头孢菌素C酰基转移酶在顶头孢霉中的表达

以假单胞菌的头孢菌素C(CPC)酰基转移酶为基础,根据顶头孢霉密码子偏爱性及RNΑ二级结构预测分析,设计并合成了全长2349bp的CPC酰基转移酶基因ecs,并将其在大肠杆菌中表达。结果证明,表达蛋白能将CPC转化为7-ΑCΑ。将ecs表达质粒转化CPC产生菌顶头孢霉,通过PCR、Southern blotting以及Western blotting等方法验证,表明ecs基因已成功整合到顶头孢霉染色体上并得到表达,重组菌的发酵也显示部分CPC直接转化成了7-ΑCΑ。

不同底物浓度下一步酶法制备7-ACA含量及转化率的动态变化

7-氨基头孢烷酸(7-ACA)是生产头孢菌素的重要原料,目前,酶法制备7-ACA生产技术由于具备安全、环保和低成本优势,在国内应用十分广泛,其中两步酶法存在酶解路线长、氧化条件控制难度大、设备条件高的缺点,因此,本文主要对一步酶(头孢菌素C酰基转移酶)法进行了研究,不同底物浓度经酰化酶裂解,7-ACA平均含量达到92.95%,平均转化率达到62.97%。