利用多组套式引物检测庚型肝炎病毒RNA

利用庚型肝炎病毒ＮＳ－３￣５区序列合成了四组套式引物，建立了灵敏、特异的庚肝病毒ＲＮＡ双扩增聚合酶链反应检测方法。用此方法检测了１０份庚肝病毒抗体阳性肝炎患者血清及１０份肝炎标志阴性健康人血清。在１０份庚肝抗体阳性血清中，不同组引物的检出率为ＮＳ－３（１）引物９份阳性，ＮＳ－３（２）引物８份阳性，ＮＳ－４引物４份阳性，ＮＳ－５（１）引物５份阳性，ＮＳ－５（２）引物９份阳性。

套式/多重PCR检测疟疾感染的应用研究

目的了解标签引物-套式/多重PCR技术在检测疟疾感染中的现场应用价值。方法随机采取我省疟疾流行区有发热症状的居民及家庭成员的耳垂血79份,同时制作厚血片和滤纸血样本各1份,用标签引物-套式/多重PCR检测所采集滤纸血样本中的疟原虫,并与镜检法进行比较。结果79份样本中,用标签引物-套式/多重PCR技术检出间日疟原虫阳性6例,镜检初检出10例间日疟原虫阳性,经复查血片后有4例排除了疟疾感染。镜检复核阳性的6例样本PCR均为阳性。以镜检复核为标准,两法阳性和阴性符合率为100%。结论标签引物-套式/多重PCR检测疟疾感染具高度敏感性和特异性,对疟疾鉴别诊断和明确诊断具有重要价值。

套式逆转录聚合酶链反应在黄热病毒快速检测中的应用

目的建立灵敏、特异的套式逆转录聚合酶联反应(RTPCR)快速检测黄热病毒方法。方法参照黄热病毒标准株D17序列设计套式引物,并检索国际基因序列数据库初步验证其特异性,随后对镁离子、dNTP及引物浓度,PCR反应条件进行优化,建立稳定、特异的套式RTPCR快速检测黄热病毒方法,并以同属于黄病毒科的登革病毒1～4型、流行性乙型脑炎病毒为对照,验证其特异性。结果外引物扩增可获得404bp左右的特异性扩增片断,阴性对照毒株未见设计大小的扩增片断,但可见非特异性片断;内引物扩增可获得349bp左右片断,阴性对照无扩增条带。结论套式RTPCR可快速、灵敏、特异的检测黄热病毒。

猪戊型肝炎病毒ORF2片段克隆及原核表达

设计套式引物,内套引物含有BamHⅠ/XhoⅡ酶切位点,采用RT-PCR技术扩增猪戊型肝炎病毒(HEV)结构蛋白基因ORF2部分片段,长度为634bp,将其克隆于PGEX-T载体,测序结果表明插入的片段属于戊型肝炎病毒ORF2部分,将该片段插入PproEXHTb表达载体,经酶切鉴定证实获得了重组表达质粒。将重组质粒转化大肠杆菌BL21,经1mmol/LIPTG诱导,得到表达,表达蛋白分子量为27Ku,以包涵体形式存在。Westernblot分析表明,该蛋白可以与猪戊型肝炎阳性血清反应,表明该蛋白具有良好的反应原性。