奇甜蛋白基因在园艺作物中的表达

奇甜蛋白(thaumatin)是从非洲西部植物katemfe(ThaumatococcusdanielliiBenth)中提取得到的几种关系相近的甜味蛋白的统称,其中最主要的为奇甜蛋白I和奇甜蛋白II。奇甜蛋白不仅甜度高,而且具有低热量、安全无毒以及不易诱发糖尿病等优点。因此,将奇甜蛋白基因转入园艺作物中并使之表达,用以提高可食部分的甜味,有其特别的研究意义。奇甜蛋白基因已先后在马铃薯、梨树、黄瓜、番茄等园艺作物得到表达,但仍有一些问题需要解决。现从奇甜蛋白基因的克隆、测序与表达,转基因果实的安全性检测,甜度的感官评价,甜味遗传特点以及奇甜蛋白抗真菌病害检验等几个方面综述了国内外研究进展,并对今后的研究提出了建议。

菌物生物技术:外源蛋白在米曲霉中的表达及分泌(英文)

米曲霉是与工业用酶及食品发酵相关的重要微生物，其分泌蛋白的能力有望将其用于外源蛋白表达的遗传工程研究。为了构建米曲霉的转化系统，首先由紫外照射，分离获ａｒｇＢ－突变株，再通过ＣａＣｌ２调节的化学方法和电穿孔技术将携带构巢曲霉ａｒｇＢ基因的质粒导入米曲酶受体细胞，经筛选获得多拷贝及遗传稳定的转化子，转化频率为１０～５０转化子／μｇＤＮＡ。虽然构巢曲霉与米曲霉ａｒｇＢ基因的同源性不高，但前者对后者ａｒｇＢ－突变能起到补偿作用。在电场调节的转化中—电穿孔，适宜条件为６．３ｋＶ／ｃｍ和１５４０ｏｈｍ。电场中，原生质体相对于非原生质体在１．３ｋＶ／ｃｍ条件成活率为８０％，而６．３ｋＶ／ｃｍ下为５０％。为了实现外源基因在米曲霉中的表达，天然植物源的蜜饯—奇甜蛋白基因及构巢曲霉中作为营养选择标记的ａｒｇＢ通过共转化被引入受体细胞中，然后从培养基中获得与纯化的奇甜蛋白相似的具免疫活性的２２ｋＤａ分子量的蛋白质，这说明植物中的信号序列同样可在米曲霉中起作用，调节奇甜蛋白分泌到细胞外。