甲氨蝶呤鞘内注射对EGFR突变型奥希替尼耐药后肺腺癌脑膜转移患者的疗效及生存分析

背景与目的奥希替尼是治疗表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)突变肺腺癌患者的有效靶向治疗药物,然而,出现继发脑膜转移的耐药患者的后续治疗方式仍有待探讨。本研究旨在分析奥希替尼耐药后继发脑膜转移的患者接受甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)、鞘内注射的疗效、安全性和预后。方法回顾性分析2018年6月至2022年11月期间,34例接受甲氨蝶呤鞘内注射的奥希替尼治疗继发肺腺癌脑膜转移患者的临床资料。对比治疗前后患者的症状、实验室化验结果,分析治疗不良反应及生存期。结果进行MTX鞘内注射后,67.6%(23/34)的患者脑膜转移症状改善。其中,31例患者接受了增强头颅磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)复查,MRI结果提示,治疗前存在脑膜异常强化的10例患者中,30%(3/10)的患者强化较治疗前减轻。脑脊液化验提示,蛋白水平及肿瘤标志物水平较治疗前均有所下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。奥希替尼联合MTX鞘内注射的中位无进展生存期为2.6个月,中位总生存期为12.7个月。结论奥希替尼联合甲氨蝶呤鞘内注射治疗继发脑膜转移的EGFR突变型肺腺癌患者疗效显著,可延长患者生存期。

赖氨酸羟化酶2诱导肺癌HCC827细胞对奥希替尼耐药的机制研究

目的探讨奥希替尼对过表达赖氨酸羟化酶2(PLOD2)的HCC827细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其PLOD2诱导奥希替尼耐药的作用机制。方法应用LV-vector和LV-over/PLOD2慢病毒载体转染肺癌HCC827细胞,应用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot法检测PLOD2的表达情况,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测奥希替尼的抗细胞增殖能力,应用细胞划痕实验和Transwell实验检测肿瘤细胞的迁移和侵袭能力,应用免疫荧光法检测E-cadherin和vimentin的表达,应用Western blot法检测上皮间质转化(EMT)、FAK-PI3K/AKT和MAPK信号通路相关蛋白的表达。结果MTT检测结果显示,过表达PLOD2的HCC827-PLOD2细胞对奥希替尼的敏感性降低,半数抑制浓度>1000 nmol/L,耐药指数>100。细胞划痕实验结果显示,HCC827-PLOD2细胞迁移的距离为HCC827-vector细胞的(2.13±0.21)倍。Transwell结果显示,HCC827-PLOD2细胞的穿膜细胞数为(212.78±10.43)个,与对照组HCC827-vector细胞[(101.32±12.52)个]比较,差异有统计学意义(P<0.01)。免疫荧光检测结果显示,与HCC827-vector细胞比较,HCC827-PLOD2细胞中E-cadherin的表达下调,vimentin的表达上调;奥希替尼可下调HCC827-vector细胞中vimentin的表达,上调E-cadherin蛋白的表达,但对HCC827-PLOD2细胞中E-cadherin和vimentin的表达无明显调控作用。Western blot结果显示,过表达PLOD2可下调E-cadherin蛋白的表达,上调vimentin蛋白的表达,奥希替尼可抑制HCC827-PLOD2细胞中磷酸化表皮生长因子受体的表达,但对PLOD2、p-FAK、p-AKT、p-ERK和vimentin等蛋白的表达无明显抑制作用,对E-cadherin蛋白的表达亦无上调作用。结论PLOD2可能通过促进EMT的表达,激活FAK-PI3K/AKT及MAPK信号通路诱导奥希替尼耐药。

Rab26负性调控Nrf2增强肺癌耐药细胞对奥希替尼的敏感性

目的分析Rab26在奥希替尼耐药细胞中的表达及调控肺癌耐药细胞对奥希替尼敏感性的作用和机制。方法采用浓度梯度递增法诱导H1975细胞为奥希替尼耐药细胞株(H1975OR)。根据Western blot和qPCR检测H1975、H1975OR中Rab26与核因子红细胞2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)mRNA及蛋白表达水平。对Rab26进行过表达慢病毒感染H1975OR细胞(Rab26 OE组)后给予1μM奥希替尼处理48 h,通过CCK-8和TUNEL判断细胞活力和凋亡情况,用流式细胞术检测细胞ROS水平。用Western blot检测H1975和H1975OR中Nrf2蛋白经10 mM MG132处理8 h后的表达水平。对Nrf2进行siRNA转染H1975OR细胞后给予1μM奥希替尼处理48 h,通过CCK-8判断细胞活力,利用流式细胞术检测细胞ROS水平。结果H1975OR中Rab26 mRNA和蛋白表达低于H1975细胞(P<0.05),H1975OR中Nrf2蛋白表达高于H1975细胞(P<0.05),H1975OR组和H1975组之间的mRNA水平差异无统计学意义(P>0.05)。奥希替尼干预后Rab26 OE组的细胞活力低于Vector组,ROS水平和凋亡水平较Vector组升高(P<0.05)。Rab26 OE组中Nrf2蛋白表达水平较Vector组降低,两组间Nrf2 mRNA差异无统计学意义(P>0.05)。经MG132处理,Nrf2蛋白水平在Vector组和Rab26 OE组中升高(P>0.05)。敲低Nrf2,奥希替尼干预增加H1975OR细胞中ROS水平,抑制其细胞活力。结论Rab26可负性调控Nrf2蛋白表达,促进奥希替尼诱导的ROS的过度产生,促进细胞凋亡,增强肺癌耐药细胞对奥希替尼的敏感性。