急性氨氮毒性对黄颡鱼头肾巨噬细胞抗氧化及炎症相关基因表达的影响

为了研究急性氨氮胁迫对黄颡鱼头肾巨噬细胞抗氧化及炎症相关基因表达的影响,实验通过建立黄颡鱼离体头肾细胞模型,开展为期96 h的急性氨氮胁迫实验。结果显示,0.14和0.28 mg/L总氨氮处理组SOD基因的相对表达量显著低于对照组,但0.28 mg/L总氨氮处理组GPX基因的相对表达量显著高于其他组;0.14和0.28 mg/L总氨氮处理组IL-1和TNF基因的相对表达量显著低于对照组,而0.28 mg/L总氨氮处理组IL-8基因的相对表达量显著低于0.14 mg/L总氨氮处理组和对照组;吖啶橙染色检测发现,0.14 mg/L总氨氮处理组实验鱼头肾巨噬细胞内可见边缘不规则的黄绿色荧光,0.28 mg/L总氨氮处理组实验鱼头肾巨噬细胞内可见致密浓染的黄绿色荧光信号。研究表明,氨氮毒性能够影响黄颡鱼头肾巨噬细胞抗氧化相关基因的表达;细胞凋亡可能是造成鱼类氨中毒致死的主要原因之一。

低氧水体对尖吻鲈Lates calcarifer(Bloch)头肾巨噬细胞(Head-kidney macrophage)活性的影响

尖吻鲈在水体中含氧量约3.0mg/L状态下(实验组)养殖3天,其吞噬百分率(PA)和吞噬指数(PI)与对照组(含氧量约6.0mg/L)相比无显著变化(P>0.05);在第6天和第9天,实验组的PA和PI比对照组有明显降低(P<0.05);在第12天,实验组与对照组间的PA和PI差异达到极显著(P<0.01)。实验的前6天,实验组与对照组间的动物头肾NBT阳性巨噬细胞数目基本相等;而在第9天后,实验组动物的头肾NBT阳性巨噬细胞数目显著减少(P<0.05)。

黄芪多糖对大黄鱼头肾巨噬细胞的免疫调节作用

为探究黄芪多糖(Astragalus polysaccharide,APS)对大黄鱼(Larimichthys crocea)头肾巨噬细胞的免疫调节作用,本研究从植物黄芪中分离纯化得到APS,用流式细胞仪检测其对头肾巨噬细胞呼吸爆发和吞噬活性的影响,并采用qPCR检测APS对3种细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6基因转录水平的影响。实验结果显示,50、100、200、400、800μg/cm 3 APS可以显著抑制巨噬细胞的氧呼吸爆发(ROS);100、200、400、800μg/cm 3 APS可以显著抑制细胞的氮呼吸爆发(NO);50、100、200μg/cm 3 APS预处理后可以显著增强脂多糖(LPS)刺激头肾巨噬细胞的吞噬活性;200μg/cm 3 APS可以显著增强TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA在6、12、24 h的表达量。结果表明,APS对离体培养大黄鱼头肾巨噬细胞有明显的免疫调节作用。

大豆异黄酮对褐牙鲆头肾巨噬细胞免疫相关基因表达的体外研究

大豆异黄酮作为免疫增强剂对机体具有免疫调节作用。在离体条件下以不同质量浓度大豆异黄酮细胞培养液(0、0.1、0.5、1.0、1.5、2.0mg/mL)培养褐牙鲆头肾巨噬细胞,分别在培养至6、12、24h收集细胞并进行细胞RNA提取,通过荧光定量PCR测定巨噬细胞中免疫相关基因IL-1"、IFN-#、IgM及HSP70的相对表达量。试验结果表明,在体外培养下,大豆异黄酮显著影响褐牙鲆头肾巨噬细胞中4种免疫相关基因的相对表达,且大豆异黄酮质量浓度为0.5~1.5mg/mL时,显著上调IL-1"、IFN-#和HSP70基因的相对表达(P<0.05),0.5~1.0mg/mL的大豆异黄酮显著上调IgM基因的相对表达(P<0.05)。选取大豆异黄酮质量浓度为1.0mg/mL时,研究脂多糖刺激下大豆异黄酮对4种基因相对表达量的影响,试验结果显示,在脂多糖刺激下,褐牙鲆头肾巨噬细胞4种免疫相关基因随刺激时间的变化趋势与未添加大豆异黄酮组基本一致,但是在特定取样时间点,其相对表达量显著增加。IL-1"在脂多糖刺激后6h和24h表达量极显著高于对照组(P<0.01);IFN-#在脂多糖刺激后24h表达量显著高于对照组(P<0.05);IgM则在刺激后6h极显著高于对照组(P<0.01);而HSP70自脂多糖刺激后3h开始,其相对表达量均极显著高于对照组(P<0.01)。综上所述,在本试验条件下,培养液中大豆异黄酮质量浓度为0.5~1.5mg/mL时,能够显著上调体外培养条件下褐牙鲆头肾巨噬细胞IL-1"、IFN-#、IgM和HSP70基因的相对表达,从而增强褐牙鲆头肾巨噬细胞的免疫力。

脂多糖对大黄鱼原代头肾巨噬细胞的激活作用

为了探究脂多糖(LPS)对大黄鱼原代头肾巨噬细胞(PKM)的激活作用及其相应受体,采用流式细胞术检测LPS对大黄鱼PKM吞噬活性和氮呼吸爆发的影响,用实时荧光定量PCR检测LPS对3种促炎因子(IL-1β、IL-6、IL-8)和7种受体基因(TLR1、TLR2、TLR21、MR1、MR2、NOD1、NOD2)转录水平的影响.结果显示:0.1μg·mL^(-1)LPS可以显著提高大黄鱼PKM的吞噬能力(P<0.05),1、10、100μg·mL^(-1)LPS可以极显著地增强细胞的吞噬能力(P<0.01);1、10、100μg·mL^(-1)LPS可以极显著提高细胞的氮呼吸爆发(P<0.01);LPS可以显著上调3种促炎因子(IL-1β、IL-6、IL-8)和6种受体基因(TLR1、TLR2、TLR21、MR2、NOD1、NOD2)的表达水平,显著下调MR1的表达水平.研究表明,LPS对大黄鱼PKM有明显的激活作用,并刺激细胞向M1型巨噬细胞分化.

维生素D_(3)对黄颡鱼头肾极化分型的巨噬细胞影响

研究以黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)头肾巨噬细胞为研究对象,通过细菌脂多糖(LPS)和环磷酸腺苷(cAMP)分别诱导M1型和M2型极化,200 pmol/L维生素D_(3)孵育后对其形态学特征、生物学功能及极化相关基因的表达进行分析鉴定来确定维生素D_(3)在巨噬细胞极化中的调节作用。结果表明,维生素D_(3)能降低诱导后M1型和M2型巨噬细胞的死亡率,并增强巨噬细胞的吞噬活性。在M1型巨噬细胞中维生素D_(3)能够抑制活性氧(ROS)和炎症介质一氧化氮(NO)的产生,降低超氧阴离子自由基的活力,白介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平显著降低(P<0.05);在M2型细胞中能够增加精氨酸酶的活性,显著增加白介素10(IL-10)和转化生长因子(TGF-β)的表达水平(P<0.05),最终抑制巨噬细胞向M1表型极化,促进巨噬细胞向M2表型极化,发挥抗炎作用;黄颡鱼头肾巨噬细胞中Nos-2和Arg-2分别是M1和M2巨噬细胞的生物标记基因。研究结果为进一步研究鱼类巨噬细胞极化及维生素D_(3)对极化调节的影响提供了重要依据。

斑点叉尾[鱼回]头肾巨噬细胞分离及初步应用

通过Percoll密度梯度离心法分离斑点叉尾[鱼回]头肾巨噬细胞,经含2%胎牛血清的L-15培养液中培养,在光镜和电镜下观察其形态和超微结构;采用MTS法研究酵母细胞壁对巨噬细胞体外作用的合适浓度和最佳时间。结果表明:使用34%、51%的密度梯度分离斑点叉尾[鱼回]头肾细胞,经过3~12小时培养,巨噬细胞纯化率95%以上;分离的头肾巨噬细胞具有巨噬细胞的形态特征。酵母细胞壁对斑点叉尾[鱼回]的巨噬细胞最适的作用浓度为0-500pg/ml,作用时间为12小时。本研究为进一步探讨酵母细胞壁对鱼类免疫细胞的作用机理奠定了基础。

大豆异黄酮对褐牙鲆免疫细胞功能的体外研究

在超净台内剖取、研磨褐牙鲆头肾,用Ortuńo的方法分离头肾巨噬细胞;无菌抗凝尾静脉抽血分离外周血白细胞。用含有0、0.1、0.5、1.0、1.5mg/mL和2.0mg/mL大豆异黄酮的细胞培养液分别体外培养这些细胞,24h后分别测定细胞的氧呼吸爆发活力、增殖活力及吞噬活力等免疫指标。试验结果表明,在体外培养下,大豆异黄酮显著影响褐牙鲆头肾巨噬细胞和外周血白细胞免疫力(P<0.05),且随着培养液中大豆异黄酮质量浓度的增加,上述细胞免疫力先增后降。当培养液中大豆异黄酮质量浓度为0.5mg/mL时,褐牙鲆头肾巨噬细胞和外周血白细胞的氧呼吸爆发活力、增殖活力以及吞噬活力显著高于其他处理组(P<0.05);而当大豆异黄酮质量浓度达到2mg/mL时,显著抑制褐牙鲆头肾巨噬细胞和外周血白细胞免疫力(P<0.05)。在本试验条件下,体外细胞培养中添加0.5mg/mL大豆异黄酮促进了褐牙鲆头肾巨噬细胞和外周血白细胞的免疫力;2mg/mL大豆异黄酮则明显抑制细胞免疫力。