奇异南星挥发油通过miR-762/NF2轴对甲状腺癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨奇异南星挥发油(ADVO)对甲状腺癌细胞恶性生物学行为的影响及可能作用机制。方法用含不同浓度ADVO培养液培养甲状腺癌TPC-1细胞48 h,CCK-8法检测细胞存活率,筛选最适作用浓度;TPC-1细胞分为空白组(常规培养)、ADVO组(60μg/mL ADVO)、miR-762 mimics组(转染miR-762 mimics)、miR-762 mimics NC组(转染miR-762 mimics NC)、ADVO+miR-762 mimics组(60μg/mL ADVO+转染miR-762 mimics)、ADVO+miR-762 mimics NC组(60μg/mL ADVO+转染miR-762 mimics NC)并培养,行CCK-8法、流式细胞术、Transwell小室实验;双荧光素酶报告基因实验验证miR-762与2型神经纤维瘤(Neurofibromatosis type 2,NF2)基因的靶向关系;RT-qPCR法检测miR-762及NF2 mRNA相对表达水平;Western blot实验检测Merlin、Yes相关蛋白1(YAP1)、p-YAP1、裂解半胱氨酸蛋白酶-3(C-caspase-3)、E钙粘附蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)相对表达水平。结果TPC-1细胞存活率随ADVO作用浓度增大而降低(P<0.05),60μg/mL ADVO浓度作用下的细胞存活率接近50%;与空白组比较,ADVO组细胞存活率、miR-762及YAP1、Vimentin蛋白相对表达水平降低,细胞凋亡率、NF2 mRNA与Merlin、p-YAP1、C-caspase-3和E-cadherin蛋白相对表达水平升高、细胞迁移及侵袭数减少(P<0.05),miR-762 mimics组细胞存活率、miR-762及YAP1、Vimentin蛋白相对表达水平升高,细胞凋亡率、NF2 mRNA与Merlin、p-YAP1、C-caspase-3和E-cadherin蛋白相对表达水平降低、细胞迁移及侵袭数增加(P<0.05);ADVO可减弱miR-762过表达的作用效果,抑制TPC-1细胞恶性生物学行为(P<0.05);经生物信息学预测和双荧光素酶报告基因实验验证,NF2基因可能为miR-762的潜在靶基因。结论ADVO可抑制TPC-1细胞增殖、侵袭及迁移并促进其凋亡,其作用机制可能与抑制miR-762表达并提高其靶基因NF2编码Merlin蛋白水平,激活相关抑癌信号有关。

不同产地奇异南星挥发油GC-MS分析及抗肿瘤活性

采用同时蒸馏萃取法(SDE)提取两种不同产地的奇异南星挥发油,通过气相色谱-质谱联用仪鉴定其中化学成分,采用峰面积归一化法确定各组分的相对含量,并采用甲基噻唑蓝(MTT)法对两种挥发油进行体外抗肿瘤活性测试。结果显示,从广西产和四川产奇异南星挥发油中分别鉴定出12种和11种化合物,其相对含量分别为90.96%和94.68%,相同成分有5种,分别为亚油酸、棕榈酸、十五碳酸、5-十八碳炔和顺-11-十六碳烯酸;两种挥发油主要成分为脂肪酸,但组成和含量存在差异。两种挥发油对人肺癌细胞株A549、人宫颈癌细胞株Hela、人肝癌细胞株Hep G2和人结肠癌细胞株HCT-116均显示出较强的抑制活性,其细胞毒性无明显差异,半抑制浓度范围为43.66~105.04 mg/L。

奇异南星再生体系的建立

为了保护和利用野生奇异南星资源,建立了奇异南星的再生体系.以奇异南星叶柄作为外植体,通过器官发生途径,探讨了不同植物生长调节剂对愈伤组织、不定芽及不定根的诱导效应.研究结果表明,诱导愈伤组织的适宜培养基为MS+6-BA 1.0mg/L+2,4-D 1.0mg/L;诱导不定芽和不定根分化的适宜培养基均为MS+IAA 0.5mg/L+6-BA 0.5mg/L,不定芽诱导率达82%,生根率达到100%.