半套式聚合酶链反应检测牛奶中部分肠道致病菌

目的 建立一套食物中的单核细胞增生性李斯特氏菌、耶尔森氏菌和副溶血性弧菌等肠道致病菌的快速检测方法。方法 采用裂解法提取DNA与各自的三条引物进行二次聚合酶链反应扩增(简称半套式PCR),检测模拟阳性牛奶中部分肠道致病菌。结果 常规PCR能检出100个活菌的存在,在其产物进行半套式PCR检测时有10个活菌存在时即可扩增出特异性产物,提高10倍。最低检测限可达10 cfu(集落形成单位)。结论 本方法具有特异性强、敏感性高、简便快速等特点。

逆转录多重套式聚合酶链反应在儿童病毒性脑炎病原学研究中的应用

目的探讨早期同步检测病毒性脑炎(VE)主要病原新方法.方法应用逆转录多重套式聚合酶链反应(RT-M-nPCR)对100例VE患儿及73例对照组脑脊液(CSF)标本进行单纯疱疹病毒(HSV)DNA与肠道病毒(EV)RNA同步检测.结果整个过程约需5 h.该法与ELISA及经典nPCR方法比较,符合率分别为96%及100%.100例VE患儿CSF标本中,HSV阳性18例,EV阳性17例,在100例VE中,有26例重症,其中HSV感染14例(53.85%),EV感染7例(26.92%),不明病原5例(19.23%).不同病原检出率与年龄的关系:年龄～3岁、～7岁、～14岁HSV分别检出7.4%、11.9%、35.5%,EV分别检出25.9%、19.05%、6.5%.结论RT-M-nPCR是一种能在早期同步检测HSV及EV的具有巨大潜在应用价值的病原检测技术;在VE重症中HSV感染最常见;HSV感染在年长儿发病率高,而EV感染在学龄前及婴幼儿中多见.

应用套式聚合酶链反应技术分析细菌与胆固醇结石形成关系的初步研究

目的 :旨在从分子水平研究细菌感染与胆固醇结石形成之间的关系 ,以期阐明胆固醇结石发病的分子机理和探讨可能防治的新途径。 方法 :从 36例胆汁细菌培养阴性的胆囊胆固醇结石中提取 DNA,应用套式聚合酶链反应 ( NP- PCR)技术 ,从中特异性地扩增细菌 DNA片段。 结果 :发现 30例 ( 83.33% )胆固醇结石中有细菌 DNA存在。其中胆固醇含量在 30 %～ 69%之间 6例 ( 6/ 6) ;70 %～ 90 %之间 14例 ( 14/ 17) ;>90 % 10例 ( 10 / 13) ,尚未发现结石中胆固醇和水分含量多少与细菌 DNA存在与否有关。采用 16S r RNA基因序列对照分析鉴定细菌种类 ,在 10例( 2 7.78% )胆石中发现与大肠杆菌相似的 DNA片段 ;从 8例 ( 2 2 .2 2 % )胆石中得到痤疮丙酸杆菌型 DNA序列 ;2例 ( 5.56% )胆石中残留的细菌 DNA片段与化脓性链球菌相关 ;8例 ( 2 2 .2 2 % )胆石内细菌的 DNA片段具有多样性 ,类似于大肠杆菌、痤疮丙酸杆菌、化脓性链球菌、艰难梭状芽胞杆菌或其它未鉴定细菌 ,可能有多种细菌混合感染。另有 2例胆石的细菌 DNA分子量较低 ,不同于大肠菌、痤疮丙酸杆菌、化脓性链球菌、金黄色葡萄球菌和铜绿色假单胞菌 ,归类于其它未鉴定细菌。 结论 :证实多数胆固醇结石内有细菌 DNA存在。至于这些微生物在胆固醇结石形?

套式聚合酶链反应在豚鼠巨细胞病毒宫内感染模型中的应用价值

目的 运用套式聚合酶链反应 (N -PCR)检测豚鼠巨细胞病毒 (GPCMV)宫内感染 ,并探讨N -PCR在模型建立中的应用价值。方法 选择无感染史豚鼠 ,受孕后腹腔接种GPCMV ,分娩后 2 4h内处死 ;观察妊娠结局 ,运用N -PCR检测亲代及子代感染情况 ,并对标本进行病理学检查。N -PCR的特异性实验设阴性、空白和阳性对照。结果 感染孕鼠出现病毒血症征象 ,胎仔出现流产、死胎等异常结局。N -PCR检测显示 ,亲代 10 0 % ( 10 / 10 )感染 ,子代 96 .0 % ( 2 4 / 2 5 )感染 ,且感染脏器均出现非特异性组织病理学变化。N -PCR有较高的GPCMV检测特异性和灵敏性。结论 N -PCR检测GPCMV宫内感染 ,简便、快速、灵敏、准确 。

套式聚合酶链反应法检测外周血单个核细胞中HBcVccDNA

目的:建立套式聚合酶链反应法(nPCR)检测慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)中乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA(HBV cccDNA)。方法:根据HBV基因组DNA正负链上下游缺口序列,设计两套相对保守的引物,建立HBV cccDNA套式PCR,并用该法检测200例慢性乙型肝炎患者PBMC中HBV cccDNA。结果:该法检测200例慢性乙型肝炎患者,HBV cccDNA阳性率为60%。结论:套式PCR法简便、灵敏,可用于测定PBMC中HBV cccDNA。

套式聚合酶链反应直接测序法分析产超广谱β-内酰胺酶菌TEM全基因

目的 建立套式聚合酶链反应直接测序方法分析产超广谱 β 内酰胺酶菌TEM全基因 ,以便TEM分型和发现新的亚型。方法 根据Genbank核酸数据库已登录的TEM各亚型序列 ,在保守区自行设计 4条引物 ,分A、B两段半套式重叠扩增TEM全基因 ;并对A段作正向测序 ,B段作反向测序。结果 大肠埃希菌TEM 1、TEM 2、TEM2 6等 3种典型菌株均成功扩出A、B两段 ,产物直接测序波峰锐利 ,信噪比值高。该三株菌测得的序列与已在Genbank登录的序列一致。

套式-聚合酶链反应在山东省恙虫病检测中的应用

目的 :利用分子生物学手段对山东省部分地区的人和鼠进行调查 ,了解恙虫病在山东省的感染情况。方法 :采用套式 -聚合酶链反应 (nested- PCR)技术 ,对在山东省 6个市 (县、区 )捕获的野鼠或家鼠的肝、脾、肾组织标本 ,以及临床诊断为恙虫病的病人血标本进行检测。结果 :共检测鼠脏器标本 198份 ,阳性 8份 ,阳性率为 4 .2 4 % ;共检测临床诊断恙虫病病人血标本 14份 ,阳性 7份 ,阳性率为 5 0 %。结论 :首次在山东省黄河以北地区捕获的鼠体内检测到恙虫病东方体 ,其中两只鼠为褐家鼠 。

机械传动装置中锁紧链接胀套优化设计及应用

机械传动装置的结构设计中,常见的链接结构有键槽链接、轴套零件等。尽管这些锁紧链接结构沿用时间长,工艺技术较为成熟,但随着机械行业的发展,常用的锁紧链接结构已无法满足新型机械传动装置的运行需求。针对机械传动装置中原有的锁紧链接结构进行升级与完善,提出一种新型的设计方案,并分析新型结构的设计原理、具体型式、工艺要点及安装应用。

套式聚合酶链反应技术检测孕妇外周血中胎儿细胞

目的 探讨利用孕妇外周血中胎儿细胞进行产前诊断的可行性。 方法 采用套式聚合酶链反应 (polymerase chain reaction,PCR)技术扩增孕妇外周血中男性胎儿性别决定基因 (sex-determ ining region Y,SRY) ,并与胎儿实际性别相对照。 结果 74例孕 7～ 4 0周的孕妇中 38例怀男胎 ,其中 2 3例扩增出 Y特异带 ;另外 36例怀女胎孕妇中 ,仅 1例出现 Y特异带。SRY套式 PCR扩增系统在孕中期 ,孕晚期检查孕妇外周血中男胎灵敏度 (72 .7%、 71.4 % )、特异度 (10 0 .0 % )和符合率 (87.0 %、 90 .5 % )高 ,误诊率为 0 ,而在孕早期灵敏度 (5 0 .0 % )、特异度 (90 .0 % )及符合率 (6 3.3% )较低 ,误诊率 (10 .0 % )、漏诊率 (5 0 .0 % )较高。 结论 胎儿细胞在孕早期即存在于孕妇外周血中 ,但直接利用孕妇外周血中胎儿细胞检查

套式聚合酶链反应检测全血干斑HBV DNA

套式聚合酶链反应检测全血干斑ＨＢＶＤＮＡ蒋涛（南京妇产医院，２１０００４）本文参照ＧＵＰＴＡ等［１］的文献，应用套式聚合酶链反应进行全血干斑ＨＢＶＤＮＡ的测定，并与静脉血清作了比较，结果报告如下。１材料１．１标本来自本院分娩，其中乙肝孕妇５４例，健康...

套式聚合酶链反应检测HBV-DNA在母乳喂养中的意义

我国每年约有150万孕妇为HBV携带者,此类产妇可通过母婴传播,至少可使一半以上的婴儿感染HBV而成为慢性携带者,究其传播途径不外乎宫内感染、分娩期及产后(母乳及唾液)传播,为了在提倡母乳喂养同时,能有效减少HBV母婴传播,

套式PCR及测序方法用于痰标本中结核分枝杆菌rpoB耐药基因突变检测

目的应用套式PCR-DNA测序方法直接检测痰标本中结核分枝杆菌相关的rpoB基因突变,以期建立一种直接检测分枝杆菌耐利福平的快速方法,并评价其临床应用价值。方法采用套式PCR-DNA测序方法直接检测112例活动性肺结核患者和20例非结核性肺部疾病患者痰标本中结核分枝杆菌rpoB基因突变情况。同份痰标本同时做涂片抗酸染色,罗氏培养及菌型鉴定。结果112例活动性肺结核患者痰标本套式PCR扩增87例呈阳性,产物DNA测序31例有rpoB基因突变,其中分离出耐利福平株的32例痰中29例发生了基因突变,耐药突变率90.6%(29/32),39例菌阴(涂阴培阴)痰中有2例发生突变。分离出对利福平敏感株的37例痰中未发生突变,20例非结核性肺部疾病患者痰标本套式PCR扩增均为阴性,特异性100%。结论套式PCR-DNA测序可望为直接检测临床痰标本中结核分枝杆菌耐利福平的准确、特异、快速的方法。

发酵支原体、穿通支原体双重套式PCR检测研究

目的 应用双重套式 PCR技术同时检测发酵支原体 (Mf)和穿通支原体 (Mpe)。方法 以支原体 16 Sv RNA基因为靶基因 ,外套引物为 Mf 与 Mpe共用、内套引物则分别为 Mf 种特异和 Mpe种特异 ,建立双重套式扩增体系。结果 本双重套式 PCR不仅能分别扩增 Mf 和 Mpe的特异性 DNA,并能同时扩增 Mf 和 Mpe出现二条特征性条带 ,产物经测序证实。结论 双重套式 PCR是一种灵敏、特异和快速的 Mf 和

百色市献血人群中卡波氏肉瘤相关疱疹病毒DNA的套式PCR检测

目的了解百色市献血人群中卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)的流行状况。方法收集百色市部分无偿献血者肘静脉抗凝血474份,其中男259份,女215份,采用套式聚合酶链反应(n-PCR)方法对474例样本所提取的DNA进行KSHV特异性序列扩增,1.5%琼脂糖凝胶电泳,出现168bp条带为阳性结果。结果 474名献血者中9例阳性,阳性率1.90%;其中男性献血者中检出阳性者5例,阳性率为1.93%;女性献血者中检出4例,阳性率为1.86%。男女两组间阳性率采用χ2检验,差异无统计学意义(P>0.05)。结论百色市献血人群中存在KSHV的感染,不同性别献血者感染率差异无显著性。

套式PCR扩增SSU rDNA特定片段检测云南金平县疟原虫感染的研究

目的 采用套式 PCR系统诊断、鉴别人体疟原虫感染。 方法 采用已建立的套式 PCR系统扩增 SSU r DNA特定片段检测云南金平县恶性疟镜检阳性患者的 6份血样 ,并设阳性与阴性对照。 结果 间日疟原虫、恶性疟原虫和三日疟原虫感染血样中分别扩增出 10 4 bp、10 2 bp和 115 bp预期大小的特定扩增带。正常人血、人源弓形虫、杜氏利什曼原虫 DNA及灭菌双蒸水均未产生特异扩增带。 6份血样中检出 4份 P.v.、P.f.和 P.m.的混合感染 ,1份 P.v.和 P.f .及 1份 P.f .和 P.m.的混合感染。 结论 该系统特异、灵敏、稳定 ,在诊断疟疾的同时可准确地判定混合感染 ,对疟疾的诊断、大规模流行病学研究及疫情监控等具有实际应用价值。