头花龙胆多酚工艺优化及体外生物活性研究

采用响应面法,以超声辅助提取的方式对头花龙胆总多酚提取工艺进行优化,并检测其多酚提取物体外降糖降脂活性。结果显示:最佳提取参数为超声时间78 min,料液比1∶81(g/mL),乙醇体积分数61%。此条件下多酚得率最高,达到2.45%,与预测得率2.42%的相对偏差为1.24%,说明此模型拟合度较好。体外生物活性检测发现,其多酚提取物对葡萄糖吸收有延迟作用,同时对胆酸盐具有结合能力。

超声提取头花龙胆总黄酮的工艺优化

为了综合利用头花龙胆,采用超声法提取头花龙胆总黄酮,在单因素试验基础上,采用L9(34)正交设计对其工艺进行优化。结果表明:各因素对头花龙胆总黄酮提取率的影响大小为料液比>乙醇浓度>超声时间,头花龙胆总黄酮的最佳提取条件为乙醇浓度70%,料液比1∶50,超声提取50min,在该工艺条件下,头花龙胆总黄酮的提取率为2.977%。

高效液相色谱法测定云南产龙胆习用品头花龙胆中3种成分的含量

目的测定云南产龙胆习用品头花龙胆中龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷的含量,并研究头花龙胆与正品坚龙胆药材化学成分的相似性,为其作为正品龙胆使用提供科学依据。方法采用高效液相色谱(HPLC)法;色谱柱为Agilent Zorbax SB C18(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为甲醇-水,梯度洗脱;流速1.0 m L·min-1,检测波长238 nm;柱温25℃,进样量10μL。结果龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷3种成分在头花龙胆中均有分布。结论头花龙胆中含有丰富的环烯醚萜苷类成分,特别是龙胆苦苷成分含量较高,其HPLC色谱与正品坚龙胆药材极为相似,将头花龙胆作为正品龙胆药材的替代品使用有一定合理性。所建立方法简单,结果准确,可用于龙胆类药材的品质评价。

头花龙胆种子形态及萌发特性初探

以贵州水城产野生头花龙胆Gentiana cephalantha种子为材料,将之分成60目与80目两个等级,研究其在不同温度下贮藏;不同温度、不同试剂及其不同浓度浸种的萌发特性。结果表明:60目种子长径为0.718±0.0669mm,短径为0.430±0.0297mm,千粒重为0.0287±0.0010;80目种子长径为0.558±0.0412mm,短径为0.320±0.0297mm;千粒重为0.0198±0.0008g。60目种子的萌发率、萌发势及萌发指数大于80目种子,差异不显著(P>0.05);在4℃和室温下贮藏的种子,其萌发率、萌发势和萌发指数差异不显著(P>0.05);恒温与变温浸种,其萌发率、萌发势和萌发指数差异也不显著(P>0.05);赤霉素与硝酸钾浸种,能提高种子萌发率。赤霉素浸种最佳浓度为100 mg/L,其萌发率最高为81.5%,硝酸钾浸种最佳浓度为2%,其萌发率最高为76%。

头花龙胆组织培养繁殖技术

为获得优良健壮的组培苗,建立头花龙胆的无性快繁体系,以六盘水采头花龙胆茎段为外植体,进行愈伤组织的诱导与分化、芽的增殖与继代、根的分化培养。结果表明:MS+NAA0.2mg/L+6BA0.4mg/L培养基适宜诱导,诱导率为93.3%;MS+NAA0.1mg/L+6BA0.3mg/L培养基适宜增殖分化,增殖系数达10.2;MS+NAA0.1mg/L+6BA0.1mg/L培养基适宜生根,接种30d即可生根,生根率100%,同时也适宜增殖。

白族药用植物头花龙胆品质评价的初步探讨

目的:对大理州不同居群白族药用植物头花龙胆进行品质评价初步探讨。方法:采用HPLC法测定大理州不同居群头花龙胆根及根茎中龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、獐芽菜苷、苦龙胆酯苷的含量,并建立其HPLC指纹图谱,用单因素方差分析、聚类分析、主成分分析等方法对头花龙胆根及根茎中主要活性成分进行品质评价。结果:大理州不同居群头花龙胆根及根茎中龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、獐芽菜苷、苦龙胆酯苷含量(P<0.01)具有极显著差异,龙胆苦苷含量超过中国药典坚龙胆限量标准的5倍;头花龙胆HPLC指纹图谱中有19个共有峰,相似度均在0.995以上,同时与其相同居群的坚龙胆指纹图谱共有模式有15个共有峰;不同居群头花龙胆中龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、獐芽菜苷、苦龙胆酯苷总含量聚类分析和HPLC指纹图谱主成分分析结果一致。结论:大理州不同居群头花龙胆根及根茎中龙胆苦苷含量高、品质好,为白族民间长期用头花龙胆替代坚龙胆入药提供重要的依据。

相同产地3种龙胆属植物根及根茎中化学成分的差异分析

目的 为从龙胆属植物中挖掘坚龙胆可替代资源提供依据。方法 采用高效液相色谱(HPLC)法对3种龙胆属植物(坚龙胆、头花龙胆、微籽龙胆)根及根茎中4种活性成分(龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷和苦龙胆酯苷)的含量进行测定;采用超高效液相色谱-电喷雾-四极杆飞行时间高分辨质谱联用(UPLC-ESI-Q-TOF-MS)技术对上述植物根及根茎中化学成分进行鉴定,并进行主成分分析(PCA)。结果 头花龙胆与坚龙胆根及根茎中均含有龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷和苦龙胆酯苷这4种活性成分,其中头花龙胆和坚龙胆根及根茎中龙胆苦苷含量均是2020年版《中国药典》(一部)限量标准的4倍以上;而微籽龙胆根及根茎中仅检测到獐牙菜苦苷、獐牙菜苷和苦龙胆酯苷,其中的獐牙菜苷和苦龙胆酯苷含量分别是坚龙胆的34.12、8.81倍。通过UPLCESI-Q-TOF-MS技术从3种龙胆属植物根及根茎中共鉴定出33种化合物,主要为环烯醚萜类成分;此外,坚龙胆和头花龙胆中还含有酮类成分,微籽龙胆中还含有黄酮类成分。PCA结果显示,头花龙胆和坚龙胆差异较小,而微籽龙胆与坚龙胆差异较大。结论 同一产地头花龙胆与坚龙胆根及根茎的化学成分差异较小,存在可替代性;而微籽龙胆与坚龙胆根及根茎的化学成分差异较大,不能代替坚龙胆入药。

海拔对苍山地区野生滇龙胆品质的影响

目的:本论文旨在研究海拔对苍山地区野生滇龙胆(Gentiana rigescens Franch.)品质的影响。方法:采用高效液相色谱(HPLC)法对滇龙胆根茎叶中龙胆苦苷的含量进行测定,并将各部分龙胆苦苷含量与海拔高度进行相关性分析。结果:苍山地区滇龙胆品质优良,根茎叶三部分龙胆苦苷含量均超过《中国药典》规定,根部龙胆苦苷含量在3.9%~8.2%之间。此外,根部龙胆苦苷含量与海拔高度有显著线性相关性,其线性拟合方程为y = −0.2752 + x * 1.35048E−4。结论:苍山地区野生滇龙胆品质优良;在海拔2325.3~2599.7 m区间内,滇龙胆品质随海拔上升而升高;苍山地区海拔2400~2700 m范围内,是潜在的优良人工滇龙胆种植区。

中国龙胆属(Gentiana L.)秦艽组(Sect.Aptera Kusnez.)的分类研究

龙胆属(Gentiana L.)秦艽组(Sect.Aptera Kusnez.)所属的种类大多数是治疗风湿性关节炎常用中药之一,除供国内广泛应用外,还有一定量的出口。此组在我国种类多,产量高,分布广,且有不少特有种。现在市场上商品秦艽和原植物的关系存在着一定的混乱现象,影响医疗效果。秦艽组在我国究竟有多少种,分布情况怎样,都不很清楚,为此作者对秦艽组进行了分类研究。

四种龙胆的显微结构特征比较

为比较红花龙胆(Gentiana rhodantha)与翼萼龙胆(Gentiana pterocalyx)、滇龙胆(Gentiana rigescens)与头花龙胆(Gentiana cephalantha)的显微结构差异,用石蜡组织切片法及徒手切片法对4种龙胆的显微结构进行了研究。结果表明,红花龙胆与翼萼龙胆、滇龙胆与头花龙胆显微结构特征有明显区别。在根横切面方面,红花龙胆皮层厚,导管细胞横切口径小,无明显射线,翼萼龙胆的特征与红花龙胆的相反;滇龙胆与头花龙胆的表皮和皮层早脱,次生韧皮部发达,但滇龙胆韧皮部薄壁组织细胞较大,而头花龙胆较小。在茎横切面方面,红花龙胆中央髓约占切面的1/3,而翼萼龙胆约占切面的1/2;滇龙胆髓仅外部有散落分布的纤维束,头花龙胆髓部均可见纤维束散落分布。在叶横切面方面,红花龙胆中脉维管束较大,而翼萼龙胆较小;滇龙胆中脉维管束小,未见纤维束,头花龙胆中脉维管束大,纤维束成对位于木质部两侧。在叶表皮方面,4种植物表皮细胞径向壁波曲度与气孔指数有一定差异。根据显微结构特征可以将这4种植物区别开来。

不同树龄茶树套种滇龙胆对药材矿质元素含量的影响

采用电感耦合等离子体原子发射光谱法（ICP-AES）测定滇龙胆（Gentiana rigescens Franch.ex Hemsl.）与不同树龄（3年、4年、5年、9年、12年和15年）茶树（Camellia sinensis）套种后其根、茎、叶3个部位及生长土壤中7种矿质元素（B、Ca、Cu、Fe、Mn、Ni和Zn）的含量。结果显示,滇龙胆中矿质元素平均含量高低顺序为Ca（5 238±2 111）μg/g、Fe（622±238）μg/g、Mn（379±301）μg/g、Cu（75±9.1）μg/g、Zn（46±13）μg/g、B（17±4.9）μg/g、Ni（5.6±3.1）μg/g,与土壤矿质元素含量变化趋势基本一致。根部的B、Ca、Fe、Mn、Ni元素在树龄15年茶树-滇龙胆套种后含量最高,分别为18、3 797、1 050、254、11μg/g,Cu、Zn元素在树龄12年的茶树-滇龙胆套种中含量最高,分别为244、38μg/g。相同营养器官不同树龄的茶树-滇龙胆套种后矿质元素含量具有差异,以根部的Cu、Mn元素含量差异显著,变化范围分别为19~244μg/g和79~254μg/g,分别相差12.8倍和3.2倍;树龄15年、9年的茶树-滇龙胆套种后茎部的Cu含量分别为177、11μg/g,相差16.1倍;树龄3年、5年的茶树-滇龙胆套种后叶部的Cu含量分别为325、11μg/g,相差29.5倍。不同树龄的茶树-滇龙胆套种后根部与土壤矿质元素的相关性以及生物富集系数不同,树龄15年的茶树-滇龙胆套种后根部对Ca、Cu、Mn、Ni、Zn元素的富集能力较强,生物富集系数分别达21.0、3.3、2.2、1.8和4.7。说明茶树复合种植可改变土壤矿质元素的分布,自身生物学特性与复合种植的生态环境共同影响了滇龙胆对矿质元素吸收与运输的能力。

贵州产坚龙胆组织培养体系的建立

以贵州野生坚龙胆(Gentiana rigescens Franch)带有顶芽或腋芽的茎段作为外植体,建立坚龙胆的组织培养体系。结果表明,适宜的不定芽诱导培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA,最佳的增殖培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.10 mg/L NAA,最适生根培养基为1/2MS+0.1 mg/L IBA。在组织培养过程中还观察到了瓶苗开花的现象。

乙醇浓度对宁夏六盘山栽培秦艽中龙胆苦苷提取率的影响

[目的]探讨乙醇浓度对宁夏六盘山栽培秦艽中龙胆苦苷提取率的影响。[方法]以室温冷浸为提取方法,采用HPLC测定秦艽中龙胆苦苷的含量,比较浓度45%、55%、65%和75%的乙醇对宁夏六盘山栽培秦艽中龙胆苦苷提取率的影响。[结果]采用浓度45%、55%、65%和75%的乙醇提取的秦艽龙胆苦苷提取率分别为12.50%、13.26%、14.53%和14.42%;当乙醇浓度为65%时,提取率最高。[结论]乙醇浓度对宁夏六盘山栽培的秦艽中龙胆苦苷的提取率有明显影响,以浓度65%的提取率最高。

滇龙胆漂浮育苗基质的优选

以滇龙胆(Gentiana rigescens Franch)成熟种子为试材,采用正交试验设计分析育苗基质珍珠岩、蛭石、草炭、腐殖土4个因素对滇龙胆漂浮育苗种子萌发和幼苗生长的影响。结果表明,滇龙胆漂浮育苗种子萌发的最佳基质配比是珍珠岩∶蛭石∶草炭∶腐殖土=3∶1∶3∶4,种子萌发率达93.4%,珍珠岩和腐殖土对种子萌发率有显著影响,蛭石和草炭对种子萌发作用不显著;滇龙胆漂浮育苗幼苗生长的最佳基质配比是珍珠岩∶蛭石∶草炭∶腐殖土=2∶1∶3∶4,幼苗高、根长及茎叶干重均显著高于其他基质配比,幼苗根干重极显著高于其他基质配比,为(0.281 9±0.001 4)g。

林药复合种植的滇龙胆中元素的化学计量特征研究

药用植物复合种植是对传统中药材种植模式的优化,在一定程度上可缓解中药材与作物争地的矛盾,对中药资源的保护与可持续发展具有重要意义。试验通过采集单一种植模式的滇龙胆（Gentiana rigescens Franch.ex Hemsl.）样品以及滇龙胆与茶树[Camellia sinensis（L.）O.Ktze]、大叶桉（Eucalyptus robusta Smith）、木瓜[Chaenomeles sinensis（Thouin）Koehne]、旱冬瓜（Alnus nepalensis D.Don）、核桃（Juglans regia L.）、杉木[Cunninghamia lanceolata（Lamb.）Hook.]、木果石栎[Lithocarpus xylocarpus（Kurz）Markg.]等林药复合种植模式的滇龙胆样品,用微波消解-ICP-AES法测定各滇龙胆样品中的Ca、Mg、Fe、Zn、P、Cu、Mn、Cd、Pb、Ni、Sr、Ti等元素含量,以探明不同种植模式下滇龙胆植株中元素的化学计量特征。结果表明,该方法的加标回收率在95.40%~108.25%,相对标准偏差在0.26%~2.08%。其中滇龙胆根中的元素含量排序为Ca、Fe、Mg、P、Mn、Zn、Ti、Sr、Ni,茎、叶中的为Ca、Mg、P、Fe、Mn、Zn、Sr、Ti、Ni。以滇龙胆-茶树复合种植模式的P元素含量最高,其在根、茎、叶中分别为1 384.73、1 640.12、2 399.04μg/g;滇龙胆-旱冬瓜复合种植模式的Fe和Ti元素含量最高;滇龙胆-大叶桉复合种植模式的Mg元素含量最高,其根、茎、叶中分别为1 486.08、2 770.99、4 673.24μg/g;滇龙胆-核桃复合种植模式的Sr元素含量最高,其根、茎、叶中分别为37.02、52.80、34.63μg/g。重金属元素Cd与Ca、Fe、Ni元素含量之间呈显著或极显著正相关,相关系数分别为0.741、0.929、0.893;Ni与Fe、Ti含量之间呈显著或极显著正相关,与Pb含量之间呈显著负相关;Mg与Cu含量之间呈显著正相关,Mn与Sr含量之间呈极显著正相关。

植物激素对坚龙胆种子萌发的影响

[目的]探讨植物激素对坚龙胆种子萌发的影响。[方法]以坚龙胆成熟种子为试验材料,采用正交试验设计研究赤霉素(GA3)、6-苄基腺嘌吟(6-BA)、吲哚乙酸(IAA)及浸种时间对坚龙胆种子发芽情况的影响。[结果]坚龙胆种子发芽过程中以200 mg/L GA3+5mg/L 6-BA+5 mg/L IAA配比并浸种48 h处理的效果最好,种子发芽率达93%以上,种子开始发芽时间和发芽持续时间短,发芽势和发芽指数最高。[结论]经过正交试验设计优选出影响坚龙胆种子发芽率的作用大小为IAA>GA3>浸种时间>6-BA;经过植物激素处理可以提高坚龙胆种子的发芽率。

层积和赤霉素协同作用对滇龙胆种子漂浮育苗的影响

以滇龙胆(Gentiana rigescens Franch)成熟种子为试验材料,采用L9(34)正交设计方法研究层积方式、层积时间、赤霉素稀释液浓度和浸种时间对滇龙胆种子漂浮育苗的萌发及成苗的影响。结果表明,滇龙胆种子漂浮育苗促进萌发的最佳处理组合是湿沙层积方式+层积60 d+赤霉素稀释液浓度200 mg/L+浸种24 h,其中层积时间对滇龙胆种子萌发率有极显著的影响(P<0.01),赤霉素稀释液浓度对滇龙胆种子萌发率有显著的影响(P<0.05),而层积方式和浸种时间对滇龙胆种子的萌发作用不显著;滇龙胆种子漂浮育苗促进成苗的最佳处理组合是一般层积方式+层积30 d+赤霉素稀释液浓度50 mg/L+浸种24 h,其中赤霉素稀释液浓度对滇龙胆种子的成苗率有显著的影响(P<0.05),而层积方式、层积时间和浸种时间对滇龙胆种子的成苗作用不显著。综合考虑各种因素的影响,滇龙胆种子漂浮育苗促进萌发及成苗的最佳处理组合是一般层积方式+层积30 d+赤霉素稀释液浓度50 mg/L+浸种24 h,其种子萌发率为90.23%、成苗率高达97.50%。

陕西产秦艽中龙胆苦苷的提取和含量测定

[目的]采用超声技术提取秦艽中主要成分龙胆苦苷,建立高效液相色谱技术测定龙胆苦苷含量的方法。[方法]采用单因素试验,考察超声频率、超声功率、提取时间、提取剂用量对超声波提取的影响,以正交试验确定最佳提取条件;采用高效液相色谱法进行含量测定。[结果]最佳工艺条件为超声频率为80 KHz,超声功率为420 W,提取时间为20 min,提取剂用量为20 ml;在此情况下,龙胆苦苷的提取率为2.72%。[结论]该方法灵敏、准确、简便,适用于秦艽中龙胆苦苷的提取和含量测定。

3种龙胆草粗提物的抑菌活性及稳定性

以从贵州省六盘水市采集的头花龙胆(Gentiana cephalantha)、红花龙胆(G.rhodantha)及于毕节市采集的翼萼龙胆(G.pterocalyx)为材料,用超声、浸提及回流法提取粗提物,采用滤纸片扩散法,以抑菌圈大小为评价指标,检测3种龙胆草粗提物对大肠杆菌、铜绿假单胞菌及金黄色葡萄球菌的抑菌活性,考察氧化剂、温度、pH值及紫外线对龙胆草粗提物抑菌活性的影响。结果表明,头花龙胆与翼萼龙胆用3种提取方法所得粗取物的抑菌效果大致相当,而红花龙胆用超声与浸提法所得提取物的抑菌效果大致相当,回流法所得提取物的抑菌效果稍弱。头花龙胆浸提液对大肠杆菌、铜绿假单胞菌及金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度(MIC)均为0.100 g/mL,红花龙胆浸提液对以上3种菌的MIC分别为0.050、0.100、0.050 g/mL,翼萼龙胆浸提液对以上3种菌的MIC分别为0.150、0.100、0.150 g/mL。由结果可以看出,氧化剂能够增强3种龙胆草的抑菌活性;3种龙胆草提取物具有热稳定性;酸性环境的抑菌活性大于碱性环境,当pH值为4时,抑菌效果最好;在紫外线照射下,抑菌活性变化不大。综合对3种细菌的抑菌效果可知,研究所用的3种龙胆可以被开发成天然的抑菌剂。

濒危植物滇龙胆草的生态学、生物学特性研究

在滇西南地区对滇龙胆草(Gentiana rigescens Franch.ex Hemsl.)在自然状态下的生长环境、生长特性、繁殖特性、开花物候期以及资源状况等进行了考察。结果表明,滇龙胆草的野生种群在自然状态下仅为间断分布且种群内的植株数量较少,自种子萌发至植株开花结实需3年以上时间;开花后授粉方式以自花授粉为主,授粉后5～8 d子房开始膨大,果实成熟期为60 d左右,自然状态下结实率较高(82.4%),但种子萌发率(0.3%)较低;分蘖繁殖能力较低,每丛植株当年仅萌生1～2支茎。野生生境下滇龙胆草群体的更新主要是通过有性繁殖实现,自身繁殖缺陷及人为掠夺性采集是滇龙胆草野生资源濒危的主要原因。