其明显。迄今为止，人们已经从５０多种植物中分离出６０多种不...