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头孢菌素脱乙酰酶的重组表达及固定化
1
作者
王群
魏东芝
+3 位作者
沈亚领
陈鑫
金雄熊
叶凤起
《工业微生物》
CAS
CSCD
2014年第4期66-69,共4页
本文构建了利用trp启动子表达头孢菌素脱乙酰酶(CAH)的重组大肠杆菌DH5α-pCAH。重组菌在7L发酵罐(装液量2L)中发酵28 h,发酵液OD_(600)达到27,产酶313 kU/L发酵液,粗略估算重组蛋白占细胞总蛋白的70%。发酵生产的重组CAH粗酶液经过硫...
本文构建了利用trp启动子表达头孢菌素脱乙酰酶(CAH)的重组大肠杆菌DH5α-pCAH。重组菌在7L发酵罐(装液量2L)中发酵28 h,发酵液OD_(600)达到27,产酶313 kU/L发酵液,粗略估算重组蛋白占细胞总蛋白的70%。发酵生产的重组CAH粗酶液经过硫酸铵分级沉淀分离纯化和超滤除盐浓缩两步操作,纯化倍数为1.44,总酶活回收率56%,聚丙烯酰胺凝胶电泳检测纯化后蛋白没有明显杂蛋白条带出现。纯化后的CAH共价结合固定在环氧基载体LX-1000EP(c)上,通过对固定化条件的优化最终得到固定化酶比活443 U/g。该固定化酶重复催化50 mL 5%7-ACA底物100次后,酶活没有降低。
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关键词
头孢菌素脱乙酰酶
生物催化
固定化
重组大肠杆菌
7-ACA
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职称材料
题名
头孢菌素脱乙酰酶的重组表达及固定化
1
作者
王群
魏东芝
沈亚领
陈鑫
金雄熊
叶凤起
机构
华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室
浙江永宁药业股份有限公司
出处
《工业微生物》
CAS
CSCD
2014年第4期66-69,共4页
基金
上海市重点学科建设项目资助(B505)
国家重点实验室专项资金资助(2060204)
文摘
本文构建了利用trp启动子表达头孢菌素脱乙酰酶(CAH)的重组大肠杆菌DH5α-pCAH。重组菌在7L发酵罐(装液量2L)中发酵28 h,发酵液OD_(600)达到27,产酶313 kU/L发酵液,粗略估算重组蛋白占细胞总蛋白的70%。发酵生产的重组CAH粗酶液经过硫酸铵分级沉淀分离纯化和超滤除盐浓缩两步操作,纯化倍数为1.44,总酶活回收率56%,聚丙烯酰胺凝胶电泳检测纯化后蛋白没有明显杂蛋白条带出现。纯化后的CAH共价结合固定在环氧基载体LX-1000EP(c)上,通过对固定化条件的优化最终得到固定化酶比活443 U/g。该固定化酶重复催化50 mL 5%7-ACA底物100次后,酶活没有降低。
关键词
头孢菌素脱乙酰酶
生物催化
固定化
重组大肠杆菌
7-ACA
Keywords
CAH
biocatalysts
immobilized enzyme
recombinant E. coli
7-ACA
分类号
TQ927 [轻工技术与工程—发酵工程]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
头孢菌素脱乙酰酶的重组表达及固定化
王群
魏东芝
沈亚领
陈鑫
金雄熊
叶凤起
《工业微生物》
CAS
CSCD
2014
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