天蚕壮阳散治疗男性更年期综合征临床观察

目的观察天蚕壮阳散治疗肾阳虚型男性更年期综合征(PADAM)的临床疗效。方法符合肾阳虚型男性更年期综合征病人106例随机分为2组,治疗组53例,以天蚕壮阳散口服;对照组53例,口服十一酸睾酮胶囊(安特尔)。治疗8周后对两组治疗前后PADAM评分及血睾酮(T)变化情况进行统计分析。结果治疗组PADAM各症状评分变化优于对照组(P<0.05);治疗后2组T值均明显升高(P<0.01),但两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论天蚕壮阳散能有效治疗肾阳虚型男性更年期综合征。

天蚕壮阳散对肾阳虚证雄性小鼠生殖能力影响的研究

目的研究天蚕壮阳散对肾阳虚证雄性小鼠生殖能力的影响。方法将40只昆明种雄性小鼠分为4组:正常组、模型组、男宝组、天蚕组,除正常组外,其他组小鼠均用氢化可的松注射液制造肾阳虚模型,将正常组和模型组给予等体积的蒸馏水,而治疗组给予相应剂量的药物,持续给药28 d。观察各组小鼠睾丸、脾脏、胸腺质量,检测血清睾丸酮(T)、促黄体生成激素(LH)、促卵泡生成激素(FSH)水平,精子密度、精子活率、精子活力改变情况。结果模型组睾丸、脾脏、胸腺质量明显减轻,与正常组、男宝组、天蚕组比较,差异具有统计学意义(P<0.01)。模型组血清T、LH、FSH水平明显下降,与正常组、男宝组、天蚕组比较,差异具有统计学意义(P<0.01)。模型组精子密度减少,精子活率降低,精子活力减弱,与正常组、男宝组、天蚕组比较,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论天蚕壮阳散对肾阳虚证雄性小鼠生殖能力有明显的治疗作用。

天蚕素抗菌肽对僵猪生长性能的影响

天蚕素抗菌肽具有抗菌谱广、抗菌强度高、不产生耐药性、不破坏生物体细胞(即无毒副作用)、无免疫原性等特点,在很大程度上避免了抗生素的弊病,因此越来越受到人们的重视和关注。因此,这里介绍了天蚕素抗菌肽的化学结构、来源、生物学效应,并用试验方法证明了天蚕素抗菌肽对改善僵猪生长性能具有显著的效果。

液晶传感竞争免疫法检测天蚕素B

制备了一种基于液晶取向变化的非标记液晶型免疫传感器,并结合竞争免疫反应原理,将其用于天蚕素B检测.首先采用硅烷化试剂3-氨丙基三乙氧基硅烷/二甲基十八烷基[3-(三甲氧基硅基)丙基]氯化铵(APTES/DMOAP)混合自组装构建可诱导液晶分子呈均一垂直排列的基底敏感膜,再通过戊二醛交联法将天蚕素B固定到基底表面,当天蚕素B抗体与天蚕素B特异性结合后扰乱了液晶分子的取向,使液晶膜的颜色和亮度发生变化,并通过计算偏光显微镜成像灰度强度,可在0.01~0.1ng/mL范围内定量化分析天蚕素B浓度.结果表明,固定化天蚕素B浓度为150ng/mL,天蚕素B抗体浓度为500ng/mL时,天蚕素B检测限可达0.01ng/mL.本方法具有灵敏度高、特异性好、非标记和操作简单等优点.

安徽野生天蚕及其全龄室内育初探

我省大别山区有大片野生柞林,是天蚕的理想饲料。经调查,金寨山区有野生天蚕活动踪迹,并采集到了其幼虫和蚕茧。蚕茧为浅绿色,经茧层丝蛋白氨基酸组成分析,丝蛋白氨基酸总含量为74.115%,明显不同于东北天蚕,是天蚕茧丝的一个新品种。天蚕全龄室内育试验表明,在充分掌握天蚕生活特性基础上的室内育是可行的,其茧质成绩也较理想。

银纳米粒子信号放大检测天蚕素B的研究

利用3-氨丙基三乙氧基硅烷(ATPES)和N,N-二甲基十八烷基(3-三甲氧基硅丙基)氯化铵(DMOAP),对玻片基底表面进行烷基化修饰,再通过戊二醛(GA)作为桥联,将经过银纳米粒子(AgNPs)修饰的天蚕素B抗体(anti-CB)固定在玻片基底上,构建新型液晶生物传感器。当存在天蚕素B(CB)时,其可与anti-CB发生特异性免疫反应,从而固定在玻片基底表面。利用AgNPs具有较大的比表面积和良好的生物相容性,可以使得AgNPs周围的液晶分子垂直排列被极大地扰乱,从而起到局部光学信号放大的作用,达到检测更低浓度CB的目的。通过对CB浓度与其对应的图像灰度值之间的线性拟合发现,CB浓度在10~100 ng/mL之间时,CB浓度与其对应图像灰度值之间存在线性关系。实验结果表明,采用AgNPs对CB进行信号放大,其检出限可以低至1.02 ng/mL。

天蚕片、天蚕胶囊中僵蛹成分鉴定

目的基于特异性引物扩增建立中成药中僵蛹成分的鉴定技术。方法根据家蚕、白僵菌和绿僵菌的全基因组序列差异设计了特异性引物PM、PB和PA,采用CTAB法、三氯甲烷抽提法从供试品中提取与纯化DNA,并进行聚合酶链式反应(PCR),扩增产物以2%琼脂糖凝胶电泳检测。结果家蚕、白僵菌及绿僵菌的DNA经扩增后分别在61、94、144 bp处产生条带,且引物间无交叉反应,体现出很强的专属性,家蚕、白僵菌和绿僵菌DNA的检出限分别为1、0.1、1 ng。在6批天蚕片和天蚕胶囊中,均检测出家蚕和白僵菌,未检测出绿僵菌。结论该方法准确快速,可用于鉴定天蚕片和天蚕胶囊中的僵蛹成分。

饲料中添加天蚕素抗菌肽对湘云鲫生长性能、非特异性免疫功能及抗病力的影响

本研究旨在探讨饲料中添加不同水平的天蚕素抗菌肽对湘云鲫生长性能、非特异性免疫功能与抗病力的影响.试验选取了1 242尾湘云鲫[初均重（46.14±0.13） g],随机分成6组,每组3个重复,分别饲喂在基础饲料中添加4 mg/kg金霉素及0（对照）、100、150、200和250 mg/kg天蚕素抗菌肽的6种等氮（粗蛋白质32.27％）等能（消化能12.85MJ/kg）试验饲料.试验期为8周,试验结束后测定湘云鲫生长、免疫、形体指数等指标.结果表明：1）与对照组比,150 mg/kg天蚕素抗菌肽组湘云鲫末均重、增重率和特定生长率均显著高于对照组（P＜0.05）,分别提高了15.0％、37.4％和27.5％.2）150 mg/kg天蚕素抗菌肽组湘云鲫肥满度显著高于对照组（P＜0.05）.3）与对照组相比,饲料中添加200和250 mg/kg天蚕素抗菌肽能显著提高湘云鲫的血清超氧化物歧化酶活性（P＜0.05）;添加150和200mg/kg天蚕素抗菌肽均显著降低了血清丙二醛含量（P＜0.05）;添加各水平天蚕素抗菌肽均显著提高了血清溶菌酶活性（P＜0.05）,但各添加水平组之间差异不显著（P＞0.05）.4）饲料中添加250 mg/kg天蚕素抗菌肽组的湘云鲫肌肉粗脂肪含量显著低于对照组（P＜0.05）.但各组肌肉水分和粗蛋白质含量没有显著性差异（P＞0.05）.5）采用嗜水气单胞菌进行攻毒后,湘云鲫48 h内死亡率较低,攻毒48～72 h是死亡的高峰期,天蚕素抗菌肽组的成活率明显高于对照组,其中对照组成活率最低.由此得出,本试验条件下,在饲料中添加天蚕素抗菌肽对湘云鲫有促生长效果,且150和2C0 mg/kg添加组效果较佳,同时提高了鱼体的非特异性免疫功能和抗病力.

天蚕抗菌肽B基因的化学合成及克隆

用化学合成法,我们设计、合成了一个以植物偏爱的遗传密码子编码的天蚕抗菌肽B基因。通过把该基因与M13mp19噬菌体载体重组、克隆;转化大肠杆菌JM103,杂交检测和序列测定,得到二个与设计一致的克隆。

天蚕抗菌肽A与蜂毒素杂合肽基因的合成及在大肠杆菌中的克隆与表达

根据天蚕抗菌肽A(cecropinA ,CA)N端第 1～ 7个氨基酸残基、蜂毒素 (melittin ,M )N端第 5～ 12个氨基酸残基 ,以大肠杆菌偏爱的密码子设计合成了杂合肽CA(1～ 7) -M(5～ 12 )基因 ,同载体 pGEMEX - 1连接后转化大肠杆菌JM 10 9,经打点杂交筛选和序列测定 ,获得一个与设计一致的克隆。将此克隆中的质粒亚克隆至JM10 3(DE3) ,经IPTG诱导、BrCN切割和抑菌圈试验表明 ,克隆的杂合肽基因在JM 10 9(DE3)中获得了表达。

抗菌肽天蚕素B基因及其串联体在毕赤酵母中的表达

通过重叠区扩增基因拼接法(SOE)合成抗菌肽天蚕素B基因,并在其N端引入Kex2酶切位点。亚克隆天蚕素B并将3个亚克隆串联在一起,每个单体前都加上Kex2酶切位点,将天蚕素B以及串联体克隆至表达载体pPICZαA上,用SacⅠ酶切使之线性化,采用电击法转化毕赤酵母SMD1168,转化子用小瓶发酵。经Tricine-SDS-PAGE检测,在α信号因子的引导下,表达产物可以分泌到培养基中,且具有明显抑菌活性。

天蚕素抗菌肽的研究进展

天蚕素抗菌肽(cecropins)是一种具有广谱抗微生物活性的新型肽类化合物,是最具潜力的抗生素替代品之一。本文综述了天蚕素抗菌肽的结构、来源、生物作用,重点介绍了天蚕素抗菌肽的应用,并对其存在的问题和未来发展前景进行分析。

天蚕素抗菌肽对断奶仔猪生产性能及血清指标的影响

探讨天蚕素抗菌肽对断奶仔猪生产性能、肠道菌群及血清指标的影响。选用80头(16.57±0.23)kg的杜×长×大三元杂交断奶仔猪,随机分成2组,每组4个重复,每重复10头猪。1组为对照组,试验组在基础日粮中添加0.3%的抗菌肽。结果表明:1)日粮中添加0.3%天蚕素抗菌肽后断奶仔猪平均日增质量比对照组提高了5.14%,料重比降低了14.8%。2)添加0.3%天蚕素抗菌肽能够显著降低断奶仔猪粪中大肠杆菌数量。3)与对照组相比,试验组断奶仔猪血清中尿素氮含量降低了20.08%,添加0.3%天蚕素抗菌肽能够增加断奶仔猪血清中干扰素γ和免疫球蛋白A(IgA)含量,降低结合珠蛋白含量。由此可见,日粮中添加0.3%天蚕素抗菌肽对于提高断奶仔猪生产性能、改善肠道菌群、减少猪体应激及提高机体免疫力等具有积极的作用。

天蚕卵黄原蛋白的合成、运转与沉积

系统测定了天蚕 Ａｎｔｈｅｒａｅａ ｙａ ｍ ａ ｍ ａｉ 吐丝结茧至成虫期脂肪体、血淋巴和卵巢中卵黄蛋白和可溶性蛋白总含量的动态变化。结果表明， 脂肪体是卵黄原蛋白 （ Ｖｇ） 合成场所， Ｖｇ 合成始于吐丝结茧后第４ 天； 脂肪体、血淋巴中 Ｖｇ 滴度在吐丝结茧后第４ 天开始上升， 化蛹后第６ 天或第８ 天达高峰， 成虫羽化第１ 天则明显下降。卵巢对 Ｖｇ 摄取始于化蛹第１ 天， 此后随蛹日龄逐渐上升， 并渐趋平稳。同一卵巢管中卵黄蛋白 （ Ｖｔ） 含量自顶端至基端随卵室增大而逐渐升高， 不同日龄蛹中相应序号卵室的 Ｖｔ 含量以日龄大者为高； 卵室中 Ｖｔ 含量与卵室体积大小呈正线性关系。电镜观察表明， Ｖｇ 被卵母细胞摄入后以卵黄体形式存在， 不同发育阶段卵巢中卵母细胞内卵黄体大小不同， 以早期者为小； 同一卵巢管中不同卵母细胞内卵黄体以顶端为小， 基端明显增大。

天蚕抗菌肽AD基因在AcNPV载体系统中的表达研究

目的 研究利用昆虫杆状病毒载体系统在昆虫培养细胞和虫体中高效表达新型多肽抗生素天蚕抗菌肽AD(cecropinAD ,CAD)。方法 采用聚合酶链反应 ( polymerasechainreaction ,PCR)点突变技术改造CAD基因 ,改造后的CAD基因先克隆到质粒 pGEM Teasyvector中进行鉴定和序列分析 ,然后再亚克隆到苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒 (Autographacalifornicanuclearpolyhedrosisvirus ,AcNPV)表达载体pAcGP67B中 ,获得重组病毒载体 pAcAD。用重组病毒载体 pAcAD和野生AcNPVDNA共感染草地夜蛾 (Spodopterafrugiperdoda)Sf9细胞 ,经空斑法筛选得到重组病毒AcNPVAD。重组病毒AcNPVAD经PCR扩增鉴定 ,证实了CAD基因已经整合到重组病毒AcNPVAD中。结果 以AcNPVAD转染Sf9细胞和苜蓿丫纹夜蛾幼虫 ,抑菌活性试验证实CAD基因在昆虫培养细胞Sf9和苜蓿丫纹夜蛾幼虫虫体中均得到表达 ,表达产物具有抑菌作用。通过离子交换层析 ,杂蛋白基本去除 ,重组抗菌肽获得初步纯化 ,重组抗菌肽活性峰位于 0 75mol/L处。结论 CAD基因在昆虫杆状病毒载体系统获得了表达 ,表达产物具有抑菌活性。

高温对珍贵绢丝昆虫——天蚕卵巢生长发育的影响

结果表明 ,高温对天蚕 ( Antheraea yamamai)卵巢生长发育有明显的影响。 3、4龄幼虫卵巢生长发育在 2 0～ 2 9℃范围内随温度提高而加快 ,3 2℃下则略有下降 ;5龄幼虫卵巢生长发育在 2 9℃和 3 2℃下明显受阻。在茧蛹期 ,若在刚结茧或化蛹第 1天即经受 3 2℃高温处理 ,卵巢大小及其可溶性蛋白含量多明显小于或低于 2 6℃ ,即其卵巢生长发育明显受阻 ;而在化蛹第 6天开始受 3 2℃高温处理 ,结果则似反之。正因为如此 ,在天蚕制种前 ,建议 3～ 4龄和 5龄幼虫饲育温度各以 2 6～ 2 9℃和 2 0～ 2 3℃为宜 ;结茧至化蛹初期茧蛹保护温度则以 2 6℃为适。此外还测定了 3 2℃高温对卵巢中 DNA和RNA含量的影响。

YAC介导的天蚕丝素基因向家蚕的转移──天蚕丝素基因-YAC克隆在家蚕的表达

本文为天蚕Antheraeyamamai丝素基因在家蚕Bombyxmori成功表达的首次报道。我们构建了天蚕丝素基因的YAC克隆，然后把含有该克隆的DNA溶液导入家蚕受精卵。分子杂交实验证明天蚕丝素基因已整合到家蚕基因组中。通过丝心蛋白氨基酸组分分析以及茧丝的溶解性比较，发现有部分转基因家委表达了天蚕丝素基因。F2代的转基因家蚕蛾的染色体DNA中同时还存在YAC序列，说明YAC对丝素基因具有介导作用。天蚕丝素基因以单拷贝形式存在于转基因家蚕中。

家蚕天蚕素cDNA原核表达及抗菌活性检测

采用RT PCR方法从家蚕Bombyxmori新疆品种新蚕三号组织中扩增天蚕素cDNA片段 ,回收并克隆至pMD18 T载体 ,进行序列分析。基因序列分析结果与已发表的天蚕素B的序列同源性为 98% ,表明所克隆的新疆家蚕天蚕素cDNA为独特的cDNA片段。将天蚕素基因与pGEX 4T 1融合表达载体中的谷胱甘肽转移酶基因融合 ,在大肠杆菌中表达 ,结果表明经IPTG诱导 30min后 ,pGEX 4T 1 天蚕素转化后的大肠杆菌生长明显受到抑制 ;当诱导 2 10min后 ,大肠杆菌数量又开始增加 ,逐渐恢复至正常水平。说明天蚕素与谷胱甘肽转移酶基因融合表达后 ,在IPTG存在的短时间内仍然对原核细胞有较强的抗菌抑杀作用。