肠杆菌诱导型AmpC酶对第三代和第四代头孢菌素的影响

目的探讨诱导型AmpC酶对三代、四代头孢菌素的影响及其治疗策略。方法采用药敏纸片扩散法,用FOX药敏纸片作为诱导剂,以CAZ、CTX和FEP作为指示剂,检测肠杆菌的诱导AmpC酶的产生。结果待测的196株菌株中有101株为产诱导型AmpC酶阳性(51.5%),其中阴沟肠杆菌58株(67.4%),产气肠杆菌18株(52.9%),沙雷菌属共8株(40%),费劳地枸椽酸杆菌6株(42.8%),聚团肠杆菌6株(33.3%),奇异变形杆菌5株(20.8%),其余95株产诱导型AmpC酶为阴性。产诱导型AmpC酶阳性菌株中无一株对FEP纸片的抑菌圈直径有影响,诱导型AmpC酶试验均为阴性。结论对于鉴定确认为诱导型AmpC酶阳性菌株的感染,即使实验报告三代头孢菌素为敏感,也应慎用或避免使用第三代头孢菌素的治疗,以第四代头孢菌素如头孢吡肟为首选药。

酶法合成头孢菌素类抗生素的研究进展

半合成抗生素的生产在医药工业中占有十分重要的地位。青霉素酰化酶是半合成 β 内酰胺类抗生素的重要用酶。由于酶法合成与化学法合成相比具有一定的优越性 ,随着酶工程技术的发展 ,酶法合成头孢菌素类抗生素已日益受到重视。提高合成产率 ,降低侧链消耗 ,从而降低生产成本是酶法合成头孢菌素类抗生素研究的关键问题。平衡控制和动力学控制是酶法合成过程的两大研究策略 ,通过改变底物、降低水活度、添加高聚物、采用固定化技术及新型反应体系等措施可改善酶促反应的微环境 ,改变酶的动力学特性 ,从而起到强化合成途径的作用。

固定化青霉素G酰化酶水解头孢菌素G制备7—ADCA的研究

用聚丙烯腈纤维固定化青霉素酰化酶水解头孢菌素G制备7-ADCA,固定化酶对头孢菌素G的最适pH为9.0,最适温度50℃。在37℃、pH8.0固定化酶对头孢菌素G的表观米氏常数为1.67×10^(-2)mol/L。最大反应速度为3.01mmol·g^(-1)·min^(-1)。头孢菌素G溶液浓度在2％以上时,对固定化酶有明显的抑制作用。固定化酶水解头孢菌素G的最佳投料浓度为5％～6％,水解时用酶量以每克头孢菌素G投300U以上为好。按上述条件水解头孢菌素G,操作25批后固定化酶保留活力77.8％,7-ADCA平均收率92.68％。

大肠埃希菌质粒介导头孢菌素酶基因型研究

目的调查大肠埃希菌中质粒头孢菌素酶(AmpC酶)的基因型分布以及耐药性。方法收集对头孢西丁耐药的24株大肠埃希菌,根据头孢菌素酶和超广谱内酰胺酶(ESBLs)各种已知基因序列设计引物,进行聚合酶链反应(PCR)及序列分析确定AmpC酶基因以及ESBLs的基因型分布;接合试验证实质粒ampC基因有无可转移性。结果24株耐头孢西丁的大肠埃希菌中13株产CMY型类似AmpC酶,1株产DHA-1型AmpC酶;PCR检测发现ESBLsTEM型15株,CTX-M型2株,SHV型1株。结论耐头孢西丁的大肠埃希菌中发现CMY型类似AmpC酶和DHA-1型AmpC酶。药敏结果对大多数新型广谱β-内酰胺类抗生素耐药,对亚胺培南敏感。

头孢菌素C酰基转移酶在顶头孢霉中的表达

以假单胞菌的头孢菌素C(CPC)酰基转移酶为基础,根据顶头孢霉密码子偏爱性及RNΑ二级结构预测分析,设计并合成了全长2349bp的CPC酰基转移酶基因ecs,并将其在大肠杆菌中表达。结果证明,表达蛋白能将CPC转化为7-ΑCΑ。将ecs表达质粒转化CPC产生菌顶头孢霉,通过PCR、Southern blotting以及Western blotting等方法验证,表明ecs基因已成功整合到顶头孢霉染色体上并得到表达,重组菌的发酵也显示部分CPC直接转化成了7-ΑCΑ。

佳木斯地区大肠埃希菌和阴沟肠杆菌质粒介导头孢菌素酶、超广谱β-内酰胺酶基因型分布

目的了解佳木斯地区临床分离的大肠埃希菌和阴沟肠杆菌中质粒介导头孢菌素酶(AmpC酶)和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)流行情况及主要的基因型别。方法 127株临床分离无重复大肠埃希菌81株与阴沟肠杆菌46株,采用酶提取物三维实验检测产AmpC酶和ESBLs菌株,聚合酶链反应(PCR)扩增质粒型AmpC酶与ESBLs基因及其序列测定以确定其基因亚型。结果 46株阴沟肠杆菌中,单产AmpC酶者、单产ESBLs者、高产AmpC酶并产ESBLs者分别占21.7%、28.3%、6.5%;81株大肠埃希菌中,单产AmpC酶者、单产ESBLs者、高产AmpC酶并产ESBLs者分别占19.8%、38.3%、9.9%。大肠埃希菌ESBLs基因型为TEM、SHV、CTX-M,质粒AmpC酶基因型为DHA。阴沟肠杆菌ESBLs基因型为TEM、SHV、CTX-M,质粒AmpC酶基因型为DHA。结论 CTX-M型和DHA-1型分别是本地区大肠埃希菌和阴沟肠杆菌ESBLs和质粒介导AmpC酶的主要流行基因型。

固定化D-氨基酸氧化酶转化头孢菌素C为戊二酰基-7-氨基头孢霉烷酸

部分纯化的变异三角酵母D-氨基酸氧化酶(DAO)在碱性条件下变性过氧化氢酶,再与大孔聚甲基丙烯酸缩水甘油酯高聚物共价交联。与游离酶相比,固定化酶的最适反应温度升高,最适pH范围变宽,对温度和pH的稳定性都有明显的提高。固定化DAO在搅拌反应器中催化头孢霉素C(CPC)转化为戊二酰基-7-氨基头孢霉烷酸(Gl-7-ACA)。以0.03g/mL的CPC为底物,在温度25℃、pH7.2条件下,产物的得率>93%,副产物得率<5%。经过110批反应后,固定化酶保持64%的初始活力。

新疆某院5年间大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶和头孢菌素酶的分布及耐药特征分析

目的了解该院2011年1月至2015年12月大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和头孢菌素酶(AmpC)在感染中的分布及耐药特征。方法细菌鉴定采用法国生物梅里埃公司VITEK2-compact的GN鉴定卡;药敏实验采用纸片扩散(KB)法;双纸片增效法检测ESBLs;头孢西丁三维实验法检测AmpC酶;应用Whonet5.6、SPSS19.0软件进行统计分析。结果共分离出1 134株大肠埃希菌,主要来自尿液、呼吸道痰及气管抽吸物,分别占38.45%、37.65%;其中老年病科分离率最高,占17.72%;检出产酶株637株,占56.17%。单产ESBLs、单产AmpC及同产ESBLs+AmpC的大肠埃希菌分别为555、23、59株,分别占48.94%、2.03%、5.20%。产酶检出率最高的是老年病科,占67.16%。5年间以2015年的产酶检出率最高,占63.68%。各年龄组中产ESBLs与AmpC检出率,以大于75岁年龄组最高,占66.33%。产酶株与非产酶株对氨曲南、头孢一到四代、加酶抑制剂的阿莫西林/棒酸、替卡西林/棒酸、氨苄西林/舒巴坦;氨基糖苷类的妥布霉素、庆大霉素、喹诺酮类的左氧氟沙星和环丙沙星、磺胺类的磺胺甲噁唑/甲氧苄啶等15种抗菌药物的耐药率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。同时产ESBLs与AmpC菌株中出现了对碳青霉烯类抗菌药物耐药的细菌。单产AmpC大肠埃希菌耐药率相比于单产ESBLs要高,同时产ESBLs与AmpC大肠埃希菌耐药率相比于单产AmpC和单产ESBLs更高。总耐药数据显示,碳青霉烯类抗菌药物抗菌活性最强,其他依次是头孢替坦、阿米卡星、呋喃妥因、哌拉西林/他唑巴坦及头孢西丁。结论产酶的大肠埃希菌耐药严重,合理使用抗菌药物以减少耐药率。

产超广谱β-内酰胺酶及头孢菌素酶肺炎克雷伯菌耐药现状及防治

肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae，Kpn）为革兰阴性菌，属于肠杆菌科，兼性厌氧，常寄殖于人体上呼吸道和肠道，是重要的条件致病菌和院内感染常见的病原体之一。

产头孢菌素酶细菌所致医院下呼吸道感染的危险因素与临床特点分析

目的:了解产头孢菌素酶(Ampc酶,属β-内酰胺酶)细菌所致医院下呼吸道感染的危险因素与临床特点,方法:回顾性分析47例产AmpC酶细菌所致的医院下呼吸道感染患者的临床资料, 以同期136例非产Ampc酶细菌感染患者为对照,分析其临床特征,并应用单因素和多因素非条件Logistic 回归分析筛选产Ampc酶细菌感染的危险因素。结果:多因素分析结果显示应用第3代头孢菌素和入住 ICU超过3日为产AmpC酶细菌所致的医院下呼吸道感染的独立危险因素(OR值分别为4．934、3．616,P 值分别为0．004、0．021)。产AmpC酶细菌感染无特征性临床表现。感染后住院时间、混合其它细菌和 (或)真菌感染发生率及病死率均显著高于非产Ampc酶细菌感染(均为P<0．05)。结论:应用第3代头孢菌素和入住ICU为产AmpC酶细菌所致的医院下呼吸道感染的独立危险因素。因其并无特征性临床表现,故对住院感染患者应进行Ampc酶的检测,以指导临床医生应用敏感抗生素对患者进行抗感染治疗, 从而缩短住院时间、降低病死率。

头孢菌素类无菌检查中酶处理探讨

目的:通过验证试验建立头孢菌素类无菌检查法。方法:按2005年版《中国药典》规定,采用薄膜过滤法对10种不同代注射用头孢菌素进行系统的无菌检查方法研究。结果:不同代头孢菌素因抗菌谱的差异,对阳性对照菌,冲洗量及青霉素酶的加入方法等条件有显著不同。结论:头孢菌素类药的无菌检查方法可加入适量β-内酰胺酶(青霉素酶),提高阳性检出率,确保无菌实验结果的可信度。

头孢菌素酰化酶

氨基头孢烷酸（７ａｍｉｎｏｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒａｎｉｃａｃｉｄ，７ＡＣＡ）是医药工业合成大多数头孢菌素的重要原料．头孢菌素酰化酶（ｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｎａｃｙｌａｓｅ，ＣＡ）催化头孢菌素Ｃ（ＣＰＣ）和戊二酰７氨基头孢烷酸（ＧＬ７ＡＣＡ）的水解反应，生成７ＡＣＡ．根据ＣＡ催化底物的不同，可将其划分为两类：ＣＰＣ酰化酶和ＧＬ７ＡＣＡ酰化酶．由ＣＡ的同源性、分子质量大小和基因结构，可以把头孢菌素酰化酶划分为五种；讨论了酶的基本性质．通过ＣＡ与Ｎ端亲核水解酶（Ｎｔｎ水解酶）的比较，推测ＣＡ属于Ｎｔｎ水解酶，并由此可以进一步理解它们的生理功能．

临床分离产头孢菌素酶阴沟肠杆菌的耐药性研究

目的:研究我院产头孢菌素酶(AmpC酶)阴沟肠杆菌的检出率、耐药情况及ampC基因型。方法:收集临床分离的耐药阴沟肠杆菌15株;三维试验检测AmpC酶;NCCLS方法检测超广谱β-内酰胺酶(ESBLs);琼脂二倍稀释法测定M IC值;PCR扩增检测ampC基因及序列测定。结果:15株菌中8株菌(53.3%)产AmpC酶,3株菌(20.0%)产ESBLs。产AmpC酶的菌株除对亚胺培南全敏感外,对其它抗菌药不同程度耐药。5株菌的ampC基因与阴沟肠杆菌ECLC074的ampC基因100%同源,3株菌与之99%同源,2株菌的AmpC酶发生了1个氨基酸残基的改变。结论:产AmpC酶是阴沟肠杆菌对β-内酰胺类抗生素耐药的主要机制之一。阴沟肠杆菌ECLC074 ampC基因是我院主要的阴沟肠杆菌ampC基因型。产AmpC酶的阴沟肠杆菌常呈多重耐药,亚胺培南是治疗此类菌所致感染的最有效药物。

鸽源大肠杆菌超广谱β-内酰胺酶与头孢菌素酶基因型分析

为研究鸽源大肠杆菌的耐药性及其产超广谱β-内酰胺酶(Extended-Spectrumβ-lactamase,ESBLs)和头孢菌素酶(AmpC betalactamase,AmpC)的基因型,从临床上分离出352株鸽源大肠杆菌,通过药敏试验进行耐药性分析,再采用三维试验从以上结果中筛选出211株产ESBLs、156株产AmpC的大肠杆菌进行基因型分析。结果表明:产ESBLs的菌株共有211株(59.94%),产AmpC的菌株共有156株(44.32%),其中FOX基因型共47株(30.13%),TEM基因型共129株(61.14%),分别为2种酶的主要基因型。鸽源大肠杆菌对β-内酰胺类、氨基糖苷类、磺胺类和四环素类等抗菌药物均有较强耐药性,表现有多重耐药性。

VITEK2筛选鲍曼不动杆菌产头孢菌素酶可靠性评价

目的验证和评价VITEK2高级专家系统（AES）判定鲍曼不动杆菌产头孢菌素酶AmpC的可靠性。方法首先收集2009年l～8月经VITEK2的AES判定为产AmpC酶鲍曼不动杆菌，用AmpC纸片法进行确证试验，最后用聚合酶链反应验证阳性株是否存在AmpC基因。结果15株AES判断为产AmpC酶的菌株，经AmpC纸片法确证试验为阳性，其中12株阳性产酶株可以检测到AmpC基因。132株AES判断为不产AmpC酶的菌株中，经AmpC纸片法验证均为阴性。结论VITEK2AES可以很好地预测鲍曼不动杆菌产AmpC酶情况，有助于快速、准确地检测鲍曼不动杆菌这一相关耐药机制，为临床治疗多重耐药鲍曼不动杆菌提供更有力的支持。

小鼠抗青霉素和头孢菌素酰化酶抗体制备及交叉反应研究

为探讨用不同方法制备的抗原对抗体效价的影响以及抗体之间的交叉反应 ,采用 3种不同方法制备的抗原分别免疫 BAL B/ c小鼠 ,制备出抗青霉素酰化酶 α亚基、β亚基和抗头孢菌素酰化酶α亚基、β亚基 4种抗体 ,测定了它们的效价 ;同时还比较了用同一种方法制备的抗原免疫小鼠后制作这两类抗体的效价以及上述 4种抗体之间对应抗原的交叉反应。结果表明 ,用割胶法制备的抗原免疫小鼠后所得抗体效价较高 ;同样用割胶法制备的抗原免疫小鼠后所得的两类抗体效价无显著差异 ;在交叉反应测试中 ,抗头孢菌素酰化酶抗体也能识别青霉素酰化酶 ,但抗青霉素酰化酶抗体却几乎不能识别头孢菌素酰化酶 ,即抗头孢菌素酰化酶抗体更为活跃 ,而抗青霉素酰化酶抗体则更为专一。同类抗体对应抗原 2个亚基之间的交叉反应说明其互相结合部位结构的类似 。

产头孢菌素酶大肠埃希菌的随机扩增多态性DNA分型研究

目的对产头孢菌素酶大肠埃希菌的耐药现状进行分析研究,对耐药株进行基因分型流行病学研究。方法对临床分离的157株大肠埃希菌进行头孢菌素酶(AmpC)检测,采用K—B琼脂扩散法,按照美国CLSI规定判断结果,判断细菌的耐药性;对产AmpC酶菌株以随机扩增多态性DNA分型法(RAPD)进行基因分型;接合试验证实酶基因有无可转移性。结果产AmpC酶大肠埃希菌占8.9%(14/157);14株产AmpC酶菌株经过RAPD扩增分为13型。结论本院已经发现产质粒介导AmpC酶菌株,其耐药性能够水平传播。药敏检测结果显示对大多数新型广谱β-内酰胺类抗生素耐药,对亚胺培南敏感。RAPD证实他们大多来自不同的克隆株。RAPD是从分子水平对耐药细菌进行流行病学研究的一种经济、快速、可靠的基因分型方法。

质粒介导头孢菌素酶的研究进展

质粒介导的头孢菌素酶(pAmpC酶)能水解青霉素类、头孢菌素类和头霉素类药物,根据基因同源性可分成6组,常见的有DHA、MIR、CMY、MOX、FOX等基因型。pAmpC酶可以在同种或不同种细菌中进行传播,造成院内感染的暴发,所以必需引起临床的高度重视。目前对pAmpC酶稳定的药物主要有碳青霉烯类和第4代头孢(头孢吡肟、头孢匹罗)以及某些喹诺酮类和氨基糖甙类抗生素。

酶法转化头孢菌素C成为7-氨基头孢烷酸的研究进展

7-氨基头孢烷酸(7-ACA)是生产头孢菌素的重要原料,目前大多由头孢菌素C通过化学法或酶法转化而来。本文综述了两步酶法生产7-ACA的研究进展,并详细阐述了催化过程用到的D-氨基酸氧化酶和GL-7-ACA酰化酶的酶学特性、表达、纯化及固定化。