YTH结构域家族蛋白2和叉头蛋白转录因子3在肺腺癌中的表达关系研究

目的 分析YTH结构域家族蛋白2(YTHDF2)及叉头蛋白转录因子3(FOXO3)在肺腺癌病人中的表达及与预后的关系。方法 收集2020年1月至2021年5月在郑州大学第一附属医院行手术治疗的肺腺癌病人癌组织及对应的癌旁组织(距离癌组织5 cm以上)80对,收集病人临床病理资料;利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库查询YTHDF2、FOXO3基因在肺腺癌中的表达水平;采用免疫组织化学法检测YTHDF2、FOXO3蛋白在肺腺癌组织中的表达情况;分析YTHDF2、FOXO3蛋白水平与肺腺癌病人临床病理资料的关系;分析肺腺癌中YTHDF2与FOXO3基因表达水平的相关性;对病人进行为期3年的随访,分析病人3年累积生存率。结果 YTHDF2、FOXO3蛋白在肺腺癌组织中的高表达率分别为34.00%、26.00%,明显低于癌旁正常组织中79.48%、61.54%(P<0.05)。YTHDF2蛋白表达情况与肺腺癌病人年龄、淋巴结转移和分化程度相关(P<0.05);与TNM分期、性别无关(P>0.05);FOXO3蛋白表达情况与肺腺癌病人性别和分化程度相关(P<0.05);肺腺癌组织中YTHDF2蛋白高表达组和低表达组病人3年累积生存率分别为53.30%、14.00%,经log-rank比较,差异有统计学意义(P<0.05);FOXO3蛋白高表达组和低表达组病人3年累积生存率分别为64.50%、12.20%,经Log-Rank比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 YTHDF2、FOXO3在肺腺癌组织中均低表达,与病人肿瘤分化程度及3年累积生存率有关,有望成为评估肺腺癌病人预后的生物标志物。

大黄素通过miR-96-5p靶向叉头蛋白K2减轻狼疮性肾炎肾小球系膜细胞的损伤

目的:探讨大黄素通过miR-96-5p靶向叉头蛋白K2(FOXK2)减轻狼疮性肾炎肾小球系膜细胞(MCs)损伤。方法:检测MRL/faslpr小鼠(狼疮性肾炎肾组)和MRL/MPJ小鼠(对照组)24 h尿蛋白以及血清尿素氮(BUN)和血肌酐(Scr)含量。MCs分离纯化后分为:MCs组(未做任何处理的MCs);L-EMO组(10μmol/L大黄素处理MCs)、M-EMO组(25μmol/L大黄素处理MCs)、H-EMO组(50μmol/L大黄素处理MCs)、H-EMO+miR-96-5p-NC组(50μmol/L大黄素处理MCs后转染miR-96-5p-NC)、HEMO+miR-96-5p-minic组(50μmol/L大黄素处理MCs后转染miR-96-5p-minic)。双荧光素酶报告基因实验验证miR-96-5p和FOXK2的靶向关系;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测miR-96-5p表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测FOXK2以及凋亡相关蛋白表达;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测MCs炎性因子水平;细胞计数试剂盒8(CCK-8)测定MCs活力;Annexin-V FITC/PI双染法检测MCs凋亡情况。结果:与对照组相比,狼疮性肾炎组24 h尿蛋白含量、血清BUN和Scr水平显著升高(P<0.05);与MCs组相比,L-EMO组、MEMO组、H-EMO组miR-96-5p的表达量、白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平、A450值、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白水平依次显著下降(P<0.05),FOXK2水平、细胞凋亡率、Bcl-2相关的X基因(Bax)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved-Caspase-3)蛋白水平依次显著升高(P<0.05),大黄素作用效果呈现剂量依赖性;与H-EMO组、H-EMO+miR-96-5p-NC组相比,H-EMO+miR-96-5p-minic组显著升高miR-96-5p的表达量、炎性因子水平、A450值以及Bcl-2蛋白水平(P<0.05),显著降低FOXK2水平以及细胞凋亡率(P<0.05)。结论:大黄素通过下调miR-96-5p进而上调FOXK2,从而减轻狼疮性肾炎MCs损伤。

罗非鱼头蛋白质的提取及性质研究

以罗非鱼头为原料,采用加热浸提、酶法水解、酸/碱溶解-等电点沉淀法提取鱼蛋白,冷冻干燥得到4种鱼蛋白粉,分别记为热提鱼蛋白(HFP)、酶解鱼蛋白(EFP)、酸溶鱼蛋白(AFP)和碱溶鱼蛋白(ALFP),并探讨了4种鱼蛋白的营养特性、溶解性和乳化性。结果表明:ALFP和AFP的蛋白含量分别为89.97%和85.87%,必需氨基酸占总氨基酸的比例达到49.72%和48.63%,而脂肪和灰分含量以及白度值均低于HFP和EFP,且差异显著(P<0.05)。溶解性和乳化性的研究显示,EFP和HFP在pH 2.0～10.0内溶解度均高于93%,但体系的乳化活性和稳定性较差;而AFP和ALFP的溶解度随pH值的变化非常明显,在pH 4.0～6.0内,体系的溶解性和乳化性极差,而在pH值低于4.0或高于6.0时,溶解度大大增强,乳化活性和乳化稳定性随之提高,且乳化活性和稳定性明显高于HFP和EFP。酸/碱溶解-等电点沉淀法可用于制备营养价值高,乳化特性相对较好的鱼分离蛋白。

鱿鱼头蛋白酶水解物的抗氧化活性

采用Flavourzyme500MG蛋白酶对鱿鱼头蛋白进行酶解，制备不同水解度的水解物并测定水解物的抗氧化活性，分析鱿鱼头蛋白水解物的水解度与其抗氧化活性的相关性。结果表明：在水解度为0～39．80％范围内，随着水解度的逐渐升高，鱿鱼头蛋白酶水解物多肽含量和游离氨基酸总量逐渐增加，超氧阴离子自由基清除能力、DPPH自由基清除能力、羟自由基清除能力、还原能力、抗氧化能力和亚铁离子螯合能力逐渐升高；在水解度为39．80％时，酶水解物多肽含量和游离氨基酸总量分别为12．97mg／mL和4．49mg／mL，上述抗氧化活性指标均为最高，分别为40．04％、32．72％、45．40k、1．449、0．697mg／mL和43．34％。表明鱿鱼头蛋白酶水解物具良好抗氧化作用，有着重要的应用价值。

乏氧对人口腔鳞状细胞癌细胞中叉头蛋白P3表达的影响及其机制

目的:观察乏氧对人口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞中叉头蛋白P3(FOXP3)表达的影响,阐明乏氧调控FOXP3表达的表观遗传学机制。方法:选取人OSCC细胞株FaDu和OECM-1细胞,常氧和乏氧条件下培养18h。采用实时定量PCR方法检测细胞中FOXP3mRNA的相对表达水平,Western blotting法检测FaDu和OECM-1细胞中FoxP3蛋白表达水平,染色质免疫沉淀-定量PCR(ChIP-qPCR)法检测FOXP3基因启动子上组蛋白修饰H3K4乙酰化(H3K4ac)、H3K4三甲基化(H3K4me3)和H3K27三甲基化(H3K27me3)水平。采用组蛋白去乙酰化酶3(HDAC3)基因沉默的FaDu细胞,以实时定量PCR和ChIP-qPCR法检测FaDu细胞中HDA3mRNA相对表达水平和FOXP3mTNA表达抑制率。结果:与常氧条件比较,乏氧条件下FaDu和OECM-1细胞中FOXP3 mRNA相对表达水平均明显降低,分别下降65.6%(P<0.01)和75.7%(P<0.01);Western blotting检测,乏氧条件下FaDu和OECM-1细胞中FOXP3蛋白表达水平明显低于常氧条件下;染色质免疫沉淀实验,与常氧条件比较,乏氧条件下FaDu细胞中FOXP3基因启动子上的H3K4ac和H3K4me3水平明显降低(P<0.01),而H3K27me3水平无明显差异。与无HDAC3基因沉默的FaDu细胞比较,HDAC3基因沉默的FaDu细胞中缺氧诱导的FOXP3启动子上H3K4ac和H3K4me3表达抑制率明显降低(P<0.05),缺氧诱导的FOXP3mRNA相对表达抑制率降低(P<0.05)。结论:乏氧可通过HDAC3介导的FOXP3基因启动子上H3K4ac水平下调而抑制OSCC细胞中FOXP3的表达。

滋养干细胞转录因子叉头蛋白D3过表达在人绒癌细胞株JAR的恶性生物学特性中的作用研究（英文）

背景:绒毛膜细胞癌是一种具有高度侵袭能力的滋养细胞肿瘤。叉头蛋白D3作为胚胎干细胞和滋养干细胞的转录因子,在胚胎发生、肿瘤发生和进展等很多生理、病理状态下发挥着重要作用。目的:研究叉头蛋白D3在绒毛膜细胞癌恶性生物学特性中的作用及可能作用机制。方法:利用短发夹RNA干扰叉头蛋白D3在人绒毛膜细胞癌细胞株JAR中的表达,体外细胞增殖、迁移/侵袭实验检测JAR的细胞功能学改变,体内动物成瘤实验检测肿瘤生长情况。Agilent转录表达芯片初筛叉头蛋白D3调控下游基因并通过定量实时PCR验证。结果与结论:与原代培养的正常妊娠滋养细胞相比,绒癌细胞株JAR中叉头蛋白D3的转录和蛋白水平表达均显著增高。短发夹RNA干扰叉头蛋白D3表达抑制了体外JAR的细胞增殖、迁移和侵袭功能,同时抑制了裸鼠体内肿瘤的生长,降低了肿瘤细胞β-人绒毛膜促性腺激素分泌。通过初筛和后期验证,发现7个受叉头蛋白D3调控的局部黏附分子(ITGA5,ITGB6,THBS4,COL6A3,VTN,NRXN3和NLGN1),同时短发夹RNA干扰叉头蛋白D3表达后,JAR细胞内局部黏附激酶活性降低。提示过表达的叉头蛋白D3通过调控局部黏附分子表达和局部黏附激酶活性进而增强JAR的恶性生物学特性。

CXC趋化因子受体4和叉头蛋白3基因蛋白及mRNA在儿童纵隔神经母细胞瘤SK-N-SH和LAN-5细胞中的表达及环磷酰胺对其的影响

目的观察环磷酰胺对儿童纵隔神经母细胞瘤LAN-5和SK-N-SH细胞CXC趋化因子受体4(CXCR4)和叉头蛋白3(Foxp3)表达的影响。方法采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)法检测CXCR4和Foxp3基因mRNA的相对表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪分析CXCR4和Foxp3基因的表达。结果CXCR4和Foxp3在LAN-5和SK-N-SH细胞高表达;环磷酰胺对LAN-5和SK-N-SH细胞的IC50分别为6.5μmol/L和3.9μmol/L;环磷酰胺显著降低了LAN-5细胞表面CXCR4基因蛋白的表达(P<0.01),也显著降低了SK-N-SH细胞CXCR4 mRNA的表达(P<0.05),同时环磷酰胺显著下调Foxp3基因蛋白(P<0.05)和Foxp3 mRNA(P<0.01)在LAN-5细胞的表达。结论 CXCR4和Foxp3可能为神经母细胞瘤化疗的潜在靶点。

鞘内给予外源性头蛋白对缓解神经病理性疼痛的作用

目的:观察鞘内给予外源性头蛋白(noggin,NOG)对腰5脊神经结扎(L5 spinal nerve ligation,SNL)致神经病理性疼痛(neuropathic pain,NP)大鼠疼痛行为学的影响,并同时检测NOG对脊髓内星形胶质细胞活性、炎性因子及下游信号的调控作用。方法:40只雄性Sprague Dawley大鼠随机分为空白对照组(n=10)、SNL组(暴露并结扎L5脊神经+鞘内给予人工脑脊液,n=15)和SNL+NOG组(暴露并结扎L5脊神经+鞘内给予NOG,n=15)。使用Von-Frey测痛纤维检测手术前1天及术后第1,4,7,14天每组大鼠后足机械缩足阈值(paw withdrawal threshold,PWT)的改变;应用免疫荧光法观察各组大鼠术后第7天脊髓背角处星形胶质细胞的激活情况;应用蛋白质印迹法观察各组大鼠术后第7和14天脊髓内胶质细胞原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、转录信号转导剂和激活剂-3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)以及磷酸化STAT3(p-STAT3)的表达。结果:与空白对照组相比,SNL组术后各时点PWT均明显下降,同时伴有脊髓腰膨大处GFAP、IL-6的表达及p-STAT3/STAT3的比率明显升高(均P<0.05);与SNL组相比,SNL+NOG组在术后第4天出现PWT上升(P<0.05),并维持至术后第14天,且同时伴有脊髓腰膨大内GFAP、IL-6的表达及p-STAT3/STAT3比率显著降低(均P<0.05)。结论:鞘内给予外源性NOG能够缓解SNL大鼠痛觉过敏的症状,这与降低星形胶质细胞活性、减轻IL-6的表达以及下调STAT3信号通路的激活有关。

乳腺癌组织中叉头蛋白F1表达与乳腺癌临床生物学参数及预后的关系

目的探讨乳腺癌组织中叉头蛋白F1(FOXF1)表达,以及其与乳腺癌临床生物学参数、预后的关系。方法利用免疫组织化学法检测139对乳腺癌组织和对应癌旁组织中FOXF1、钙黏附蛋白E(E-cadherin)和钙黏附蛋白N(N-cadherin)的表达,并分析不同临床生物参数的乳腺癌组织中FOXF1的表达阳性率,以及FOXF1表达对患者预后的影响。结果乳腺癌组织中的FOXF1、E-cadherin阳性表达率分别为28.8%和33.8%,均低于癌旁组织的80.6%和79.1%,乳腺癌组织中的N-cadherin阳性表达率为31.6%,高于癌旁组织的10.8%,差异均有统计学意义(P<0.05)。不同肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期的乳腺癌组织中,FOXF1的阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。FOXF1阴性乳腺癌患者的总体生存率(72.73%)低于FOXF1阳性乳腺癌患者的总体生存率(95.00%),差异有统计学意义(χ~2=8.113,P=0.004)。FOXF1阴性乳腺癌患者的无复发生存率(63.64%)低于FOXF1阳性乳腺癌患者的无复发生存率(95.00%),差异有统计学意义(χ~2=4.396,P=0.036)。结论 FOXF1在乳腺癌组织中低表达,其低表达可能与肿瘤增殖、转移、患者预后有关。

叉头蛋白M1在膀胱癌和腺性膀胱炎中的表达及临床意义

目的:探讨叉头蛋白(Fox)M1受体在膀胱癌和腺性膀胱炎(CG)中的蛋白和m RNA表达水平及其临床意义。方法:用免疫组化和实时荧光PCR检测33例CG,43例膀胱癌(28例低级别和15例高级别)和14例正常膀胱黏膜中Fox M1表达。结果:Fox M1在膀胱癌和CG的蛋白与m RNA表达均明显高于正常膀胱黏膜,在高级别膀胱癌中表达最高。结论:Fox M1表达上调在促进膀胱上皮和膀胱癌细胞增殖,抑制其凋亡以及在CG恶变的病理演化中可能起到转录调节的作用。

叉头蛋白3蛋白表达与胃癌腹膜转移的关系

目的探讨胃癌组织中叉头蛋白3(Foxp3)蛋白表达与胃癌腹膜转移的关系。方法应用鼠抗人Foxp3单克隆抗体和免疫组织化学SP染色法检测65例同期伴腹膜转移的胃癌患者的癌旁正常胃黏膜、胃癌原发灶、胃癌腹膜转移灶及淋巴结转移灶中Foxp3蛋白的表达水平。结果胃癌原发灶、胃癌腹膜转移灶及淋巴结转移灶组织中Foxp3蛋白呈强表达,阳性表达率分别为78.5%(51/65)、80.0%(52/65)和88.6%(39/44);胃癌旁正常胃黏膜组织中Foxp3蛋白表达很弱,阳性表达率为20.0%(13/65)。正常胃黏膜组织中Foxp3蛋白阳性表达率显著低于胃癌原发灶、腹膜转移灶及淋巴结转移灶组织(P值均<0.05),后3者间的差异无统计学意义(P值均>0.05)。Foxp3蛋白的阳性表达率与年龄、性别不相关(P值均>0.05),而与组织分化程度呈负相关(r=-0.301,P=0.023),与有无淋巴结转移呈正相关(r=0.358,P=0.004)。结论胃癌病灶中的Foxp3蛋白可能成为术前判断胃癌是否发生腹膜转移及判断预后的生物学指标。

叉头蛋白3对肺腺癌细胞增殖和化疗药物顺铂敏感性的影响

目的:观察叉头蛋白3(FOXP3)在人肺腺癌组织中的表达及其对肺腺癌细胞增殖和顺铂敏感性的影响,阐明肺腺癌细胞对顺铂耐药的相关机制。方法:收集肺腺癌患者术后石蜡标本50例和正常肺组织10例。免疫组织化学染色方法检测肺腺癌组织和正常肺组织中FOXP3和Ki-67的表达,分析肺腺癌组织和正常肺组织中FOXP3阳性表达率的差异,Pearson相关分析法分析FOXP3和Ki-67表达的相关性。选取对数生长期的人肺腺癌A549细胞进行siRNA转染,将A549细胞分为Mock组(转染脂质体)、Control-siRNA组(转染Control-siRNA)和FOXP3-siRNA组(转染FOXP3-siRNA)。RT-qPCR法检测各组A549细胞中FOXP3 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组A549细胞中FOXP3蛋白表达水平,CCK-8法检测各组A549细胞增殖活性及不同浓度(0、0.63、1.25、2.50和5.00 mg·L^-1)顺铂作用后各组A549细胞生长抑制率,RT-qPCR和Western blotting法检测顺铂作用后各组A549细胞中FOXP3 mRNA和蛋白表达水平。结果:FOXP3在肺腺癌和正常肺组织的阳性表达率分别为62.0%和13.3%,组间比较差异有统计学意义(P<0.05);FOXP3和Ki-67在肺腺癌组织中表达呈正相关关系(r=0.370,P<0.01);FOXP3-siRNA组A549细胞中FOXP3 mRNA和蛋白表达水平均明显低于Mock组和Control-siRNA组(P<0.01);顺铂作用48和72 h后,FOXP3-siRNA组A549细胞增殖活性明显低于Mock组和Control-siRNA组(P<0.05);1.25、2.50和5.00 mg·L^-1顺铂作用后,FOXP3-siRNA组A549细胞生长抑制率均高于Mock组和Control-siRNA组(P<0.05);1.25和2.50 mg·L^-1顺铂组A549细胞中FOXP3 mRNA和蛋白表达水平均明显高于0 mg·L^-1顺铂组(P<0.05)。结论:沉默FOXP3可抑制肺腺癌细胞的增殖,增加肺腺癌细胞对顺铂的敏感性。

加热过程中虾头蛋白变性程度的表征方法比较

为选择适合虾头蛋白变性程度的表征方法,本研究以虾头中提取的混合蛋白为材料,在100℃下加热处理一定时间,通过溶解度法、SDS-PAGE法、圆二色谱法、荧光光谱法等定量表征蛋白质变性程度并比较。研究结果表明:溶解度法、SDS-PAGE法、圆二色谱法、荧光光谱法在表征加热过程中虾头蛋白变性程度上具有一致性,不同浓度的虾头蛋白在加热过程中变性程度都呈S型上升趋势,但在加热1~4 min之间变性速率存在差异,其中蛋白溶解度的变性程度对加热时间的灵敏度最为显著。这表明选择溶解度作为表征虾头蛋白变性程度的方法更加便捷。研究结果为食品加工过程中表征蛋白变性程度提供了方法参考。

叉头蛋白3在鼻咽非角化性鳞状细胞癌组织中的表达及意义

目的观察叉头蛋白3(FoxP3)在鼻咽非角化性鳞状细胞癌中的表达情况,以探讨调节性T(Treg)细胞在鼻咽癌发生、发展中的意义。方法通过免疫组织化学(SP)法检测FoxP3在57例鼻咽非角化鳞状细胞癌和22例鼻咽部黏膜慢性炎症中的表达情况及CD8在鼻咽癌中的表达。结果在鼻咽癌组中FoxP3阳性Treg细胞数(105.05±52.22)显著高于鼻咽部黏膜慢性炎症(6.35±6.06),二者的差异有统计学意义(P<0.05)。FoxP3阳性Treg细胞的数量与患者性别及肿瘤分化程度有关(P<0.05)。结论在鼻咽非角化鳞状细胞癌中,FoxP3阳性Treg细胞的增殖可能抑制机体的抗肿瘤免疫功能,并为肿瘤细胞的免疫逃逸提供良好的环境。

头蛋白shRNA和骨形态发生蛋白2的协同作用对骨髓间充质干细胞成骨能力的影响

目的:观察头蛋白shRNA和骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP-2)的协同作用对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨能力的影响。方法:分离、培养兔BMSCs,分为头蛋白shRNA基因干扰组、BMP-2过表达组、双基因转染组。构建慢病毒头蛋白shRNA干扰载体和BMP-2过表达载体。头蛋白shRNA基因干扰组、BMP-2过表达组分别加入头蛋白shRNA基因干扰载体和BMP-2过表达载体,双基因转染组同时加入头蛋白shRNA基因干扰载体和BMP-2过表达载体,进行基因转染。基因转染成功后,采用荧光定量PCR检测3组BMSCs中头蛋白和BMP-2的mRNA相对表达量,采用茜素红染色和碱性磷酸酶染色检测3组BMSCs的诱导成骨能力。结果:①细胞培养和基因转染鉴定结果。流式细胞仪检测第2代培养细胞,CD44和CD29表达分别为61.3%和57.2%,CD34和CD45表达分别为3.6%和2.4%,符合BMSCs表型特征。基因转染72 h后,3组BMSCs的转染率为(92.5±2.5)%,基因转染成功。②头蛋白和BMP-2 mRNA表达检测结果。基因转染成功后,3组细胞中头蛋白mRNA相对表达量的组间总体比较,差异有统计学意义(0.343±0.124,1.040±0.269,0.123±0.057;F=22.390,P=0.002);BMP-2过表达组较头蛋白shRNA基因干扰组和双基因转染组高(P=0.016,P=0.005),头蛋白shRNA基因干扰组和双基因转染组的组间差异无统计学意义(P=0.054)。3组细胞中BMP-2 mRNA相对表达量的组间总体比较,差异有统计学意义(1.120±0.363,3.667±0.431,4.833±0.475;F=59.680,P=0.000)。双基因转染组较头蛋白shRNA基因干扰组和BMP-2过表达组高(P=0.000,P=0.035),BMP-2过表达组高于头蛋白shRNA基因干扰组(P=0.001)。③茜素红和碱性磷酸酶染色结果。茜素红染色可见胞浆边缘呈现不透光的矿化结节。3组细胞茜素红染色阳性率的组间总体比较,差异有统计学意义[(62.317±3.969)%,(39.267±2.170)%,(72.320±4.133)%,F=68.870,P=0.000];双基因转染组高于头蛋白shRNA基因干扰组和BMP-2过表达组(P=0.039,P=0.000),头蛋白shRNA基因干扰组高于BMP-2过表达组(P=0.001)。碱性磷酸酶染色细胞内呈现灰黑色颗粒或块状沉淀。3组细胞碱性磷酸酶染色阳性率组间总体比较,差异有统计学意义[(55.157±9.959)%,(35.353±6.494)%,(82.337±10.594)%,F=19.750,P=0.002];双基因转染组高于头蛋白shRNA基因干扰组和BMP-2过表达组(P=0.032,P=0.003),头蛋白shRNA基因干扰组高于BMP-2过表达组(P=0.045)。结论:头蛋白shRNA和BMP-2的协同作用可以强化BMSCs的成骨能力。

叉头蛋白p3基因rs3761548多态性与1型糖尿病的相关性

目的探讨川北地区汉族人群调节性T细胞(Treg)转录因子叉头蛋白p3(Foxp3)基因rs3761548多态性与经典1型糖尿病(T1DM)的相关性。方法回顾性分析2012年4月~2020年9月我院内分泌科收治的180例经典T1DM患者(T1DM组)及同期本地186名无血缘关系的我院健康体检者(对照组)为研究对象。利用聚合酶链反应和质谱法对Foxp3基因rs3761548位点进行基因分型。酶法检测空腹血糖(FPG)、餐后2小时血糖(2 h PG)、血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C);化学发光法检测空腹C肽(FCP)、餐后2小时C肽(2 h CP);液相色谱法检测糖化血蛋白A_(1c)(HbA_(1c))。结果Treg细胞转录因子Foxp3基因rs3761548多态性位点等位基因频率和基因型频率分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律。rs3761548多态位点A等位基因频率为18.7%。T1DM组和对照组之间rs3761548多态位点A等位基因的频率差异无统计学意义(19.2%vs 18.3%,P>0.05)。T1DM患者rs3761548多态位点A等位基因携带者的LDL-C水平更高,而FCP、2 h CP水平更低(P<0.05)。结论Foxp3基因rs3761548多态性A等位基因与川北地区汉族T1DM患者LDL-C水平及FCP、2 h CP水平密切相关。

程序性死亡受体-配体1、叉头蛋白3、趋化因子配体22和人乳头瘤病毒在宫颈病变免疫微环境调节中的表达特征

目的探讨程序性死亡受体-配体1(PD-L1)、叉头蛋白3(FoxP3)、趋化因子配体22(CCL22)和人乳头瘤病毒(HPV)在宫颈病变免疫微环境调节中的表达特征。方法选取2020年1月至2021年12月于上饶市人民医院手术切除的28份宫颈癌癌组织、17份宫颈上皮内瘤样变(CIN)的宫颈上皮内瘤样变组织、15份子宫肌瘤而无宫颈病变进行全子宫切除术的组织标本作为研究对象。分析组织标本中PD-L1、FoxP3、CCL22和HPV的阳性表达率。结果宫颈癌组织中PD-L1、FoxP3、CCL22表达量均高于宫颈上皮内瘤组织,宫颈上皮内瘤组织高于正常组织,差异有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌组织HPV阳性率与宫颈上皮内瘤组织比较差异无统计学意义。宫颈癌组织、宫颈上皮内瘤组织HPV阳性率均高于正常组织,宫颈癌组织HPV阳性率高于宫颈上皮内瘤组织,差异有统计学意义(P<0.05)。结论宫颈癌组织高表达FOXP3蛋白、PD-L1、CCL22,检测上述指标能为判断HPV感染和宫颈病变及癌变预后提供新的参考依据。

β-淀粉样蛋白对叉头蛋白O3a和突触后致密蛋白95的影响

【目的】为了研究β-淀粉样蛋白(Aβ)产生神经毒性的机制,本研究探讨了Aβ对凋亡相关核转录因子叉头蛋白O3a(FoxO3a)和突触后致密蛋白95(PSD95)的作用及可能的机制。【方法】采用梯度浓度(5、10、20μmol/L)寡聚化的Aβ25-35处理PC12细胞和神经元24 h,采用Westernblot法检测FoxO3a和PSD95的变化。免疫荧光法检测PC12细胞中PSD95表达量的变化和FoxO3a在细胞内的定位。在Aβ25-35海马注射的大鼠和APP/PS1转基因鼠中,考察脑组织中PSD95和FoxO3a的变化。采用WesternBlot法检测体外环境和在体环境中,Aβ对FoxO3a和蛋白激酶B(AKT)磷酸化的影响。【结果】与正常对照组相比,20μmol/L的Aβ25-35处理组PSD95蛋白水平下调至(45.09±1.61)%(F=7.487,P=0.0540)。与之对应,20μmol/L的Aβ25-35上调FoxO3a的蛋白水平为对照组的(228.7±20.44)%(F=17.48,P=0.0210)。在原代培养的神经元中,获得了相似的结果。另外,免疫荧光的结果显示Aβ25-35可以促进FoxO3a进入细胞核。大鼠海马注射Aβ25-35后,水迷宫实验中目标区域的平均停留时间为(24.35±1.29)s(F=2.843,P=0.098),平均穿越次数为(2.53±0.49)次(F=3.459,P=0.0149),与对照组相比都显著降低。RT-PCR结果显示Aβ25-35组大鼠海马组织中PSD95的mRNA水平下降为对照组的(58.40±8.28)%(F=1.193,P=0.0101),同时FoxO3a的mRNA的表达量上调(140.90±7.45)%(F=2.378,P=0.0496)。在7月龄的APP/PS1转基因小鼠的大脑组织中,PSD95的mRNA和蛋白水平分别下调为野生型小鼠的(60.89±1.53)%(F=20.05,P=0.0088)和(59.63±13.55)%(F=8.496,P=0.0445),而FoxO3a的mRNA和蛋白水平则分别上调为对照组的(172.4±4.87)%(F=2.351,P=0.0004)和(235.00±39.03)%(F=2.754,P=0.0320)。20μmol/L的Aβ25-35处理PC12细胞不同时间后(5、10、20和40 min),FoxO3a和AKT的磷酸化水平随着时间增长而降低,APP/PS1转基因小鼠脑组织中的AKT和FoxO3a的磷酸化水平与对照组相比也显著下降至(65.75±3.51)%(F=6.362,P=0.0236)和(46.62±9.64)%(F=8.562,P=0.0079)。【结论】Aβ在体外细胞模型和体内动物模型中都可以上调核转录因子FoxO3a的表达,下调PSD95的水平,可能的机制是通过去磷酸化AKT从而减少了PSD95的合成,同时降低了FoxO3a的磷酸化水平并增加FoxO3a的表达量。

叉头框蛋白O3a在失神经肌萎缩中的研究进展

骨骼肌失神经后,肌纤维直径和横截面积减小,导致肌肉质量下降。实验证明,叉头框蛋白O3a(FoxO3a)作为叉头框转录因子亚家族O重要成员之一,对失神经肌萎缩有着重要的调节作用。本文从FoxO3a的结构和功能、上游翻译后修饰和下游靶基因的调控方面,阐述其作为重要的治疗靶点在失神经肌萎缩中的重要意义,旨在未来延缓失神经肌萎缩方面提供精准的理论依据并寻求新的靶点和治疗方法。

CC类趋化因子22、叉头框蛋白P1在急性髓系白血病外周血中的表达及对预后的预测价值

目的探讨急性髓系白血病(AML)病人外周血中CC类趋化因子22(CCL22)、叉头框蛋白P1(FOXP1)表达水平及其预后预测价值。方法选择2018年5月至2019年5月在孝感市中心医院、华中科技大学医学院附属同济医院及咸宁市中心医院确诊的68例AML病人设为观察组,另取同期健康体检者68例作为对照组,采用酶联免疫法测定外周血CCL22,FOXP1表达水平,分析其与临床特征的关系;采用Pearson法分析AML病人外周血中CCL22,FOXP1表达的相关性;采用Kaplan-Meier生存分析法分析CCL22,FOXP1表达与总体生存时间(OS)的关系;采用Cox比例风险回归模型分析病人预后死亡的影响因素。结果与对照组相比,观察组CCL22[(600.27±62.89)ng/L比(756.84±100.86)ng/L],FOXP1[(56.02±13.68)ng/L比(103.06±22.16)ng/L]表达均明显升高(t=10.86,14.90,均P<0.05);CCL22,FOXP1表达水平与AML病人年龄、性别、染色体预后、血红蛋白(HGB)、血小板计数(PLT)、FMS样酪氨酸激酶3-内部串联重复基因(FLT3-ITD)、核仁磷酸蛋白基因1(NPM1)突变无关(χ^(2)=0.06~2.95,均P>0.05),与脾肿大、白细胞计数(WBC)有关(χ^(2)=5.90~8.59,均P<0.05);Pearson法分析结果显示,AML病人外周血中CCL22与FOXP1表达呈正相关(r=0.27,P<0.05);Kaplan-Meier法分析结果显示,AML病人外周血CCL22,FOXP1高表达组3年生存率均低于低表达组(47.06%比70.59%,44.12%比73.53%)(χ^(2)=6.50,P<0.05);多因素logistic回归分析结果显示,CCL22,FOXP1是影响AML病人预后的独立危险因素(P<0.05)。结论CCL22,FOXP1在AML病人外周血中呈高表达,CCL22,FOXP1高表达组病人3年生存率均低于低表达组,二者有望成为AML病人预后评估的分子标志物。