B群奈瑟脑膜炎球菌引起休克型流行性脑脊髓膜炎1例报道

患者，女，16岁，学生，因发热、恶心、呕吐17h，手足发绀3h，于2006年12月9日10：30入院。患者开始发病时，感觉全身酸痛不适，发热，体温39．0℃左右，双眼眶胀痛，恶心、呕吐2次，偶有右下肢抽搐。在校医务室治疗，静脉滴注克林霉素，症状无好转。后发现颜面及躯干散在淤点，阴道有少量出血（非经期）；入院前3h患者逐渐出现四肢厥冷，

槲皮素对奈瑟球菌感染脑膜炎大鼠继发内毒素血症的抑制作用及机制研究

目的:分析槲皮素对奈瑟球菌感染脑膜炎大鼠继发内毒素血症的抑制作用影响。方法:选取SPF级Wistar雄性大鼠60只,随机数字表法将大鼠分成6组,分别是模型组、正常组、阳性对照组、低剂量槲皮素组、中剂量槲皮素组及高剂量槲皮素组,每组各10只,除正常组大鼠外,其他大鼠制备奈瑟球菌感染脑膜炎模型,造模后阳性对照组灌胃2mL剂量为100mg/L的地塞米松药液,低、中、高剂量槲皮素组灌胃2mL剂量为50、100、200mg/L的槲皮素药液,正常组与模型组大鼠灌胃等剂量生理盐水,各组大鼠给药间隔12h,共给药5次。观察各组大鼠给药12、24、36、48及60h时其存活率状况,同时间隔12h检测大鼠体温一次,ELISA法检测血清IL-6、TNF-α、脂多糖、IL-1β、IL-8含量,Western blot检测p65与IκBα蛋白表达,RT-PCR检测脑组织Toll样受体4(TLR4)mRNA、CD68mRNA相对表达量。结果:造模24h内模型组大鼠全部死亡,模型组大鼠存活率低于正常组,中剂量及高剂量槲皮素组大鼠存活率优于模型组、阳性对照组及低剂量槲皮素组,差异有统计学意义(P<0.05);模型组大鼠血清IL-6、TNF-α、IL-1β及IL-8含量显著高于正常组(P<0.05),其他各给药组血清IL-6、TNF-α、IL-1β及IL-8含量显著低于模型组。其中,中、高剂量槲皮素组大鼠降低显著,和模型组、阳性对照组对比差异有统计学意义(P<0.05)。模型组大鼠IκBα蛋白表达比正常组下降,p65蛋白表达比正常组上升,中、高剂量槲皮素组大鼠IκBα蛋白表达比模型组、阳性对照组上升,p65蛋白比模型组、阳性对照组下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:槲皮素可抑制奈瑟球菌感染脑膜炎大鼠机体NF-κB炎症通路,降低血清炎性因子含量,提高大鼠存活率。

2013-2015年北京市门头沟区健康人群脑膜炎奈瑟氏球菌带菌率分析

目的了解北京市门头沟区健康人群脑膜炎奈瑟氏球菌（Neisseriameningitides,Nm）带菌情况,为制定防控措施提供依据。方法 2013-2015年在门头沟区分层整随机抽取不同年龄组健康人群进行咽拭子采样,分离、鉴定Nm。结果在756例健康人群中,检出Nm 41株,带菌率为5.42%。在分离到的41株Nm菌株中,B群7株,不可分群24株,自凝菌10株。结论北京市门头沟区健康人群Nm带菌者主要集中在15~39岁,检出的菌株以不可分群为主。

酵母浸出粉在奈瑟脑膜炎双球菌培养中的比较观察

目的探索A群,C群奈瑟脑膜炎双球菌(简称流脑)多糖疫苗生产中奈瑟脑膜炎双球菌培养的最适培养基。方法在培养基配制中用增减酵母浸出粉的方法制备相应的培养基,8h收菌,通过菌体的收获量并参考多糖量来确定较好的培养基配比。结果不同培养基用于A群、C群奈瑟脑膜炎菌培养8h后均有收获,其中2号培养基(酵母浸出粉)培养的菌体的浓度明显高于1号和3号培养基,它们之间有显著性差异(P<0.05)此种培养基能提高奈瑟脑膜炎双球菌的产量。结论添加酵母浸出粉的培养基可作为A群、C群奈瑟脑膜炎双球菌培养的最适培养基。

穿心莲内酯对经抗生素治疗引发内毒素血症奈瑟球菌感染脑膜炎大鼠存活率影响及作用机制

目的观察穿心莲内酯对经氨苄西林钠治疗奈瑟球菌感染脑膜炎大鼠存活率的影响,并探讨其作用机制。方法将48只出生2周的大鼠随机分为正常组、模型组、氨苄西林钠组、氨苄西林钠+穿心莲内酯组,每组12只。除正常组外,其余组均通过大鼠小延髓池进针注射脑膜炎奈瑟球菌悬液制备脑膜炎模型。模型制备成功后,正常组和模型组大鼠给予生理盐水灌胃,氨苄西林钠组给予200 mg/L氨苄西林钠皮下注射,氨苄西林钠+穿心莲内酯组在氨苄西林钠组基础上灌胃50 mg/L穿心莲内酯,每12 h 1次,共5次。统计各组小鼠存活率及平均最高体温增量,采用脂多糖检测试剂盒测定血浆脂多糖水平,采用ELISA法测定血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平,Western blot法检测大鼠脑膜中p65、IκBα蛋白表达情况。结果氨苄西林钠+穿心莲内酯组大鼠存活率高于氨苄西林钠组(P<0.05);氨苄西林钠组和氨苄西林钠+穿心莲内酯组大鼠体温增高平均值均明显低于模型组(P均<0.05),且氨苄西林钠+穿心莲内酯组明显低于氨苄西林组(P<0.05);氨苄西林钠+穿心莲内酯组血浆脂多糖、TNF-α、IL-6水平和脑膜中p65蛋白表达量均明显低于氨苄西林钠组(P均<0.05),脑膜中IκBα蛋白表达量明显高于氨苄西林钠组(P<0.05)。结论穿心莲内酯可明显提高氨苄西林钠治疗内毒素血症奈瑟球菌感染脑膜炎大鼠存活率,可能与抑制Nk-κB炎症通路相关。

南宁市儿童流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟菌所致脑膜炎流行病学特征分析

目的 了解广西南宁市 5岁以下儿童流感嗜血杆菌 (Hi)、肺炎链球菌 (Sp)和脑膜炎奈瑟菌 (Nm)所致脑膜炎流行病学特征 ,为制订该病的预防对策提供依据。方法 2 0 0 0年 11月至 2 0 0 2年 12月对广西南宁市市区、市郊 15个乡镇、武鸣县 10个乡镇和邕宁县 14个乡镇的凡符合“疑似脑膜炎筛检标准”的 5岁以下患儿进行以病原学为依据的细菌性脑膜炎流行病学监测。结果 共评估了12 72例疑似脑膜炎患儿 ,发现Hi脑膜炎 3例、Sp脑膜炎 4例 ,未发现Nm脑膜炎病例 ;Hi、Sp脑膜炎年均发病率分别为 0 98/10万、1.30 /10万 ;Hi和Sp脑膜炎病例分布于邕宁县和南宁市区 ;Hi、Sp脑膜炎平均发病年龄分别为 11 7、5 8月龄 ;发病季节较分散 ;临床症状体征均较重 ,Hi和Sp脑膜炎各有 1例并发症发生 ,Sp脑膜炎病死 1例 ,均无后遗症发生 ;所分离的Hi和Sp菌株有对青毒素和复方新诺明耐药的现象 ;确诊患儿绝大多数居住于农村 ,均未接种过相应的疫苗。结论 虽然本次监测南宁市 5岁以下儿童Hi、Sp和Nm所致脑膜炎发病率均较低 ,但除采取针对呼吸道传染病的预防措施外 ,仍主张采取针对性的疫苗接种。

用多糖-破伤风类毒素结合苗制备抗流行性脑膜炎球菌多糖单克隆抗体

目的 研制抗A群奈瑟脑膜炎球菌荚膜多糖单克隆抗体（GAMP mAb）.方法 以A群奈瑟脑膜炎球菌荚膜多糖-破伤风类毒素（GAMP-TT）耦联物免疫BALB/c小鼠,用常规细胞融合与克隆化技术获得一株能稳定分泌抗GAMP mAb的杂交瘤细胞株（2E7）.采用秋水仙素阻断法测定其染色体数目,降植烷诱导法制备含该抗体的小鼠腹腔积液,辛酸-硫酸铵沉淀法纯化单克隆抗体,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）灰度扫描测定提取物纯度,改良过碘酸盐氧化法制备辣根过氧化物酶（HRP）标记抗GAMP mAb,并采用中和法及其抗原替代法对抗GAMP mAb的特异性进行初步的鉴定.结果 所获得的杂交瘤细胞（2E7）具有很好的生长特性,染色体数目约为139.73条;抗体分泌量适中,Ig亚类为IgG1,提取物浓度1.76～2.32 mg·mL-1,纯度97.2%,标记抗GAMP mAb的效价为1：25 600;抗原替代实验与中和实验对其特异性考核,初步结果证实2E7 mAb具有很好的抗GAMP特异性.结论 成功制备抗GAMP mAb,为GAMP-TT疫苗的生产监测及产品质量控制提供了必要的物质基础.

C群脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗衍化工艺研究

目的筛选和优化C群脑膜炎多糖的衍化工艺。方法将C群奈瑟脑膜炎球菌多糖经溴化氰活化后通过己二酰肼衍生后制备出适宜的多糖衍生物。对衍化条件进行摸索和优化后通过衍化率及衍生物的可溶性来考察衍化效果,同时通过生化指标来考察该衍生工艺制备的结合疫苗的质量和收率。结果在pH11.0±0.2、活化30min以及溴化氰与多糖比值(W/W)=0.5时,所获衍生物制备的结合疫苗各项生化指标在所筛选的条件中最优。结论经过筛选优化的衍生工艺提高了多糖的衍化率,适于结合疫苗的研制,保证了结合疫苗的免疫原性。

新型脑膜炎奈瑟球菌X群荚膜多糖单克隆抗体及其潜在应用

针对脑膜炎奈瑟球菌X群荚膜多糖（Men X）研制的一种新型鼠杂交瘤细胞单克隆抗体（MAb）可用于酶联免疫法对脑膜炎球菌多糖进行定量。该单克隆抗体只对X群发生反应,对于脑膜炎奈瑟菌A群C群Y群和W群均不反应。由非竞争性ELISA测定的单克隆抗体的亲和常数值（Ka）为7.25×107/M。

BD在奈瑟脑膜炎双球菌传代培养中的比较研究

目的:探索A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗生产中奈瑟脑膜炎双球菌传代培养的最适培养基。方法用BD代替酸水解酪蛋白制备相应的培养基,传代培养4~5 h,以收获菌体量来确定较好培养基配比。结果 BD用于A群C群奈瑟脑膜炎菌培养细菌数高,能稳定提高奈瑟脑膜炎双球菌的产量。结论 BD可作为A群C群奈瑟脑膜炎双球菌培养的最适培养基。

超滤液用量对C群脑膜炎奈瑟球菌精制多糖质量的影响

目的:研究不同的超滤液用量对C群脑膜炎奈瑟球菌精制多糖质量的影响。方法:对C群脑膜炎奈瑟球菌多糖苯酚法去蛋白后的多糖液进行超滤,超滤液为0.5 mol/L氯化钙溶液,反复浓缩超滤。当超滤液用量达到20 L、30 L、40 L和50 L时,分别从截留管处取多糖液5 mL用于苯酚残留量的检测。对比超滤液用量为20 L和50 L时精制多糖的分子量、回收率、细菌内毒素和收率结果。结果:随着超滤液用量的增大,苯酚残留量逐渐降低;超滤液用量为50 L时,多糖分子量升高,精制多糖收率略有提高;细菌内毒素没有明显变化。结论:当超滤液用量为50 L时,多糖液中苯酚残留量降为0 g/L,多糖分子量升高,精制多糖收率略有增加,从而提高了多糖产品的质量。

湖南省C群及W135群脑膜炎奈瑟菌的流行病学及病原学特征分型

目的了解湖南省C群和W135群脑膜炎奈瑟菌的流行病学及病原学特征。方法收集2006—2016年湖南省流行性脑脊髓膜炎患者的血液或脑脊液、患者密切接触者以及健康人群的咽拭子标本中分离到的脑膜炎奈瑟菌菌株,进行生化检测、血清学分群。选取其中的C群和W135群部分菌株进行药敏试验,并采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型以及多位点序列分型(MLST)方法对菌株进行分子分型,分析其流行病学特征。结果经生化和血清学确认后,选取22株C群脑膜炎奈瑟菌和9株W135群脑膜炎奈瑟菌进行药敏试验,结果显示对大部分检测抗菌药物全部敏感,但对复方磺胺甲口恶唑C群菌株全部耐药,而W135群菌株的耐药率为55.56%,两者比较差异有统计学意义(χ~2=7.61,P=0.006)。经PFGE分型后,22株C群脑膜炎奈瑟菌共分为5种PFGE带型,其中5株HNC-01带型和13株HNC-02带型属同一亚型;2006年湖南省第1例C群患者分离菌株的PFGE带型为HNC-02,与2012、2013年患者以及患者密切接触者分离菌株的图谱完全一致,与带型为HNC-01的2008、2010、2013年的患者分离菌株仅有一个带型的差异,均属于优势带型。9株W135群脑膜炎奈瑟菌PFGE分型后共分为2个带型,其中首例患者与2013、2016年患者分离菌株的带型一致,均为HNW-01型。选取其中优势带型菌株经MLST后,结果 C群脑膜炎奈瑟菌为ST4821型,W135群脑膜炎奈瑟菌为ST11型,均属于脑膜炎奈瑟菌的高致病性克隆群。结论湖南省C群流脑和W135群流脑自首例病例出现后,各自都成为了该群病例的优势流行克隆群,C群流脑近年有减少态势,但出现了新的流行型别;W135群自2012年起成为我省新的流脑流行株,其优势菌株与国际上侵袭性的W群分型一致,可能引起新的大流行,应及时制定相应的防控政策。

A群脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗衍化工艺的研究

目的:筛选和优化A群脑膜炎多糖的衍化工艺。方法:将A群奈瑟氏脑膜炎球菌多糖经溴化氰活化后通过己二酰肼衍生后制备出适宜的多糖衍生物。对衍化条件进行摸索和优化后通过衍化率及衍生物的可溶性来考察衍化效果,同时通过生化指标来考察该衍生工艺制备的结合疫苗的质量和收率。结果:在pH 11.0±0.2、活化30 min以及溴化氰与多糖比值(w/w)=0.5时,衍生物制备的结合疫苗各项生化指标在所筛选的条件中最优。结论:经过筛选优化的衍生工艺提高了多糖的衍化率,适宜结合疫苗的研制,保证了其结合疫苗的免疫原性。

MLST分型技术应用于脑膜炎奈瑟菌的分子流行病学研究

目的对广东省1967-2007年自流行性脑脊髓膜炎(流脑)病人中分离的脑膜炎奈瑟菌(neisseria meningitidis,N.meningitidis)进行分子流行病学研究,了解菌株间的遗传进化关系。方法采用多位点序列分型(Multilocus Sequence Typing,MLST)技术,分别对1967-2007年分离的16株N.meningitidis菌株的7个看家基因的序列进行测定,并将序列与PubMLST数据库中储存的序列比对,确定其等位基因谱型及菌株序列型(Sequencetype,ST),并采用Splits Tree在线软件分析菌株之间的进化关系。结果16株N.meningitidis菌株分为13株A群、2株C群和1株W135群,分属5大克隆系,分别为ST-5、ST-1、ST-4821、ST-11克隆系和未知克隆系的ST-254序列型,其中ST-5克隆系所占比例最多,占68.75%(11/16)。1967-2006年的13株A群分离株中,11株属ST-5克隆系,占84.61%(11/13),另有1977年的1株分离株为ST-1克隆系和1株1984年的分离株为未知克隆系的ST-254序列型;2004和2006年的C群分离株属新出现的高致病性克隆系ST-4821;2007年首次分离的1株W135群菌株为ST-2960,属高致病性的ST-11/ET-37克隆系的子克隆。结论分离于不同年代病人的广东N.meningitidis分离株呈多克隆系并存,但近期以高致病性克隆系为主,特别是广东省首次出现高致病性ST-11/ET-37克隆系的W135群,提示应加强流脑的病原学监测。应用MLST分子分型技术,初步揭示了广东省脑膜炎奈瑟菌的遗传进化关系,基于等位基因图谱的MLST基因分型技术具有较高的分辨率,并通过互联网实现了序列数据库信息的全球共享。

脉冲场凝胶电泳技术用于脑膜炎奈瑟菌的研究

目的利用脉冲场凝胶电泳技术分析流行性脑脊髓膜炎(简称"流脑")病例及其密切接触者分离出的脑膜炎奈瑟菌(Nm)的同源性以及不同病例分离出Nm的相关性。方法对6例疑似流脑病例的血液和脑脊液标本以及对密切接触者咽拭子进行脑膜炎奈瑟菌的培养分离,分离菌进行氧化酶试验、血清学分群鉴定、糖原利用试验和脉冲场凝胶电泳(PFGE)鉴定试验。结果 6例疑似流脑病例与其密切接触者共分离出21株菌,均为Nm C群,5株为AH 1型,14株为AH 2型,2株为AH 47型。结论流脑病例分离出的Nm与其密切接触者分离出的Nm完全同源,其中4例病例病原菌来自同一菌株。

汶川大地震后绵竹灾民安置点灾民脑膜炎奈瑟菌带菌率调查

目的:了解汶川地震绵竹灾区灾民流行性脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitides,Nm)的带菌现状,提高防治水平。方法:于2008年6月份采集咽拭标本321份,现场接种于巧克力双抗平板分离培养,通过生化鉴定、染色镜检、血清学鉴定、PCR鉴定分群。结果:调查的321名灾民中,分离到Nm2株,均为B群,阳性率为0.62%。结论:绵竹灾区灾民流脑带菌状况以B群为主,带菌率相对较低。卫生防疫、卫生监督取得了阶段性成果。

小牛血清培养基用于人群脑膜炎奈瑟菌带菌调查研究

目的建立一种新型的正常人群脑膜炎奈瑟菌检验方法。方法配制一种小牛血清"双抗"培养基作为脑膜炎奈瑟菌的保菌增菌培养基,用于现场咽拭子采样,带回实验室增菌后再接种平板培养基,分离脑膜炎奈瑟菌,并以常规检测方法作配对比较。结果两次试验新方法检出脑膜炎奈瑟菌14株,常规方法仅在第2次试验时检出脑膜炎奈瑟菌1株。结论应用小牛血清"双抗"培养基建立的新方法适用于A、B、C群脑膜炎奈瑟菌检测,且检测效果明显优于常规的咽拭子直接接种法。

流行性脑膜炎球菌疫苗研究进展

流行脑膜炎疫苗已列入国家计划免疫。为获悉国际流脑疫苗研究和产业化动态以利于国内疫苗研制及产业化,本文就流脑疫苗领域中新发现的新型抗原、单价、多价流脑疫苗,尤其是B群疫苗等方面的研究进展加以综述。