双抗体夹心酶联免疫吸附法检测鱼糜制品中鸡蛋卵白蛋白

目的建立双抗体夹心酶联免疫吸附(sandwich enzyme linked immunosorbent assay,sELISA)法检测鸡蛋卵白蛋白(ovalbumin,OVA)的方法,组装定量检测鱼糜制品中OVA含量的ELISA检测试剂盒。方法确定各步骤反应时间,使用棋盘法确定捕获抗体和检测抗体的最佳工作浓度,建立检测方法并对其性能进行评价。结果反应最佳条件为:抗原孵育20 min,检测抗体孵育20min,酶促反应显色10 min。兔抗OVA抗体为捕获抗体,工作质量浓度为1μg/mL,辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记兔抗OVA抗体为检测抗体,1:5000(V:V)稀释。采用四参数逻辑曲线拟合标准曲线,所建立sELISA方法的检测范围为8.5~200.0 ng/mL,检出限为3.5 ng/mL,定量限为8.5 ng/mL。批次内和批次间的变异系数分别为2.31%~4.58%和6.06%~12.23%;鱼糜基质中的回收率为80%~130%;测得28种常见食物样品中4种样品的交叉反应率小于0.002%;试剂盒在4℃保存6个月期间,标准品检测结果的变异系数为4.29%~18.91%。结论建立的方法快速、灵敏、准确、稳定性好,可用于鱼糜制品中鸡蛋OVA的定量检测。

双夹心化学发光法降钙素原定量检测系统的测定效果分析

目的:评估双夹心化学发光免疫试剂盒检测降钙素原(procalcitonin,PCT)的性能。方法:收集如东县人民医院临床标本,参照美国临床实验室标准化协会(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)文件或行业标准,对夹心化学发光免疫试剂盒检测PCT的精密度、线性、方法学比对、可报告范围、正确度、抗干扰能力进行评估,同时进行参考区间初步验证。结果:精密度验证结果显示,高值、中值和低值标本批内精密度的变异系数分别为1.07%、1.60%和1.93%,批间精密度的变异系数为1.30%、2.97%和4.19%,均符合实验要求;线性验证试验结果显示,线性范围为0.02~95.54 ng/mL,在检测范围内具有良好的线性关系(R2=0.9982);方法学比对结果显示,双夹心化学发光免疫试剂盒(迈瑞)与酶联免疫荧光法分析系统的PCT试剂盒(梅里埃)检测结果一致性良好(R2=0.9919);正确度验证结果显示,检测值相对偏差分别为-2.56%、-0.81%,符合实验要求;可报告范围验证结果显示,回收率为104.41%~111.79%,临床可报告范围为0.02~764.32 ng/mL;20例健康体检者PCT结果均在正常参考区间范围内。结论:双夹心化学发光免疫试剂盒检测PCT的精密度、线性、方法学比对、可报告范围、正确度等分析性能较好,参考区间也符合实验室质量要求,可用于临床标本检测。

匹拉米洞半定量检测法与双抗体夹心法检测粪便隐血的比较

目的探讨FOBpsm和IFOB两种方法检测粪便隐血的灵敏度和特异性及抗干扰能力。方法分别采用两种方法分别对512例消化科患者标本进行隐血检测,同时测定已知Hemoglobin,Hb的红细胞悬液以及在粪便中加入动物血、菠菜、铁剂、铋剂、维生素C等干扰物质对两种方法检测的灵敏度、特异性、检测上、下限以及抗干扰能力进行分析。结果FOBpsm的阳性率为44.1%,IFOB的阳性率为77.7%,P<0.005,差异具有统计学意义。FOBpsm检测Hb的浓度范围:20μg/mL>100mg/mL。IFOB检测Hb的浓度范围:1μg/mL~10mg/mL。IFOB检测加入各种干扰物质的粪便标本时均能准确排除干扰,FOBpsm则出现假阳性或假阴性结果。结论IFOB的灵敏度、特异性及抗干扰能力均优于FOBpsm。但是,FOBpsm能够避免钩状效应,两种方法应互相应用弥补方法学的不足。

双抗夹心酶免疫检测法快速鉴定天花粉真伪的研究

目的:以天花粉蛋白(TCS)为定性检测指标,建立快速鉴定天花粉药材真伪的方法。方法:以TCS为免疫抗原分别免疫新西兰大耳兔及Bal b/c雌性小鼠,收集免疫后的兔血清;通过杂交小鼠骨髓瘤细胞技术制备抗TCS的单克隆抗体。利用多克隆抗体和单克隆抗体建立检测TCS的双抗夹心酶免疫检测方法,并通过棋盘格法优选最佳反应条件。将所建立的方法实测不同产地天花粉药材及其混伪品,利用药材吸光值(A)与空白对照吸光值(A_(0))之比作为药材真伪评判指标。结果:所建立的双抗夹心酶免疫检测方法最佳反应条件为:兔血清稀释倍数为500倍、单克隆抗体浓度为1.0μg/mL、酶标二抗浓度为2μg/mL。通过对真实样品的检测,发现天花粉正品吸光值明显高于混伪品,且正品天花粉A/A_(0)>2.0,混伪品A/A_(0)<2.0。结论:所建立的TCS双抗夹心酶免疫检测方法可实现天花粉真伪的快速鉴别,且样品处理简单、检测效率高,具有推广应用价值。

人C-反应蛋白磁微粒化学发光酶免疫测定法的建立

人C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)是炎症以及各种相关疾病如病毒感染、心血管疾病等诊断、治疗和预后的临床检测指标。为了建立一种快速、准确的CRP定量免疫测定方法,将表达纯化的重组CRP作为抗原免疫小鼠,获得了5株稳定分泌抗体的单克隆抗体细胞株,采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法(double antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay,DAS-ELISA)初步鉴定筛选的抗人CRP单克隆抗体,并分别选择mAb 9D6和mAb 9G4作为捕获抗体与检测抗体,建立用于人CRP检测的化学发光酶免疫测定法(chemiluminescence enzyme immunoassay,CLEIA),最后通过测定分析临床血清CRP样本,评价CLEIA的性能。结果显示,基于9D6/9G4-AP单克隆抗体对的CLEIA测定范围为0.1767~500μg/L(可扩展至100 mg/L);所建立的CLEIA与医院采用的免疫散射比浊法(R^(2):0.9496,P<0.0001)表现出良好的相关性,且Bland-Altman分析中96.36%(106/110)的点在95%一致性界限范围内显示两种检测方法具有较好的一致性。结果初步表明,建立的分析方法在临床诊断中具有较好的应用前景。

甲型肝炎病毒抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法的建立及验证

目的:建立快速检测甲型肝炎病毒(HAV)抗原含量的双抗体夹心ELISA方法,并进行验证及初步应用。方法:用HAV多克隆抗体和HAV单克隆抗体酶结合物建立双抗体夹心ELISA法,检测HAV抗原含量。对建立的方法进行特异性、线性(标准曲线)、准确度、精密度、灵敏度验证,对不同生产厂家生产的HAV疫苗(人二倍体细胞)与不同工艺阶段的HAV疫苗(人二倍体细胞)中间产品进行适用性检测。结果:HAV多克隆抗体的最佳包被浓度为8μg/mL,酶标抗体最佳稀释度为1∶10 000,封闭剂为1%BSA。该方法与其他人用疫苗和辅料成分无交叉反应;线性范围0.546 875~17.500 000 IU/mL,R^(2)> 0.99;准确度验证回收率80.1%~123.7%;精密度验证变异系数<8.3%。检测不同厂家的HAV疫苗(人二倍体细胞)和不同工艺阶段的HAV疫苗(人二倍体细胞)中间产品呈良好的剂量依赖效应。结论:建立了适用于HAV抗原含量检测的双抗体夹心ELISA方法,符合定量检测的需求,可用于不同毒株生产的HAV疫苗(人二倍体细胞)检测,可用于甲肝病毒收获液、浓缩液、纯化液、灭活液及原液等不同工艺阶段样品检测。

三种Dot-ELISA法检测Bt杀虫蛋白的研究

运用3种Dot—ELISA法对提纯的Bt杀虫蛋白进行检测，结果表明：直接法Dot—ELISA的最低可检测值为4．06～8．13ng，夹心法Dot—ELISA的最低可检测值为8．13ng，间接法Dot—ELISA（AKP—IgG）的最低可检测值为2．03ng，间接法Dot—ELISA（HRP—IgG）的最低可检测值为2．03～4．06ng。三者相比，以间接法Dot—ELISA的效果较好。

酶联免疫双抗原夹心法检测HCV抗体的应用与分析

目的通过对第四代双抗原夹心法HCV抗体检测试剂进行系列验证以及与第三代间接法HCV抗体检测试剂的平行比对,分析双抗原夹心试剂的检测性能。方法于2020年10月13日—2021年12月31日在淮安市中心血站用第四代试剂检测室内质控品、参考血清盘等样本,分析其重复性、批内和批间精密度以及敏感性和特异性等;运用第三代和第四代HCV抗体检测试剂平行检测同期无偿献血者标本等,比较其检测特异性和灵敏度。结果第四代试剂阴、阳性对照检测符合率100%;批内检测精密度4.36%,批间检测精密度6.88%;在确证试验结论为阳性的11例标本检测中,第四代试剂检测出9例,第三代试剂检测出3例,差异有统计学意义(χ^(2)=3.342,P<0.05);在确证试验结论为阴性的83237例标本中,第四代试剂检测假阳性12例,第三代试剂检测假阳性95例,差异有统计学意义(χ^(2)=32.238,P<0.05)。结论第四代双抗原夹心法HCV抗体检测试剂的重复性、灵敏度和特异性均明显高于第三代间接法HCV抗体检测试剂。

雪花形二维耦合振动夹心式压电超声换能器的设计

为了实现单个换能器的多方向超声辐射,提出了一种新型的雪花形二维耦合振动夹心式压电超声换能器,它由正六棱柱形金属块、6组压电陶瓷晶堆和6个金属盖板组成。基于耦合振动理论和力电类比原理建立了换能器等效电路模型,推导了其共振与反共振频率方程。通过等效电路法、有限元法和试验研究了换能器的二维耦合振动特性。结果表明:当压电陶瓷晶堆越靠近正六棱柱形金属块时,换能器的有效机电偶合系数越高;随着换能器轴向尺寸的增加纵向耦合共振频率降低;在纵向耦合共振模式下,换能器的6个输出端均可输出一致的纵向位移振幅;等效电路法、有限元仿真和试验测试取得了较为一致的结果。该研究结果为该类换能器的工程应用提供了简明设计理论,研究成果有望应用于多维超声加工、多向超声辐射等领域。

一种检测可溶性白细胞介素2受体夹心法ELISA的建立

采用两种识别不同表位的小鼠抗人白细胞介素2受体(IL-2R)单克隆抗体(McAb),在国内首次建立了检测可溶性IL-2R(sIL-2R)的夹心法ELISA,并进行了初步应用。结果显示:本法特异性强、敏感性高、重复性好、操作简便,能检出正常人、某些患者血清中以及细胞培养上清中sIL-2R,可用于基础和临床免疫学研究。

检测可溶性B7-H4 ELISA夹心法的建立

目的:建立定量检测可溶性B7-H4的ELISA夹心法。方法:采用抗人B7-H4单克隆抗体(mAb)包被酶标板,以兔抗鼠B7-H4多克隆抗体为夹心抗体、HRP标记羊抗兔IgG为检测抗体、重组小鼠可溶性B7-H4为标准品,建立检测可溶性B7-H4的间接ELISA法,并对50例正常人和37例术后乳腺癌患者血清样本进行了检测。结果:建立的夹心ELISA法检测B7-H4的线性范围为3.13μg/L^200μg/L,批内、批间变异系数分别为7.92%和11.1%。50例正常人和37例术后乳腺癌患者血清B7-H4的含量分别为(31.62±9.85)μg/L和(42.52±16.63)μg/L,两者比较差异有统计学意义(P<0.001)。结论:成功建立了一种灵敏度高、稳定性好的检测可溶性B7-H4的夹心ELISA法。

双抗夹心酶联免疫吸附法检测沙门氏菌

沙门氏菌是自然界中普遍存在的一种食源性致病菌,在中国的食物中毒中沙门氏菌引起的病例占第一位。本研究以福尔马林灭活的鼠伤寒沙门氏菌免疫雌性日本大耳兔,制备抗沙门氏菌多克隆抗体。以抗沙门氏菌多克隆抗体作为捕获抗体,以抗沙门氏菌单克隆抗体C1359作为检测抗体,建立快速检测沙门氏菌双抗夹心ELISA方法。结果表明:该方法可以检测A、B、C、D、E等五种典型的沙门氏菌,对沙门氏菌纯培养液的最低检测量为1×104CFU/mL,与其他杂菌不存在交叉反应,具有较好的灵敏性和特异性。

禽白血病病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立和标化

利用原核表达的禽白血病病毒(ALV)P27蛋白作为抗原制备的单抗作为包被抗体,以制的酶标兔抗P27作为酶标抗体,在国内首次建立了检测ALV抗原的双抗体夹心ELISA方法。该方法对禽白血病P27抗原的最小检出量为5 ng/mL,通过统计学试验证明自制的诊断试剂具有良好的特异性和稳定性。与IDEXX试剂盒的平行实验确定自制诊断试剂S/P>0.17为阳性判定标准。应用此方法对北京附近鸡场对抽样检测687份蛋清样品,检测结果与IDEXX的禽白血病抗原检测试剂盒符合率达到100%。

用夹心法化学发光免疫测定胰岛素

本文应用化学发光免疫测定法,以辣根过氧化物酶(HRP)标记抗体,采用夹心法,用鲁米诺-对碘苯酚-H_2O_2发光体系,测定0.0μU～30μU猪胰岛素,双对数标准曲线的相关系数为0.990,绝对检测限0.05μU,比国产胰岛素免放测定盒灵敏20倍。

双抗原夹心ELISA法检测马尔尼菲青霉Mp1p抗体

目的建立一种检测马尔尼菲青霉特异性抗体的双抗原夹心ELISA方法。方法利用毕赤酵母系统表达重组马尔尼菲青霉特异性甘露糖蛋白Mp1p,并利用改良过碘酸钠法标记Mp1p,经棋盘滴定法建立一种可检测马尔尼菲青霉Mp1p特异性抗体的双抗原夹心ELISA法,并检测100例健康人群对照血清、21例血培养确诊其他真菌感染病人血清和15例血培养确诊马尔尼菲青霉病人血清,联合本实验室前期建立的马尔尼菲青霉抗原检测方法评价其临床应用价值。结果成功建立一种检测马尔尼菲青霉Mp1p特异性抗体的双抗原夹心ELISA法,经健康人群对照及其他真菌感染病人血清评价特异度为100%(121/121),检测15例马尔尼菲青霉病人血清,Mp1p特异性抗体2例阳性,Mp1p特异性抗原12例阳性,Mp1p抗体与抗原联合检测可明显提高灵敏度,达到93.3%(14/15)。结论双抗原夹心ELISA法检测马尔尼菲青霉Mp1p特异性抗体具有高度的特异性,联合抗原检测可提高马尔尼菲青霉感染诊断率。

双抗体夹心ELISA法检测相思子毒素

目的:建立相思子毒素(abrin)的酶联免疫检测方法,为abrin临床诊断、中毒治疗、法医学鉴定等应用领域提供技术基础和参考依据。方法:采用双抗体夹心ELISA法来检测微量abrin。结果:该法检测abrin线性范围为0.25～125μg/L,线性回归方程为Y=0.51015X+0.4153(r=0.9880,n=10,P<0.0001),检测下限为0.25μg/L。不同浓度蓖麻毒素(ricin)、葡萄球菌肠毒素B(SEB)对检测结果基本无干扰。该法能用于abrin毒素污染水样、土样、食品、血液等模拟样品的分析,相对标准差为3.52%～4.86%,具有较好的重现性。结论:成功地建立了双抗体夹心ELISA法检测abrin,将多克隆抗体的强富集能力和单克隆抗体(mAb)的特异性结合起来,提高检测的灵敏度和特异性,可适用于各种微量abrin样品的分析。

双抗原夹心ELISA法检测HCV抗体在无偿献血中的应用探讨

目的探讨双抗原夹心ELISA法(简称夹心法)检测丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)在无偿献血中的应用。方法对42份以往一种或两种间接法抗-HCV反应性的献血者标本及2 831份无偿献血者标本同时采用一种夹心法和两种间接法试剂进行抗-HCV检测,对任一试剂检测为反应性的标本通过重组免疫印迹法(RIBA)作进一步确证。3种试剂检测均为阴性或RIBA结果为阴性判为真阴性,计算并对比各方法的特异性。结果 3种试剂检测均为阴性的标本2 816份,均为反应性的标本32份,双试剂反应性标本7份,单试剂反应性标本18份。采用RIBA试剂对57份反应性标本进行检测,确认结果阳性26份、不确定12份、阴性19份。19份RIBA确认阴性的标本中,双抗原夹心法、某国产间接法、某进口间接法分别有1例、8例、15例假阳性结果,特异性分别为99.96%(2 834/2 835)、99.72%(2 827/2 835)和99.47%(2 820/2 835)。结论夹心法诊断试剂的特异性高于间接法诊断试剂,为降低生物学假阳性,建议采用夹心法试剂检测抗-HCV。

应用ELISA双抗体夹心法检测猪细小病毒抗原的研究

研究建立了从胎猪脏器中检测猪细小病毒（ＰＰＶ）抗原的ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法。试验方法的最佳工作条件为，抗体浓度１：４００，酶标抗体浓度１：５０。５４份胎猪样品阳性检出率为５９．３％，不同脏器的阳性检出率分别为，心３６．４％、肝脏７２．７％、脾脏５０％、肺脏６６．７％、肾脏６６．７％。

双抗体夹心生物素-亲和素ELISA法检测相思子毒素

目的建立相思子毒素(abrin)的酶联免疫检测方法,为abrin临床诊断、中毒治疗、法医学鉴定等应用领域提供技术基础和参考依据。方法采用双抗体夹心生物素-亲和素ELISA法来检测微量abrin。结果该法检测abrin线性范围为0.125～31.25μg/L,线性回归方程为Y=0.52369X+0.51632(r=0.9816,P<0.0001,n=9),检测限为0.125μg/L。不同浓度蓖麻毒素(ricin)、葡萄球菌肠毒素(SEB)对检测结果基本无干扰,表明该法检测abrin具有很好的特异性。该法能用于abrin毒素污染水样、土样、食品、血液等模拟样品的分析,相对标准差为2.35%～4.14%,具有较好的重现性。结论成功建立了夹心BA-ELISA法检测abrin,巧妙地将多克隆抗体的强富集能力、单克隆抗体的特异性以及生物素-亲和素系统的放大作用结合起来,达到了提高检测的灵敏度和特异性的目的,可适用于各种微量abrin样品的分析。