半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶和口腔鳞癌关系的研究进展

近年来,口腔鳞状细胞癌（OSCC）的发病机制成了越来越多学者探究的热点,研究表明,半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶（Caspase）与OSCC的发生及发展有一定的相关性,二者关系的阐明对OSCC的诊疗及揭示其发病机制有重要的作用。现就对Caspase和OSCC的关系方面的研究进展作简要综述。

深低温停循环不同时间点犬脑皮质半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶-3mRNA的表达

目的利用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶-3 mRNA(Caspase-3 mR-NA)在深低温停循环(DHCA)过程中的表达,探讨DHCA对神经细胞凋亡的影响,为深低温停循环后脑损害的研究和防治提供资料。方法选择健康成年杂种犬10只,建立DHCA模型,分别于体外循环0 min、停循环0 min、停循环30 min、停循环60 min、复温再灌注45 min取脑皮质迅速冻存,待全部动物实验结束后统一行实时荧光PCR定量检测Caspase-3mRNA的表达情况。结果体外循环后特别是降温后Caspase-3 mRNA的拷贝数先下降,DHCA 0 min达最低值,随着DHCA过程的延长,Caspase-3 mRNA的表达逐渐增强,复温再灌注45 min达最大值,不同时间点Caspase-3 mRNA的拷贝浓度间差异有显著性意义(F=42.71,P<0.001)。复温再灌注45 min后Caspase-3 mRNA的拷贝数均显著高于此前各时间点(P<0.01)。结论DHCA中随着缺氧的加重可诱导Caspase-3 mRNA的表达,随着DHCA时间的延长,Caspase-3 mRNA表达升高。复灌后表达达最高值。

一种天门冬氨酸蛋白酶活性部位基序中酸性氨基酸的作用

背景:组织蛋白酶E是一种细胞内天门冬氨酸蛋白酶,属于胃蛋白酶家族,它由两个同源结构域组成,每个结构域含有一个保守基序DTG,其中第98位天门冬氨酸残基的作用尚属未知。目的:检验第98位天门冬氨酸残基的重要性。设计、时间及地点:观察实验,于2007-11/2008-12在广东药学院完成。材料:参照文献方法制备大鼠组织蛋白酶E抗体,并通过亲色谱法纯化。PcDNA3.0由广州英韦创津生物科技有限公司提供。人胚肾293细胞株由中科院上海细胞库提供。方法:在SmaⅠ和XhoⅠ间将含有全长大鼠组织蛋白酶E的cDNA插入pBluescriptIISK-质粒中。通过Kunkel基因定点突变方法,将大鼠组织蛋白酶E内第98位天门冬氨酸残基用另一种酸性氨基酸,谷氨酸替代,构建成变异体D98E,并在人胚胎肾细胞中进行表达。主要观察指标:观察野生型和变异体蛋白的表达,将野生型和变异体组织蛋白酶E蛋白纯化,对变异体组织蛋白酶E的酶活性、折叠及自我加工等进行分析。结果:当将野生型和变异型的大鼠组织蛋白酶E基因在人胚胎肾293细胞中进行异源表达时,在细胞培养基和细胞提取物中都发现有野生型和变异型的大鼠组织蛋白酶E的酶原蛋白表达。突变体D98E仍具有自我转化为成熟型酶的能力,尽管它们的酶活性只是野生型的13%。变异体的Km值与野生型的相似,但它的Kcat值却比野生型显著下降。变异体和野生型酶都被胃酶抑素和蛔虫胃蛋白酶抑制剂所抑制,Ki值几乎相同。变异体在各种酸碱度下的圆二色光谱与野生型基本相同。结论:第98位苏氨酸残基对酶的催化活性确实非常重要,其可被谷氨酸部分替代,其变异体D98E酶催化活性下降。原因与变异导致变异体水解底物的效率下降有关。

p40、天门冬氨酸蛋白酶、甲状腺转录因子-1在肺鳞癌与腺癌表达敏感性和特异性

目的:探讨肺非小细胞癌组织中鉴别鳞癌和腺癌有意义的免疫组化检测标记。方法:采用免疫组织化学SP法检测非小细胞肺癌51例组织中p63、p40、CK5/6、甲状腺转录因子-1(TTF-1)、CK7、天门冬氨酸蛋白酶(Napsin-A)的表达。结果:(1)p40、p63、CK5/6在非小细胞肺癌中表达:非小细胞肺癌51例中,p40、p63、CK5/6在鳞状细胞癌20例中阳性表达为20例(100.0%),19例(95.0%),18例(90.0%),在腺癌31例组织中阳性表达为0例(0.0%)、6例(19.4%)、3例(9.7%)。p40在31例腺癌中无1例表达,特异性高于p63、CK5/6(χ2=6.424,P<0.05),而p63、CK5/6两组间特异性比较差异无统计学意义。(2)TTF-1、CK7、Napsin-A在非小细胞肺癌中表达:非小细胞肺癌51例中,TTF-1、CK7、Napsin-A在肺腺癌31例中阳性为27例(87.1%)、25例(80.6%)、28例(90.3%),在鳞状细胞癌20例组织中阳性表达分别为1例(5.0%)、7例(35.0%)、0例(0.0%),TTF-1和Napsin-A阳性表达特异性高于CK7(χ2=12.197,P<0.01)。结论:p40、NapsinA、TTF-1联合检测可更好地鉴别诊断肺非小细胞癌,为临床进行靶向治疗提供依据。

组织蛋白酶E第284位苏氨酸残基对酶活性的作用

目的探讨组织蛋白酶E第284位苏氨酸残基在酶活性中的作用。方法通过基因点突变，将大鼠组织蛋白酶E内羧基端的活性部位基序中第284位苏氨酸残基用丝氨酸进行替代，构建变异体T284S。结果当将野生型和变异型的大鼠组织蛋白酶E基因在HEK293T细胞中进行异源表达时，在细胞培养基和细胞提取物中都发现有野生型和变异型的大鼠组织蛋白酶E的酶原蛋白表达。突变体T284S仍具有自我转化为成熟型酶的能力，尽管它们的酶活性只是野生型的40％，变异体的Km值与野生型的相似，但它的Keat值却比野生型显著下降。变异体和野生型酶都被胃酶抑素和蛔虫胃蛋白酶抑制剂所抑制，Ki值几乎相同。变异体在各种酸碱度下的圆二色光谱与野生型基本相同。结论（1）第284位苏氨酸残基对酶的催化活性确实非常重要。变异体T284S酶催化活性的下降是由于多出来的甲基使活性部位氢键的分布发生改变，从而使酶与底物的作用模式发生改变。（2）BACE-1不能被胃酶抑素抑制，可能与羧基端结构域的活性部位基序差异无关，而与BACE1蛋白结构中的其它部分有关。

Shc相关磷酸化酪氨酸适配蛋白在大鼠血管衰老中的调控作用

目的探讨Shc相关磷酸化酪氨酸适配蛋白p66^shc 在血管衰老表达的变化，对阐明血管衰老对动脉粥样硬化的诊治具有重要意义。方法将Wistar大鼠分为4、10、16、24月龄组，测定各组血浆丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）水平，同时采用恒速注入流体方法测定大鼠颈动脉血管的顺应性，并利用蛋白免疫印迹法分析各组p66^shc、半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶-3水平。结果随增龄，大鼠主动脉管壁增厚，纤维化程度增高，MDA浓度明显升高（与4月龄和10月龄相比，均P〈0．01），SOD浓度明显降低（与4月龄相比，均P〈0．01；与10月龄相比，均P〈0．05），颈动脉血管的顺应性增高、弹性速率和弹性面积的差异有统计学意义（与4月龄相比，均P〈0．01；与10月龄相比，均P〈0．05），p66^shc、Caspase．3蛋白表达呈时间依赖性上调。结论血管衰老性重塑的分子机制之一可能与上调p66^shc、Caspase-3蛋白的表达有关，进一步阐明其调控机制可为延缓血管衰老、防治动脉硬化提供理论依据。

组织蛋白酶E氨基端催化性残基的确定

目的验证组织蛋白酶E保守基序DTG中第98位天门冬氨酸残基为组织蛋白酶E氨基端催化性残基。方法通过基因定点突变技术将第98位天门冬氨酸残基用丙氨酸替代,制成变异体D98A,并将野生型和变异型的大鼠组织蛋白酶E基因在人胚胎肾293T细胞中进行异源表达。结果在细胞培养基和细胞提取物中都发现有野生型和变异型的大鼠组织蛋白酶E的酶原蛋白表达。突变体D98A酶原在酸性条件下不能转变为酶,也没有酶活性。结论组织蛋白酶E第98位天门冬氨酸残基是酶的催化性残基,对酶的催化活性非常重要。

穴位埋线联合盐酸甲氯芬酯对血管性痴呆大鼠海马CA1区几种重要蛋白质表达的影响

目的探讨穴位埋线与盐酸甲氯芬酯联合治疗血管性痴呆(VD)大鼠的神经生化机制。方法改良四血管阻断法建立VD大鼠模型;造模后分3个治疗组,分别为盐酸甲氯芬酯治疗组、"肾俞"、"足三里"穴位埋线治疗组(埋线组)及盐酸甲氯芬酯联合穴位埋线组(联合组);免疫组织化学SABC法检测并比较各组大鼠海马CA1区内三种重要蛋白质的表达情况:胆碱乙酰转移酶(Ch AT)、脑源性神经营养因子(BDNF)及半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)。结果经联合治疗后,大鼠海马CA1区Ch AT、BDNF免疫反应阳性神经元数目明显增多,Caspase-3阳性神经元数目明显减少,各项指标与单独治疗组相比,差异明显(P<0.05,P<0.01)。结论盐酸甲氯芬酯联合穴位埋线治疗法,对VD大鼠海马胆碱能神经元具有良好的保护作用,这可能与其上调海马BDNF及下调Caspase-3密切相关。

丹酚酸A、C分子药对配伍干预肾纤维化组织凋亡相关蛋白caspase-3、GRP78的实验研究

目的研究丹酚酸A、C分子药对配伍对肾纤维化过程中凋亡相关蛋白半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的调节作用。方法将50只雄性SD大鼠随机分为5组,即正常组,模型组,丹酚酸A组,丹酚酸C组,丹酚酸A、C按1:1配伍组(丹酚酸A+C组)。除正常组外,其余大鼠均采用单侧输尿管梗阻(UUO)造模。造模后第2天开始各组给予相应的干预措施;2周后处死大鼠,收集相应标本,检测尿β2-微球蛋白(β2-MG)、N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶(NAG),光镜观察肾组织病理,TUNEL检测技术观察肾小管间质细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术检测肾组织caspase-3、GRP78 mRNA的表达。结果 1与正常组比较,模型组及各治疗组尿β2-MG、NAG水平均明显升高(P<0.05)。2与模型组比较,各治疗组尿β2-MG水平均明显降低(P<0.05),丹酚酸A、C组尿NAG水平明显降低(P<0.05)。3与模型组比较,各治疗组肾脏组织病理情况均有不同程度的改善,尤以丹酚酸A、A+C组改善明显(P<0.05)。4丹酚酸A、C组及A+C组可以下调caspase-3、GRP78的表达,有效减轻肾小管间质细胞凋亡,且丹酚酸A+C组较丹酚酸C组效果更明显(P<0.05)。结论丹酚酸A、C及A+C分子药对配伍可一定程度保护UUO大鼠肾小管功能,并下调肾组织caspase-3、GRP78的表达,减少肾小管间质细胞凋亡的发生,减轻肾间质纤维化程度。上述作用可能与该药物干预凋亡相关蛋白caspase-3、GRP78的表达,抑制内质网应激途径有关。

焦亚硫酸钠对雄性小鼠肝脏Caspase-3和转化生长因子β_1表达的影响

目的研究焦亚硫酸钠对小鼠肝脏中半胱氨酸天门冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase-3)、转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。方法健康雄性昆明小鼠30只随机分为对照组10只和实验组20只,对照组小鼠给予静置自来水饮用;实验组小鼠给予10g.L-1焦亚硫酸钠溶液饮用。分别于第10天和第30天时处死各组小鼠,快速取出肝脏,Zamboni固定液固定,常规冰冻制片,免疫组织化学染色,光镜观察。结果与对照组比较,实验组小鼠肝脏中Caspase-3阳性表达增强(P<0.01),第10天时实验组变化尤为明显;而实验组小鼠肝脏中TGF-β1阳性表达与对照组比较无显著差异(P>0.05)。结论焦亚硫酸钠喂食后可引起小鼠肝脏中Caspase-3表达增高,TGF-β1无明显改变,提示焦亚硫酸钠促使小鼠肝脏中肝细胞凋亡增加。

二氯乙酸钠联合顺铂诱导人肺腺癌A549细胞株凋亡的实验研究

目的研究二氯乙酸钠(Sodium dichloroacetate,DCA-Na)、顺铂(DDP)联合对人肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法用MTT法检测DCA-Na、DDP应用对A549细胞增殖抑制作用的影响;流式细胞仪(Annexin V-FITC/PI法)检测DCA-Na、DDP单药及两药联合作用于A549细胞凋亡率的变化;用分光光度法检测DCA-Na作用于A549细胞后半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3、-8、-9蛋白的活性。结果DCA-Na、DDP单药组均对A549细胞增殖有抑制作用,且呈明显的剂量-时间依赖性。0.4、2μg/mL的DDP与37.5、75、150μg/mL的DCA-Na联合作用A549细胞24、48、72 h后的抑制率显著高于同浓度DDP单药组(P<0.05),且2μg/mL的DDP与75μg/mL的DCA联合在48 h表现为协同作用。流式细胞仪检测显示,A549细胞联合组凋亡率显著高于各单药组(P<0.05)。DCA-Na作用于A549细胞后,分别在12、24、48、72 h测得Caspase-3、-8、-9蛋白活性显著高于对照组(P<0.05)。结论 DCA-Na对人肺腺癌A549细胞的增殖有抑制作用,并且随着药物浓度增加、作用时间延长,其抑制作用也增加(呈剂量和时间依赖性)。一定浓度范围的DCA-Na和DDP联合作用于人肺腺癌A549细胞能够产生协同作用。DCA-Na可诱导人肺腺癌A549细胞凋亡,且与DDP联合后其诱导凋亡作用更为显著。

Caspase-3蛋白在膀胱移行细胞癌的表达及其意义

目的:通过检测半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)在正常膀胱黏膜组织和膀胱移行细胞癌的表达,探讨其在膀胱移行细胞癌发生、发展中的意义。方法:采用免疫组织化学(SP法),对10例正常膀胱黏膜组织及46例膀胱移行细胞癌组织的Caspase3蛋白表达情况进行检测。结果:膀胱移行细胞癌组织的Caspase-3蛋白表达阳性率(47.83%)明显低于正常膀胱黏膜组织(90.00%)(P<0.01),Caspase-3蛋白表达与膀胱移行细胞癌组织学分级有明显关系(P<0.01),但与其临床分期无明显关系(P>0.05)。结论:Caspase-3的表达降低在膀胱癌的发生中起着重要作用。

剖宫产仔鼠脑神经元细胞凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3的表达

目的研究剖宫产出生的仔鼠海马区和额叶皮质区半胱氨酸基天门冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达变化以及神经元细胞凋亡情况。方法将38只SD孕鼠自确定受孕时起随机分为2组:阴道产组19只和剖宫产组19只。阴道产组不进行任何处理,剖宫产组于孕21d剖宫取仔鼠。阴道产组仔鼠24只和剖宫产组仔鼠20只,均于出生后115d处死仔鼠取脑组织,采用免疫荧光法分析单位面积中caspase-3阳性染色细胞数量;用末端转移酶标记染色法检测神经元细胞凋亡情况。结果①caspase-3表达:仔鼠出生后115d,额叶皮质区caspase-3阳性染色细胞数:阴道产组为(16.8±2.1)个,剖宫产组为(28.3±5.8)个,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);海马区caspase-3阳性染色细胞数:阴道产组为(23.2±4.6)个,剖宫产组为(36.8±5.9)个,两组比较,差异也有统计学意义(P<0.05);②神经元细胞凋亡情况:仔鼠生后115d,额叶皮质区凋亡指数(%):阴道产组为(3.8±0.6),剖宫产组为(7.3±1.8),两组比较,差异无统计学意义(P>0.05);海马区凋亡指数(%):阴道产组为(4.2±1.5),剖宫产组为(26.1±5.4),两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论剖宫产可能引起成年仔鼠海马区和额叶皮质区aspase-3表达增加,可能引起神经元细胞凋亡增加,其中以海马区神经元的凋亡尤为明显,可使与海马相关的空间记忆和学习能力受到损害。

内质网应激相关蛋白在肾纤维化大鼠肾组织中的表达

探究内质网应激(ERS)相关蛋白在单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化中表达的调节。将大鼠随机分为假手术组及UUO模型组,UUO组行左侧输尿管结扎术,于术后3、7和14d Masson染色观察肾脏病理变化;眼底静脉丛取血,分离血清测定血尿素氮及肌酐;Masson染色对肾间质胶原相对面积进行半定量分析;免疫组化法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA);Western blot检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、内质网源性转录因子(CHOP)、凋亡相关蛋白半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)及caspase-12蛋白表达。模型组与对照组比较大鼠肾小管间质损伤指数、肾间质纤维化程度、血清Scr、BUN水平及肾组织CHOP、caspase-3蛋白表达有差异(P<0.05;P<0.01)。与假手术组相比,UUO模型组可见:1)肾小管扩张和肾间质纤维化程度随输尿管梗阻时间延长而渐进性加重;2)GRP78、CHOP、caspase-3及caspase-12蛋白表达在术后3d均有上调,随着梗阻时间延长,上述蛋白表达更显著(P<0.01)。内质网应激相关标志性蛋白在UUO大鼠肾间质纤维化的早期即存在表达上调,可能促进了肾间质纤维化不断进展。有望通过干扰内质网应激特异转录因子的传导通路,抑制细胞凋亡的表达,从而可减缓肾间质纤维化的发生和发展。

单侧输尿管梗阻的大鼠内质网应激相关蛋白表达上调

目的探究内质网应激(ERS)相关凋亡通路在单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化中的作用机制。方法将大鼠随机分为假手术组及UUO模型组,UUO组行左侧输尿管结扎术,于术后3、7和14 d HE和Masson染色观察肾脏病理变化;眼底静脉丛取血,分离血清测定血尿素氮及肌酐;Western blot检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、内质网源性转录因子(CHOP)、凋亡相关蛋白半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)及caspase-12蛋白表达。结果与假手术组相比,UUO模型组可见:1)肾小管扩张和肾间质纤维化程度随输尿管梗阻时间延长而渐进性加重;2)GRP78、CHOP、caspase-3及caspase-12蛋白表达在术后3 d均有上调,随着梗阻时间延长,上述蛋白表达更显著(P<0.01)。结论内质网应激相关标志性蛋白在UUO大鼠肾间质纤维化的早期即存在表达上调,可能促进了肾间质纤维化不断进展。

迷迭香吸嗅通过SIRT1、NLRP3、Caspase-1信号通路介导细胞焦亡改善血管性认知障碍作用机制

目的:探讨迷迭香吸嗅调控沉默信息调节因子1(SIRT1)、Nod样受体蛋白3(NLRP3)和半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)信号通路介导细胞焦亡改善血管性认知障碍(VCI)的作用机制。方法:选取雄性SD大鼠50只,随机分为正常组、假手术组、模型组、迷迭香组和迷迭香+SIRT1抑制剂组,每组10只。给予正常组、假手术组、模型组蒸馏水吸嗅,给予迷迭香组迷迭香精油吸嗅,迷迭香+SIRT1抑制剂组在迷迭香组基础上腹腔注射SIRT1抑制剂EX527。评价各组大鼠的学习记忆能力,海马神经元中SIRT1表达,海马组织中SIRT1、NLRP3和Caspase-1通路相关蛋白[剪切型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)]表达情况。结果:相较于正常组和假手术组,模型组逃避潜伏期更长、过站台次数更少(P<0.05);相较于模型组,迷迭香组和迷迭香+SIRT1抑制剂组逃避潜伏期缩短,过站台次数增加,但迷迭香组变化更为显著(P<0.05)。相较于正常组和假手术组,模型组海马神经元中SIRT1水平更低(P<0.05);相较于模型组,迷迭香组和迷迭香+SIRT1抑制剂组海马神经元中SIRT1有所升高,且迷迭香组升高更明显(P<0.05)。与正常组和假手术组比较,模型组海马组织中剪切型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、白细胞介素(IL)-18和IL-1β明显升高,SIRT1明显降低(P<0.05);相较于模型组,迷迭香组、迷迭香+SIRT1抑制剂组海马组织中cleaved Caspase-3、NLRP3、ASC、IL-18和IL-1β有所降低,SIRT1有所升高,其中迷迭香组变化更大(P<0.05)。结论:迷迭香吸嗅可改善VCI大鼠的空间记忆和学习能力,保护海马组织,减少神经元凋亡,其作用机制与SIRT1、NLRP3和Caspase-1信号通路介导的细胞焦亡有关。

TTF-1、CK7、Napsin A联合检测对肺腺癌的诊断价值

目的探讨甲状腺转录因子1(TTF-1)、细胞角蛋白7(CK7)和天门冬氨酸蛋白酶A(Napsin A)联合检测对肺腺癌的诊断价值。方法选择非小细胞肺癌患者100例,组织病理学诊断为肺腺癌42例、肺鳞癌58例。采用免疫组化法检测肺腺癌及肺鳞癌组织TTF-1、CK7和Napsin A表达。以病理检查结果为金标准,分析三者单项或联合检测诊断肺腺癌的效能。结果肺腺癌组织与鳞癌组织TTF-1阳性表达率分别为92. 86%(39/42)、1. 72%(1/58),CK7阳性表达率分别为100%(42/42)、36. 21%(21/58),Napsin A阳性表达率分别为85. 71%(36/42)、0。肺腺癌组织TTF-1、CK7、Napsin A阳性表达率均明显高于肺鳞癌组织(χ~2分别为84. 298、42. 529、77. 679,P均<0. 01)。TTF-1单项检测诊断肺腺癌的敏感性和特异性分别为92. 86%、98. 28%,诊断准确率为96. 00%。CK7单项检测诊断肺腺癌的敏感性和特异性分别为100%、63. 79%,诊断准确率为79. 00%。Napsin A单项检测诊断肺腺癌的敏感性和特异性分别为85. 71%、100%,诊断准确率为94. 00%。联合检测时,三项均阳性诊断肺腺癌的敏感性和特异性分别为83. 33%、100%,诊断准确率为93. 00%;三项中至少一项阳性诊断肺腺癌的敏感性和特异性分别为100%、62. 07%,诊断准确率为78. 00%。结论 TTF-1、CK7、Napsin A单项检测均可用于鉴别非小细胞肺癌组织学类型;三者联合检测有助于提高肺腺癌诊断的敏感性或特异性,同时还能使诊断准确率保持在较高水平。

清心开窍方挥发油对AD大鼠大脑皮层及海马区GFAP及Caspase-3表达的影响

目的探讨清心开窍方及其挥发油对Aβ25-35杏仁核注射诱导痴呆(Alzheimer′s disease,AD)大鼠皮层及海马区胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)、淀粉样前体蛋白(β-amyloid precursor protein,βAPP)及Caspase-3表达的影响。方法选取32只雄性SD大鼠,采用杏仁核注射Aβ25-35诱导AD大鼠模型,造模后随机分为模型组、盐酸多奈哌齐组[盐酸多奈哌齐片,1.67mg/kg]、清心开窍方组(中药组,清心开窍方煎液12.67mL/kg)和挥发油组(挥发油,3.33mL/kg),另选取8只大鼠作为正常组,正常组、模型组给予等量双蒸水灌胃,各组每天干预1次,连续2周。给药结束后进行Morris水迷宫测试,记录各组大鼠水迷宫测试期间第1～5天逃避潜伏期及跨越平台次数。免疫组织化学法检测各组大鼠大脑皮层与海马区GFAP、Aβ、βAPP及Caspase-3的表达。结果与模型组比较,各用药组大鼠第3～5天逃避潜伏期均缩短,皮层与海马区GFAP、Aβ、βAPP及Caspase-3表达水平降低,跨越平台次数增加,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。与西药组比较,中药组皮层及海马区Aβ表达水平降低、βAPP升高,挥发油组皮层及海马区GFAP、βAPP及Caspase-3均升高,挥发油组第3～5天逃避潜伏期明显延长,跨越平台次数减少,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论清心开窍方能明显改善AD大鼠学习记忆能力,其机制可能是通过降低皮层及海马区GFAP、Aβ、βAPP及Caspase-3的表达发生作用。

NSCLC患者癌组织Napsin A、TTF-1、ALK、Ki-67表达与临床病理的关系及免疫组化检测意义

目的分析非小细胞肺癌(NSCLC)患者癌组织新天门冬氨酸蛋白酶A(Napsin A)、甲状腺转录因子-1(TTF-1)、间变性淋巴瘤激酶(ALK)、Ki-67抗原(Ki-67)表达与临床病理的关系及免疫组化检测意义。方法回顾性收集2020年5月至2022年5月中山市人民医院收治的62例NSCLC患者临床资料,所有患者均进行手术治疗,收集患者手术切除标本进行免疫组化病理检查。统计NSCLC患者癌组织和癌旁组织中Napsin A、TTF-1、ALK、Ki-67阳性表达情况及不同病理特征,NSCLC患者癌组织Napsin A、TTF-1、ALK、Ki-67阳性表达情况,采用Spearman相关法分析NSCLC患者癌组织Napsin A、TTF-1、ALK、Ki-67表达的相关性。结果NSCLC患者癌组织中Napsin A、TTF-1、ALK、Ki-67阳性表达率(79.03%、70.97%、17.74%、82.26%)高于癌旁组织(16.13%、22.58%、0.00%、0.00%,P<0.05)。鳞癌、高/中分化、无淋巴结转移、无远处转移NSCLC患者癌组织Napsin A阳性表达率低于腺癌、低分化、淋巴结转移、远处转移患者(P<0.05);低分化、临床分期Ⅲ/Ⅳ期、淋巴结转移、远处转移NSCLC患者癌组织TTF-1阳性表达率高于高/中分化、临床分期Ⅰ/Ⅱ期、无淋巴结转移、无远处转移患者(P<0.05);鳞癌、低分化、临床分期Ⅲ/Ⅳ期NSCLC患者癌组织ALK阳性表达率高于腺癌、高/中分化、临床分期Ⅰ/Ⅱ期患者(P<0.05);低分化、临床分期Ⅲ/Ⅳ期、淋巴结转移、远处转移NSCLC患者癌组织Ki-67表达率高于高分化、临床分期Ⅰ/Ⅱ期、无淋巴结转移、无远处转移患者(P<0.05)。Spearman相关法分析结果显示,NSCLC患者癌组织Napsin A表达与ALK表达呈显著正相关关系(r=0.589,P<0.05),TTF-1表达与ALK、Ki-67表达呈显著正相关关系(r=0.564、0.602,P<0.05)。结论NSCLC的发生及其病情进展可引起Napsin A、TTF-1、ALK、Ki-67表达升高,患者癌组织中Napsin A、ALK及TTF-1、ALK、Ki-67表达具有一定相关性,其可能在NSCLC的发生和发展中相互作用。