脑膜炎奈瑟氏菌表面蛋白A的克隆表达及血清学分析

目的构建并表达功能性的脑膜炎奈瑟氏菌表面蛋白A(NspA)的重组蛋白,并检测流行性脑脊髓膜炎(流脑)恢复期患者血清中的抗NspA抗体水平,探讨NspA作为新的流脑抗原疫苗的意义。方法从流脑患者流行株中克隆NspA基因构建原核表达载体,在大肠杆菌中实现可溶性表达,GSTrap FF亲和层析纯化出具有生物活性的NspA融合蛋白。采用纯化得到的NspA融合蛋白检测流脑恢复期患者血清中的抗NspA抗体。结果成功表达了功能性NspA蛋白,相对分子质量(Mr)为44 000。并用NspA融合蛋白检测到患者恢复期血清中存在有抗NspA抗体,且滴度为1∶40时,阳性率为90%。结论成功表达了NspA重组蛋白,并检测到自然感染流脑患者恢复期血清中的NspA抗体。

淋病奈瑟氏菌的耐药机制研究

淋病奈瑟氏菌（NG）是一种引起泌尿生殖道感染的性传播疾病（STD）。80年代以来。西方国家淋病的发病率有所下降，非淋菌性感染上升。但在发展中国家。其仍是最常见的STD。淋病在我国各种法定传染病中发病率仅次于疟疾和肝炎居第3位。其随着抗生素的广泛应用。耐药率逐年上升。因此探讨NG的奈瑟氏菌。对指导临床合理用药，有效控制NG感染及传播有着十分重要的意义。

5种抗菌剂对淋病奈瑟氏球菌的抑菌效果研究

采用琼脂稀释法测定了５种抗菌剂对２０１株淋病奈瑟氏球菌的最低抑菌浓度（ＭＩＣ）。结果检出４株为产β－内酰胺酶菌株（ＰＰＮＧ），对青霉素和四环素的耐药率分别为５７．２％和８２．６％，其ＭＩＣ９０均已超过耐药界限（ＭＩＣ＝１μｇ／ｍｌ）。３５株耐环丙沙星，其中１５株同时对青霉素和四环素有耐药性。对大观霉素和头孢曲松的敏感性最高，分别为９９％和１００％，但检出２株耐大观霉素菌株，头孢曲松ＭＩＣ５０、ＭＩＣ９０明显高于国内外报道。

奈瑟氏淋球菌表面蛋白A基因克隆及在真核细胞中的表达研究

为了研制奈瑟氏淋球菌外膜蛋白—奈瑟菌表面蛋白A(NeisseriasurfaceProteinA ,NspA)的核酸疫苗 ,根据淋球菌NspA的基因序列 ,设计一对寡核苷酸引物。以淋球菌WHO A菌株基因组DNA为模板 ,通过PCR扩增获得具有完整开放读码框架 (ORF)的NspA基因 ,并将其正向插入真核表达载体pCMVscript,成功构建了表达NspA基因的真核细胞表达载体pcNspA。用脂质体包裹pcNspA重组质粒转染COS细胞 ,以间接免疫荧光分析法分析NspA基因的表达 ,发现转染pcNspA的COS细胞能高表达NspA抗原。淋球菌免疫保护性抗原NspA基因的克隆与真核细胞表达 。

淋病奈瑟氏菌中国流行株gyrA和parC基因与喹诺酮类耐药性的相关性

目的 调查中国地区淋病奈瑟氏菌 (NG)对喹诺酮类的耐药性状况 ,探讨高水平耐药的基因突变株对喹诺酮类耐药机制的作用 .方法 对 9a来临床分离保存淋球菌流行株进行了体外环丙沙星 (CIP)药敏实验 .筛选出 76株高水平CIP耐药株 ,通过 PCR扩增了其中的 1 8株 NG的 gyr A和par C喹诺酮耐药决定区基因 ,并对扩增子直接测序 .通过N he I酶切、脉冲电场凝胶电泳 (PFEG)分析了这些菌株的遗传关系 .结果 环丙沙星的耐药检出率有逐年增高的趋势 ,MIC≥ 1 .0 mg· L- 1的菌株由 1 993年的 5 .1 %上升到 2 0 0 1年的 2 1 .4% .对照组中的 1 8株敏感菌只有两株发生了 gyr A的单一突变 ,未发现 par C变异 ;而耐药组中 89% (1 6 )菌株的gyr A发生了 Ser- 91向 Phe的单一突变株或 (和 ) par C的双突变 .88.9% (1 5 )的菌株的 gyr A发生了 Ser- 91向 Phe和 Asp-95向 Gly的突变 .在发生 par C突变中 72 %属于 Asp- 86向Asn突变 .PFEG分析发现 1 0株具有完全一致的 gyr A和par C突变模式 .同时也发现来自不同地区的菌株的 PFEG指纹图是不同的 .结论 研究表明 ,在中国 NG流行株对喹诺酮类耐药率呈增长趋势 ;NG流行株对喹诺酮产生耐药性与gyr A和 par

脑膜炎奈瑟氏菌NspA基因重组乳酸菌表达载体的构建及原核表达

用NcoⅠ和KpnⅠ双酶切克隆质粒pMD-18T-NspA及可以在乳酸菌与大肠杆菌之间穿梭表达的载体质粒pW425et,将NspA基因与pW425et表达载体用T4DNA连接酶相连,构建出重组质粒pW425et-NspA,将其转入至E.coliDH5α感受态细胞中,筛选阳性重组子进行SDS-PAGE和Western-blot检测,经蛋白电泳可见约18 kD的融合蛋白,Western-blot分析表明该蛋白具有与脑膜炎奈瑟氏菌抗体的反应原性。

脑膜炎奈瑟氏菌对常用抗菌药物敏感性监测

本文就１９６６～１９９３年２１个省市分离的２１８株Ａ、Ｂ和Ｃ群脑膜炎奈瑟氏菌（Ｎｍ）对７种常用抗菌药物的敏感性进行了监测。在１０８株Ａ群Ｎｍ中２０株（１８．５％）对ＳＭＺ耐药，其中１７．３％的病人菌株，２１．２％的带菌者菌株耐药；３１株（２８．７％）对ＡＳＰ耐药。在１０１株Ｂ群Ｎｍ中４０株（３９．６％对ＳＭＺ耐药。其中４３．３％的病人菌株和３４．１％的带菌者菌株耐药，１７株（１６．８％）对ＡＳＰ，１０株（９．９％）对ＣＦ耐药。在９株Ｃ群Ｎｍ中５株对ＳＭＺ，２株对ＡＳＰ耐药。未发现Ｎｍ对Ｃｈｌ耐药。实验结果提示我们今后在流脑治疗和化学预防上应加强Ｎｍ对抗菌药物敏感性的监测，这有助于提高这些药物对流脑防治的效果。

2013-2015年北京市门头沟区健康人群脑膜炎奈瑟氏球菌带菌率分析

目的了解北京市门头沟区健康人群脑膜炎奈瑟氏球菌（Neisseriameningitides,Nm）带菌情况,为制定防控措施提供依据。方法 2013-2015年在门头沟区分层整随机抽取不同年龄组健康人群进行咽拭子采样,分离、鉴定Nm。结果在756例健康人群中,检出Nm 41株,带菌率为5.42%。在分离到的41株Nm菌株中,B群7株,不可分群24株,自凝菌10株。结论北京市门头沟区健康人群Nm带菌者主要集中在15~39岁,检出的菌株以不可分群为主。

水貂脑膜炎奈瑟氏菌感染的诊断及药敏试验

为了对山东威海某发病水貂场的病死水貂进行病原学诊断,采用病原分离、生化试验、PCR扩增、基因序列比对等方法对分离细菌进行了鉴定,最终确定其病因为脑膜炎奈瑟氏菌感染。在此基础上进行了药敏试验,发现该脑膜炎奈瑟氏菌对所有检测药物均不敏感。

一株奈瑟氏球菌H1降解TNT的初步研究

从某化工厂废水排放地的土壤中分离筛选到4株对TNT具有降解作用的细菌H1、H2、H3和H4,其中H1菌株对TNT的降解效果最好,经初步鉴定为奈瑟氏球菌属.正交实验表明H1菌株降解TNT的最适条件为:pH 7.0、温度30℃、葡萄糖质量浓度为0.2 g/L、接种量为2.45×1011/L,在该条件培养30 h对100 mg/L TNT的去除率可达到98.2%.紫外光谱显示TNT经该菌株降解后在230 nm处的特征吸收峰明显减弱.

检查淋病奈瑟氏球菌感染两种方法比较

我科于1994年以来,应用淋病快速诊断试剂盒,对疑似淋病奈瑟氏球菌感染的104例患者进行检查,并用涂片法进行比较,现将结果报告如下: 一、材料和方法 (1)检查对象:104名门诊和临床疑诊为淋病奈瑟氏双球菌感染患者。

免疫荧光法检测奈瑟氏淋球菌方法的建立及其临床应用评价

通过试验研究,确定了抗体荧光标记的最佳条件、免疫荧光法检测的最适抗体浓度及最佳反应条件,从而研究免疫荧光法检测奈瑟氏淋球菌方法的建立,并对奈瑟氏淋球菌免疫荧光法检测试剂盒进行临床试验,评价其检测效果。采用分离培养法和奈瑟氏淋球菌免疫荧光法检测试剂盒对1100例临床样本进行平行检测,并以分离培养法检测结果为对照,统计免疫荧光试剂盒与分离培养法检测结果的总符合率及阴、阳性符合率。试验结果统计分析显示,受测免疫荧光试剂盒检测与分离培养法检测的总符合率为97.64%,阳性符合率为93.28%,阴性符合率为98.17%,Kappa值>0.8,表明受测免疫荧光试剂盒与分离培养法的临床检测结果无显著性差异。受测免疫荧光法检测试剂盒检测快速、简便、经济、准确,可用于奈瑟氏淋球菌的临床快速诊断。

应用单克隆抗体和免疫斑点试验对B群脑膜炎奈瑟氏菌脂寡糖分型

本研究使用４种抗Ｂ群脑膜炎奈瑟氏菌（Ｎｍ）脂寡糖的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）和免疫斑点试验（ｄｏｔ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ）首次对我国不同年代和地区收集的９１株Ｂ群Ｎｍ进行了脂寡糖（Ｌｉｐｏｏｌｉ－ｇｏ－ｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ＬＯＳ）分型，总分型率为９０．１１％，其中Ｌ３．７．９复合型最多，占６３．７４％，其次为Ｌ１．３．７．９复合型，占１２．０９％。该结果为确定我国引起流脑发病的Ｂ群Ｎｍ主要ＬＯＳ型提供了依据，为筛选本国的Ｂ群Ｎｍ菌苗菌株及其作为菌苗成分的ＬＯＳ抗原奠定了基础。

广东省近两年流行性脑膜炎奈瑟氏菌菌群分布及药敏性结果分析

目的了解并分析流行性脑膜炎奈瑟氏菌菌群分布及药敏性。方法无菌收集并分离出临床诊断为流行性脑膜炎病人和带菌者的脑脊液(CSF),将部分CSF接种到巧克力琼脂平板及血琼脂平板中,放置5%CO2孵箱中35℃孵育20～24 h。对培养出来的细菌进行鉴定。对已鉴定为脑膜炎奈瑟氏菌用MIC法,琼脂稀释法培养基为M-H琼脂补充5%脱纤维羊血,使用11种抗生素进行药敏检测。结果共分离和检出脑膜炎奈瑟氏菌18株,其中A群Nm为0株,B群Nm为9株,C群Nm为6株,Nm未定菌为2株,W135 Nm菌为1株。18株脑膜炎奈瑟氏菌抗生素敏感率较高,其中头孢噻肟(CTX30)、头孢曲松(CRO30)、美罗培南(MEM10)、阿奇霉素(AZM15)、米诺环素(MH30)、氯霉素(C30)、利福平(RD5)和氨苄西林(AM)8种药物敏感率均达到100%。结论广东省地区流行性脑膜炎以奈瑟氏菌B群和C群为主,应引起重视,其抗生素总体药物敏感率较高。

人牙菌斑奈瑟氏菌的分离培养及酸代谢特性

作者对30名中青年牙菌斑中奈瑟氏菌进行了分离培养鉴定。结果:人牙菌斑中奈瑟氏菌检出率为100％,其中干燥奈瑟氏菌占优势。对三种奈瑟氏菌的酸代谢特性研究发现,三种奈瑟氏菌在糖供给充足时均能解糖产酸。而当糖消耗后或糖供给不足时,又能降解乳酸和乙酸以供给能量。

脑膜炎奈瑟氏菌NspA基因的克隆及序列分析

为了获得脑膜炎奈瑟氏菌(Nesseria meningitidis,Nm)表面蛋白A(NspA)基因,从脑膜炎患者的血液中分离出脑膜炎奈瑟氏菌并对其进行鉴定,然后根据NspA基因的核苷酸序列,设计合成一对特异性引物,通过聚合酶链式反应(PCR)技术体外扩增得到NspA基因,进行克隆、测序及序列分析。结果显示,其核苷酸序列同源性与Genbank报道的标准菌株相比同源性为100%。克隆获得的基因保持了脑膜炎奈瑟氏菌表面蛋白NspA基因的完整性,保留了其抗原性,为以后进一步开发脑膜炎基因工程疫苗奠定了实验基础。

淋病奈瑟氏球菌耐药机制及耐药基因检测研究进展

淋病奈瑟氏球菌引起的淋病是我国目前流行的性传播疾病中发病率最高的病种[1 ] 。传统的抗生素如青霉素、四环素由于耐药菌株的普遍存在已不再应用于临床治疗 ,然而 ,淋病奈瑟氏球菌对这类药物的耐药仍广泛存在。喹诺酮是近几年来治疗淋病最有效的抗生素 ,但目前已出现了对这些抗生素的耐药菌株 ,且随着抗生素的广泛应用有日渐增加的趋势[2 ] 。了解淋病奈瑟氏球菌耐药的发生机制、掌握并使用快速敏感的耐药基因检测方法是及时发现耐药菌株的关键 ,也是临床合理使用抗生素的前提。本文综述了淋病奈瑟氏球菌耐药现状。

广东省脑膜炎奈瑟氏菌porA基因限制性片段长度多态性分型研究

目的 分析广东省在不同流行时期 ,特别是 80年代后期以来脑膜炎奈瑟氏菌 (Nm)的特点。方法 选择 35株A、B、C群流脑菌株 (196 6～ 2 0 0 0年 )进行porA基因聚合酶链反应 -限制性片段长度多态性 (PCR -RFLP)分型研究 ,采用PCR反应扩增porA基因 ,PCR产物纯化后经限制性内切酶MspI酶切 ;10 %聚丙烯酰胺凝胶 (PAGE)电泳分离酶切产物 ,银染显色。结果 35株被检菌株分为5种RFLP型 ,2 0株A群菌株 (病人 17株 ,带菌者 3株 )分 3型 ,谱型与我国代表谱型相同 (即a1、a2 、a3型 ) ;11株B群菌株分 5型 ,其中 6株病人菌株每两株 1型 ,分为 3型 (即b2 0 、b2 1、b2 1a2 型 ) ,其中b2 0 型与a3 型谱型相同 ;4株C群菌株有 3株与b2 1a2 菌型相同。结论 不同的血清群可有相同的RFLP谱型 ;A群Nm不同的流行周期有自己优势菌型 ,广东省 6 0年代与 80年代后期至今的代表菌型相同 ,为a3 型 ;B群RFLP谱型比A群变异程度大 ,同一时期分离到的菌株可有几种不同的RFLP谱型 ;