湖南省首起由C群脑膜炎奈瑟菌引起流脑局部流行的调查

目的了解湖南省首起由C群脑膜炎奈瑟菌引起的流脑局部流行疫情特征。方法依据《全国流行性脑脊髓膜炎防治指南(试行)》和GB16884—1997进行调查和实验室检测。结果从患者的脑脊液中分离到奈瑟菌。经湖南省CDC实验室复核鉴定为C群脑膜炎球菌。结论此次疫情为湖南省首起由C群脑膜炎奈瑟菌引起的流脑疫情。隔离治疗病人、在疫区易感人群中紧急接种流脑(A+C)疫苗是控制疫情扩散的有效方法。

A群脑膜炎奈瑟菌多糖IgG抗体检测试剂研制

目的研制检测A群脑膜炎奈瑟菌荚膜多糖IgG抗体的酶联免疫吸附试验（ELISA）检测试剂。方法以CTAB、酚、乙醇从A群脑膜炎奈瑟菌培养上清中提取荚膜多糖（MenA PS）,将多糖与卵清蛋白（EA）以还原氨基法偶联,并以Sepharose CL-4B纯化。优化反应条件,建立以偶联物MenA PS-EA为包被抗原检测A群脑膜炎奈瑟菌多糖IgG抗体的间接ELISA法,并与血清杀菌力试验（SBA）比较。结果高效液相色谱检测MenA PS-EA结合物纯度为81.50%。试剂具有良好重复性（变异系数CV=4.26%～5.30%）;37℃放置7d、4℃放置12个月,试剂的灵敏度不变,具有优良的稳定性;分别用该试剂和SBA法检测192份血清,试剂相对于血清杀菌力试验的灵敏度为96.91%,特异度为90.00%,一致性为95.83%,统计学分析表明,2种检测方法之间差异无统计学意义。结论以纯化MenA PS-EA作为包被抗原建立的A群脑膜炎奈瑟菌多糖特异性IgG抗体间接ELISA检测试剂具有可行性,为进一步研究及开发细菌多糖类抗体诊断试剂提供了可借鉴的方法。

脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白NMB0315作为B群流脑疫苗候选抗原的免疫效果

目的研究原核重组表达的B群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白0315(rNMB0315)在诱导小鼠产生特异性免疫应答中的作用、免疫血清抗体体外杀菌活性和重组蛋白的免疫保护效果,初步评价rNMB0315作为B群流脑疫苗候选抗原的潜力。方法将构建的原核表达载体p ET30a-NMB0315转化大肠杆菌BL21表达重组蛋白,纯化鉴定后的重组蛋白免疫雌性BALB/c小鼠,检测体液免疫和细胞免疫水平;测定血清抗体在补体介导下的体外杀菌活性,观察rNMB0315蛋白疫苗对实验小鼠的免疫保护效果。结果 rNMB0315具有良好的免疫原性,能诱导产生较高水平的体液免疫应答:包括血清特异性IgG、IgG1、IgG2a、IgG3、IgG2b和生殖道黏膜特异性分泌型IgA(s IgA),免疫后第6周抗体效价分别为1∶150 000、1∶85 000、1∶60 000、1∶35 000、1∶30 000和1∶30 000;也能激发较高水平的细胞免疫应答,免疫小鼠脾淋巴细胞增殖反应的刺激指数(SI)值明显高于PBS、Freund佐剂对照组。在免疫的2、4、6周,血清IgG2a/IgG1比值均小于1,提示rNMB0315疫苗以诱导Th2细胞性体液免疫应答为主。rNMB0315疫苗免疫血清在补体介导下的体外杀菌抗体效价为1∶128;72 h内,对实验小鼠的免疫保护率为90%。结论原核表达的rNMB0315具有良好的免疫活性和免疫保护效果,NMB0315外膜蛋白具有作为预防B群流脑蛋白疫苗候选抗原的潜力。

从流脑病人血液检出C群脑膜炎奈瑟菌

2002年1-3月份,广西壮族自治区来宾县良塘乡发生流脑流行,共发现流脑病人15例,死亡3例.从暴发点患者血液中分离出一株病原菌.

PCR结合酶切-序列比对法鉴定B群脑膜炎奈瑟菌菌株

目的用PCR结合酶切-序列比对法对B群脑膜炎奈瑟菌菌株进行鉴定。方法用玻片凝集法对不同来源的15株B群脑膜炎奈瑟菌菌株进行初步检定,再用PCR结合酶切-序列比对法对上述15株菌株进行进一步鉴定,即用PCR结合酶切法扩增菌株的唾液酸转移酶sia D基因并对PCR产物进行酶切后,用BLAST软件将PCR产物测序结果与Gene Bank中原始sia D序列比对。结果 15株菌株玻片凝集结果均为阳性;15株菌株的PCR产物片段大小均为460 bp;TaqⅠ酶切后,13株菌株的酶切产物片段大小仍为460 bp,其PCR产物测序比对结果与B群脑膜炎奈瑟菌原始sia D序列同源性均达到99%;其余2株酶切产物片段大小约200 bp,与C群脑膜炎奈瑟菌sia D原始基因序列同源性分别为98%和99%。结论 15株菌株经PCR结合酶切-序列比对法鉴定,13株为B群脑膜炎奈瑟菌菌株,2株为C群脑膜炎奈瑟菌菌株;该方法可准确鉴定B群脑膜炎奈瑟菌菌株。

脑膜炎奈瑟氏菌B群引起一例新生儿流脑的实验室诊断及流行病学调查

目的:明确诊断并分析1例新生儿B群流行性脑脊髓膜炎(简称流脑)病例的流行病学特点进行调查分析,为进一步完善流脑诊断、防控策略与措施提供科学依据。方法:对新生儿疑似流脑病例进行流行病学调查并收集有关临床资料。收集病例的血液标本及其密切接触者的咽试子标本并进行菌株的分离培养和分型。结果:病例的血标本及其密切接触者患儿外祖母咽试子标本均分离到B群流脑菌株,2株菌株对9种抗生素的药敏结果完全一致。结论:结合该病例的流行病学资料、临床症状、实验室检测结果,判断该病例为B群脑膜炎奈瑟菌引起的病例。预防控制B群流脑的关键是主要采取以加强病原学监测、敏感药物使用的综合措施。

SEA为载体蛋白的A/C群脑膜炎奈瑟菌结合物初步免疫效果评价

目的对以金黄色葡萄球菌肠毒素A(staphylococcal enterotoxin A,SEA)为载体蛋白的A/C群脑膜炎奈瑟菌结合物的免疫效果进行初步评价。方法采用1-氰基-4-二甲氨基-砒啶四氟硼酸(1-cyano-dimethylamino pyridiniumtetrafluoroborate,CDAP)活化法,将SEA、破伤风类毒素(tetanus toxin,TT)分别与A群脑膜炎奈瑟菌荚膜多糖(group A N.meningitidis capsular polysaccharide,GAMP)、C群脑膜炎奈瑟菌荚膜多糖(group C N.meningitidis cap-sular polysaccharide,GCMP)结合制备结合物;将结合物分别免疫BALB/c小鼠,腹部皮下免疫3次,于第1针免后第9天、第19天、第27天眼眶采血,分离血清备用;检测体液免疫及细胞免疫反应水平。结果 SEA与GAMP结合后能增强抗-GAMP Ig G抗体水平,第3次免后GAMP-SEA组多糖抗体水平达到1∶12 800,高于GAMP组1∶400,但GCMP-SEA组结果不理想。SEA与GAMP结合后均能激发细胞免疫反应,IFN-γ和IL-4的SFC与GAMP组比较均升高,且IFN-γ高于IL-4。SEA与GAMP、GCMP结合后Th1/Th2细胞亚群比值分别达到23.48和22.19,高于GAMP组(14.09)和GCMP组(16.73),差异有统计学意义(P<0.05),提示SEA与GAMP、GCMP结合后可激发细胞免疫。结论 SEA与GAMP、GCMP结合后既能增强GAMP、GCMP的免疫原性,提高体液免疫反应,又能激发细胞免疫反应,提示SEA具备作为A/C群脑膜炎奈瑟菌结合疫苗载体蛋白的可行性。

健康人群流行性脑脊髓膜炎流行前期和流行期A、C群脑膜炎奈瑟菌抗体水平研究

目的掌握合肥市健康人群A、C群脑膜炎奈瑟菌(Nm)抗体水平现状。方法应用重复横断面监测研究模式,以合肥市辖3县4区划分为7个研究地区,在2005-2006,2006-2007年流行性脑脊髓膜炎(流脑)流行季节流行前期和流行期,采用整群重复抽样方法,应用酶联免疫吸附试验,对健康人群A、C群Nm抗体水平进行调查。结果连续监测健康人群2次流行前期和流行期,实际抽样范围672～690人。2次流行前期和流行期之间A群无差异,C群差异有统计学意义;2次流行期之间A、C群差异均有统计学意义。0～5岁和≥21岁组相对较低,11～15岁、16～20岁、≥21岁组流行期明显上升。同期不同地区之间差异均有统计学意义,肥西县、长丰县呈现明显低抗体水平。结论健康人群中存在一定A、C群Nm抗体水平,结合现状应确保儿童和青少年疫苗有效接种率,加强成人流脑预防控制工作。

B群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白NMB0315核酸疫苗的免疫活性和免疫保护作用初步研究

目的:构建B群脑膜炎奈瑟菌pc DNA3.1(+)/NMB0315真核表达重组质粒,检测其诱导小鼠产生的特异性体液免疫和细胞免疫应答水平、免疫血清体外杀菌效果及免疫保护作用,初步探讨NMB0315核酸疫苗的免疫活性和免疫保护效果,为研制一种新的预防B群流脑的核酸疫苗提供实验依据。方法:以B群脑膜炎奈瑟菌标准株MC58基因组DNA为模板设计引物,PCR扩增NMB0315基因,克隆至pc DNA3.1(+)真核表达载体中,经Bam HⅠ和XhoⅠ双酶切及测序鉴定重组质粒。构建成功的pc DNA3.1(+)/NMB0315重组质粒转染COS-7细胞和RAW264.7细胞,免疫细胞化学染色法和Western blot法检测重组蛋白在真核细胞中的表达。大量提取重组质粒,肌注免疫BALB/c小鼠,检测小鼠体内抗NMB0315的特异性体液免疫和细胞免疫水平;测定免疫血清体外杀菌滴度,观察核酸疫苗对实验小鼠的免疫保护效果。结果:构建的核酸疫苗pc DNA3.1(+)/NMB0315能够在真核细胞中有效转录和表达;免疫小鼠后能诱导产生特异性体液免疫应答和细胞免疫应答。在疫苗免疫后的2、4、6周,pc DNA3.1(+)/NMB0315组和pc DNA3.1(+)/NMB0315+Cp G组血清总Ig G及Ig G1、Ig G2a、Ig G2b和Ig G3亚类抗体水平呈递增趋势,均明显高于PBS、pc DNA3.1(+)、Cp G对照组(P<0.001);小鼠血清Ig G2a/Ig G1比值均小于1;生殖道灌洗液中特异性s Ig A水平均明显高于PBS、pc DNA3.1(+)、Cp G对照组(P<0.01)。免疫第6周,脾淋巴细胞刺激指数(SI)均明显高于对照组(P<0.01,P<0.01,P<0.05)。pc DNA3.1(+)/NMB0315+Cp G、pc DNA3.1(+)/NMB0315疫苗组免疫血清补体介导的体外杀菌效价分别为1∶128和1∶64;在致死量B群脑膜炎奈瑟菌MC58攻击后72 h存活率分别为70%和65%,对照组[PBS,pc DNA3.1(+),Cp G]72 h存活率为0。结论:NMB0315核酸疫苗能够诱导小鼠产生较高水平的体液免疫(包括黏膜免疫)和细胞免疫应答;免疫血清补体介导的体外杀菌活性较高;NMB0315核酸疫苗对感染B群脑膜炎奈瑟菌小鼠具有较强的免疫保护作用。

太原铁路职业人群流行性脑脊髓膜炎A群、C群奈瑟菌IgG抗体水平分析

目的了解太原铁路职业人群流行性脑脊髓膜炎的免疫现状。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA),对太原铁路部分健康职业人群进行了A群脑膜炎奈瑟菌IgG抗体、C群脑膜炎奈瑟菌IgG抗体检测。结果本次健康人群流脑抗体水平监测共检测253人,其中A群脑膜炎奈瑟菌IgG抗体阳性者162人,阳性率64.03%,GMT为1∶1.58;C群脑膜炎奈瑟菌IgG抗体阳性者122人,阳性率48.22%,GMT为1∶1.42,阳性率之间的差异有统计学意义(!2=9.6266,Ρ<0.01),GMT之间的差异也有统计学意义(t=3.3250,Ρ<0.01);不同年龄组的健康人群中,流脑A群脑膜炎奈瑟菌IgG抗体阳性率差异无统计学意义(!2=0.9756,Ρ>0.05),流脑C群脑膜炎奈瑟菌IgG抗体阳性率差异有统计学意义(!2=8.0911,Ρ<0.05);不同性别健康人群,流脑A群脑膜炎奈瑟菌IgG抗体阳性率差异无统计学意义(!2=1.7728,Ρ>0.05),GMT之间的差异也无统计学意义(t=1.7266,Ρ>0.05);流脑C群脑膜炎奈瑟菌IgG抗体阳性率差异有统计学意义(!2=24.4448,Ρ<0.01),GMT之间的差异也有统计学意义(t=4.7619,Ρ<0.01;不同职业类型的健康人群,流脑A群脑膜炎奈瑟菌IgG抗体阳性率差异无统计学意义(!2=0.6872,Ρ>0.05),流脑C群脑膜炎奈瑟菌IgG抗体阳性率差异也无统计学意义(!2=4.7672,Ρ>0.05)。结论太原铁路地区属于流脑散发地区,健康人群保持着一定流脑抗体免疫水平,但是太原铁路地区的流脑免疫屏障已经基本不存在,需要继续加强流脑的人群免疫工作。

4例C群脑膜炎奈瑟氏菌感染的分离培养及药敏分析

目的:通过对4例C群脑膜炎奈瑟氏菌感染患者的分离培养、分群及药敏分析,提高我们对脑膜炎奈瑟氏菌感染的检测水平,为临床提供治疗依据。方法:2006年11月至2007年3月先后分离出的4株脑膜炎奈瑟氏菌的鉴定、分群及药敏分析。结果:青霉素S2/4;头孢曲松S4/4;环丙沙星S2/4;复方新诺明S0/4。结论:C群脑膜炎奈瑟氏菌感染者首先头孢曲松预防流脑。

C群奈瑟菌引起的流行性脑脊髓膜炎抗生素使用及疗效分析

目的:探讨C群奈瑟菌引起的流行性脑脊髓膜炎抗生素的敏感性及临床疗效。方法:对10例C群奈瑟菌引起的流行性脑脊髓膜炎患者的临床资料进行分析。结果:药物敏感试验结果显示,对青毒素、头孢三嗪、磺胺嘧啶、氯霉素均为敏感;10例患者均治愈。结论:奈瑟菌菌群发生了变化,由A群变为C群,采用敏感抗生素联合用药可取得较好的疗效。

C群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白NhhA重组载体pASK-IBA37plus-nhhA的构建

构建C群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白Nhh A重组载体p ASK-IBA37plus-nhh A。以脑膜炎奈瑟菌C群菌株为实验材料,根据Gene Bank上的已知序列设计引物,通过聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增C群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白Nhh A基因(nhh A)。将nhh A与p ASK-IBA37 plus质粒用EcoRI,Xho I进行双酶切并尝试不同条件进行连接;连接产物实现在大肠杆菌TOP10感受态细胞中的转化。使用验证质粒图谱初筛和PCR与EcoRI,Xho I双酶切双重验证法复筛的方式筛选p ASKIBA37plus-nhh A阳性转化子。最后将构建好的p ASK-IBA37plus-nhh A进行基因测序。成功构建C群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白Nhh A重组载体p ASK-IBA37plus-nhh A,同时发现nhh A与p ASK-IBA37plus摩尔数之比为5.1、连接体系20μL、DNA终浓度为1.7 ng/μL时,获得的转化子阳性率能达到18.8%,且转化子菌落总数数量适中,方便后续筛检。同时,测序得到1 797 bp的nhh A序列信息,在Gen Bank上进行序列相似性比对,发现该基因与脑膜炎奈瑟菌NGH38的外膜蛋白GNA992(Neisseria meningitidis strain NGH38 outer membrane protein GNA992)基因的相似性为98%。